彭光華 ，趙安娜 ，涂貽軒 ，嚴(yán)守雷 ，李潔 ，王清章

（1.西藏自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，拉薩，850000；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院；3.湖北省水生蔬菜保鮮加工工程技術(shù)研究中心）

西蘭花 （Brassica oleraceaL.var.botrytisL.）是十字花科蕓薹屬甘藍種的一個變種，深受人們喜愛，在世界范圍內(nèi)被廣泛食用[1]。采后極易出現(xiàn)擦傷等情況，造成微生物感染，導(dǎo)致采后病害發(fā)生，對西蘭花的運輸、貯藏有極大影響。西蘭花采后病害的發(fā)生與其環(huán)境有很大關(guān)系，西蘭花采后衰老黃化既有其內(nèi)部原因，如采后呼吸躍變和營養(yǎng)水分的缺乏，也有來自外部的壓力，如病原真菌的侵染[2]。被病原菌感染后的西蘭花表面會出現(xiàn)霉點或斑紋，隨后會迅速衰老和黃化，嚴(yán)重影響西蘭花的外觀和品質(zhì)[3]。調(diào)查表明，西蘭花貯藏期病害主要有菌核病、細(xì)菌性腐爛及霜霉病等[4]。貯藏的溫度和濕度會影響西蘭花貨架期，有研究表明，西蘭花貯藏溫度在20℃以上時，其貨架期只有1~3 d[5]。郭香風(fēng)等[6]研究表明，與室溫相比，4℃貯藏西蘭花能延緩其褪綠、黃化和褐變，將貨架期延長6 d；將采后的西蘭花直接在0℃或5℃冷藏，貯藏期分別達到了34.7 d和17.4 d[7]。說明適當(dāng)?shù)臏囟瓤梢杂行б种撇≡那秩?，延緩西蘭花的衰老、萎蔫和黃化。本文將西蘭花在不同的溫度條件下保濕不同時間，通過濕培養(yǎng)觀察發(fā)病情況，探討不同溫度、不同保濕時間對西蘭花采后病害的控制效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

西蘭花：購于武漢市中百超市。

供試菌株：Alternaria alternata菌株WH1-21和Fusarium incarnatum菌株WH5-1，來自武漢市采集的西蘭花分離的主要致病菌鏈格孢菌和鐮刀菌。

試驗時間：2016年12月至2017年1月。

1.2 試驗方法

①菌碟接種 選擇致病力較強的A.alternata菌株WH1-21和F.incarnatum菌株WH5-1進行接種。2種菌株分別先在PDA平板上培養(yǎng)5 d，然后用打孔器打取直徑為6 mm的菌絲塊，用無菌挑針分別接種至新鮮無感染的西蘭花莖切面的正中央，將接種好的西蘭花花莖放置在鋪有吸水紙的直徑為90 mm的培養(yǎng)皿中并用保鮮膜封好， 分 別 放在 5、10、15、20、25、30℃的溫度下， 并設(shè)置 0、12、24、36、48、72 h等不同時間，濕度均為90%。在塑料盆中擺放整齊，并置入設(shè)置不同溫度的培養(yǎng)箱中，每個處理設(shè)置3個重復(fù)并設(shè)置空白對照，保濕培養(yǎng)觀察發(fā)病情況，3 d后測量病斑直徑。

②孢子液接種 選擇致病力較強的A.alternata菌株WH1-21和F.incarnatum菌株WH5-1進行孢子液接種。首先制備孢子液，將菌株在PCA培養(yǎng)基上置于22℃、16 h光照8 h黑

暗的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；5 d后在超凈工作臺中用無菌棉簽將表面菌絲刮掉，并用無菌水沖洗干凈殘余菌絲，吹干表面水分，蓋上蓋子不封口置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)4～5 d產(chǎn)孢；產(chǎn)孢結(jié)束后用無菌水洗滌菌落表面的孢子，4層紗布過濾，將孢子濾液收集在小燒杯中，用血球計數(shù)板測定孢子濃度，濃度調(diào)節(jié)至1×106CFU/mL，裝入小噴壺用于接種。

選取新鮮無感染的西蘭花分成大小一致的小花球，用30%的酒精預(yù)處理2 min后甩干，置于鋪有吸水紙的小燒杯中，將噴壺內(nèi)制備好的孢子液噴接1 mL至小花球表面，用保鮮膜封住燒杯口，分別在 5、10、15、20、25、30℃ 的 溫 度 下 放 置 0、12、24、36、48、72 h，濕度保持 90%，3 d 后觀察其發(fā)病情況并測量發(fā)病面積。

表1 不同溫度不同保濕時間下菌株WH1-21接種西蘭花莖切面病斑直徑

圖1 不同溫度不同保濕時間下菌株WH1-21接種西蘭花莖切面發(fā)病情況（3 d）

2 結(jié)果與分析

2.1 WH1-21菌絲塊接種西蘭花莖切面發(fā)病情況

由表1和圖1可以看出，西蘭花莖切面在5、10℃條件下接種菌株WH1-21均不發(fā)病，在5℃下組織狀態(tài)良好，即使不采取保濕措施也無明顯失水現(xiàn)象，但在10℃條件下，西蘭花莖在保濕時間0～24 h有輕微失水現(xiàn)象，24 h以上的則無明顯失水現(xiàn)象且無病斑產(chǎn)生；在15℃時，花莖發(fā)病病況整體較輕，但病斑直徑隨著保濕時間的延長而增大，在保濕72 h時病斑直徑達到最大，為11.3 mm；在20℃時，未經(jīng)保濕處理的（保濕時間0 h）出現(xiàn)了失水現(xiàn)象，保濕時間越長，花莖發(fā)病情況越嚴(yán)重，保濕48 h內(nèi)病斑直徑不超過20.0 mm，保濕時間達72 h時病斑直徑增至29.7 mm。20~30℃，保濕時間0～12 h下，隨著溫度的升高莖切面失水越來越嚴(yán)重，病斑直徑較小，說明病原菌侵染組織需一定的濕度；保濕時間24~72 h，西蘭花莖切面上的病斑直徑隨著保濕時間的增加而增大，在30℃下保濕72 h后整個塊莖幾乎完全發(fā)病，病斑直徑達28.7 mm，說明病原菌的致病力在適宜的溫度下隨著保濕時間的增長而增強。

2.2 WH1-21孢子液接種西蘭花花球發(fā)病情況

由表2和圖2可以看出，西蘭花花球在溫度條件為5℃和10℃時，于不同的保濕時間培養(yǎng)下均不發(fā)病，且花球上的花莖依然緊實，色澤保持良好，這是可能由于沒有達到孢子的萌發(fā)溫度，孢子沒有萌發(fā)無法侵染花球。15℃下，花球保濕48 h以內(nèi)未發(fā)病，但花蕾松散且色澤已稍暗沉，保濕72 h后，可觀察到花球表面有少

量孢子萌發(fā)產(chǎn)生菌絲侵染組織，但發(fā)病情況較輕，發(fā)病表面積百分比僅為6.0%。在20℃條件下，花球在保濕0～36 h時不發(fā)病，但西蘭花花蕾松散且出現(xiàn)黃化現(xiàn)象；當(dāng)保濕時間達到48 h時，噴灑在花球上的孢子液開始萌發(fā)，西蘭花花球發(fā)病較嚴(yán)重，發(fā)病面積近35%，保濕72 h增至51.2%。在25℃時，花球保濕時間為36 h開始發(fā)病，保濕時間越長，花球發(fā)病越嚴(yán)重，48 h時發(fā)病面積近70%，72 h時發(fā)病面積占比達到97.5%。在30℃時，花球保濕24 h即開始發(fā)病，發(fā)病程度隨著保濕時間的延長而加重，但在保濕時間為48 h和72 h時，發(fā)病表面積百分比均低于25℃時，說明過高的溫度不利于菌絲在花蕾上的生長和侵染。

表2 不同溫度不同保濕時間下菌株WH1-21接種西蘭花花球發(fā)病表面積

圖2 不同溫度不同保濕時間對菌株WH1-21接種西蘭花花球致病力的影響

2.3 WH5-1菌絲塊接種西蘭花莖切面發(fā)病情況

由表3和圖3可以看出，西蘭花莖切面在5℃和10℃，于不同的保濕時間下幾乎無明顯發(fā)病癥狀。在15℃時，菌絲塊開始侵染西蘭花塊莖，但保濕時間從0~36 h的病斑直徑相差不大，在保濕72 h時病斑直徑最大，為13.7 mm。在20℃，保濕時間達到72 h時病斑直徑增大至22.3 mm。在25℃和30℃條件下培養(yǎng)的西蘭花塊莖，保濕時間較短時，組織容易失水干癟不利于病原菌侵染，隨著保濕時間的延長，病斑直徑幾乎成直線增長，在25℃下保濕72 h后病斑直徑達到39.7 mm，病原菌在組織表面產(chǎn)生白色菌絲并侵染到組織內(nèi)部，去除表面濃密的白色菌絲，可以看到西蘭花塊莖內(nèi)部組織軟化腐爛，并發(fā)出惡臭味。

2.4 WH5-1孢子液接種西蘭花花球發(fā)病情況

由表4和圖4可以看出，在西蘭花花球上接種的菌株WH5-1孢子液，在5℃和10℃的不同保濕時間條件下，均沒有萌發(fā)，西蘭花花蕾依然保持緊實且沒有黃化。在15℃條件下，保濕時間在0~48 h內(nèi)，均未發(fā)現(xiàn)孢子萌發(fā)侵染現(xiàn)象，當(dāng)保濕時間達到72 h時，花球上少量孢子萌發(fā)產(chǎn)生菌絲侵染花球，并且色澤沒有10℃下的好，但整體發(fā)病情況較輕，發(fā)病比為5.4%。20℃時，花蕾在保濕時間0～24 h時未表現(xiàn)出發(fā)病，但花球已經(jīng)開始松散，當(dāng)保濕時間達到36 h時，花球表面開始有白色菌絲產(chǎn)生，發(fā)病表面積百分比為6.4%，保濕時間為48 h時發(fā)病表面積百分比顯著增大至36.6%，保濕72 h后病斑面積增至67.4%。在25℃和30℃時，孢子保濕時間在0～24 h時基本未萌發(fā)，花蕾開始黃化，失水枯萎導(dǎo)致品質(zhì)嚴(yán)重下降，在保濕時間達到36 h和48 h時，孢子大量萌發(fā)產(chǎn)生菌絲侵染花蕾，致病力顯著增強，花球發(fā)病面積增大，在25℃下保濕時間48 h時發(fā)病表面積百分比為63.7%，當(dāng)保濕時間增至72 h后發(fā)病表面積百分比最大，為90.2%，表面有白色菌絲覆蓋，內(nèi)部組織有褐變腐爛現(xiàn)象。

3 結(jié)論與討論

由試驗結(jié)果可知，在低溫5℃和10℃條件下，0~72 h內(nèi)，西蘭花接種致病菌株后均未發(fā)病。適宜溫度下，菌株WH1-21侵染花球時，孢子大量萌發(fā)，產(chǎn)生褐黑色菌絲覆蓋花球表面，進而深入組織內(nèi)部，嚴(yán)重的延伸至花莖，導(dǎo)致花莖產(chǎn)生黑斑，并且在25℃溫度條件下發(fā)病最為嚴(yán)重，這與刁小琴等[3]的研究結(jié)果稍有差異，說明相同屬下的不同小種的最適生長溫度有差異。而菌株WH5-1在花球上的孢子萌發(fā)產(chǎn)生白色菌絲，菌絲慢慢深入組織內(nèi)部利用營養(yǎng)物質(zhì)快速生長，進而導(dǎo)致組織細(xì)胞分解壞死而腐爛變質(zhì)。20℃、25℃和30℃條件下有利于病原菌的侵染，雖然20℃條件下花球上的菌絲比30℃條件下的濃密，但由于溫度過高會加速花球自身的組織代謝，造成花球因葉綠素分解而黃化，組織內(nèi)細(xì)胞失水而萎蔫，并且由于病原菌的侵染更易腐爛，這與陳慧[8]的研究結(jié)果相符。

表3 不同溫度不同保濕時間下菌株WH5-1接種西蘭花莖切面病斑直徑

圖3 不同溫度不同保濕時間下菌株WH5-1接種西蘭花莖切面病斑直徑

通過了解溫度和保濕時間對西蘭花致病力的影響，我們可以得知，在貯藏運輸過程中，應(yīng)盡量使西蘭花處于較低的溫度條件下，雖然高濕度利于西蘭花發(fā)病，但如果不采取保濕措施，西蘭花容易失水而發(fā)黃萎蔫，所以最好在西蘭花表面包裹保鮮膜防止水分散失，同時置于較低溫度下，就可以較好地保鮮和抑制病害發(fā)生。

表4 不同溫度不同保濕時間下菌株WH5-1接種西蘭花花球發(fā)病表面積

圖4 不同溫度不同保濕時間對菌株WH5-1接種西蘭花花球致病力的影響（3 d）