龐偉鴻 陳曉煜 葉曉云 李 艷 陳亞珍

廣東省湛江中心人民醫(yī)院，廣東湛江 524045

地中海貧血是一種珠蛋白鏈合成比例失衡的單基因遺傳病，據(jù)受損珠蛋白的不同可分為α-地中海貧血和β-地中海貧血兩大類，均呈常染色體隱性遺傳。α-地中海貧血主要由發(fā)生于16 號(hào)染色體短臂末端α-珠蛋白基因簇內(nèi)包含α 基因在內(nèi)的缺失引起，少數(shù)由點(diǎn)突變引起，β-地中海貧血主要由發(fā)生于位于11 號(hào)染色體短臂的β 基因內(nèi)的點(diǎn)突變引起[1-2]。其臨床癥狀差異較大，輕者與常人無(wú)異，重者會(huì)出現(xiàn)胎兒水腫或夭折現(xiàn)象，有些患者需要終生輸血來(lái)維持生活，給家庭社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)[3]。湛江本就屬于地中海貧血高發(fā)地區(qū)，但是自2003 年10 月1 日國(guó)家婚姻法確定取消了強(qiáng)制婚前檢查（包括了地中海貧血檢查）開(kāi)始，使得一部分夫婦取消了婚檢甚至產(chǎn)檢，造成嬰兒出生缺陷率上升，為下一代的健康埋下了隱患。因此對(duì)該地區(qū)中可能攜帶地中海貧血基因兒童進(jìn)行篩查，運(yùn)用先進(jìn)的PCR+膜技術(shù)進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)，并統(tǒng)計(jì)該地區(qū)兒童地中海貧血多發(fā)基因類型和其發(fā)生率，可有效地減少育齡夫婦因攜帶同型地中海貧血基因而可能生出中、重型地中海貧血患兒的機(jī)率。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從2015 年1 月～2017 年12 月在湛江中心人民醫(yī)院門診和住院部就診的疑診地中海貧血兒童共478 例，其中男251 例，女227 例，年齡3 ～12 歲，平均（7.5±1.4）歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采用無(wú)菌抗凝管（EDTA 抗凝管），抽取靜脈血2mL 混勻，樣本采集后應(yīng)立即送檢。4℃保存不超過(guò)3d，-20℃保存不超過(guò)3 個(gè)月進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本運(yùn)送時(shí)建議采用低溫保存運(yùn)送。

1.2.2 αβ 地中海貧血基因檢測(cè) 取待檢血液200μL，具體操作步驟嚴(yán)格按照作業(yè)書(shū)規(guī)程進(jìn)行。觀察膜條上出現(xiàn)的藍(lán)色斑點(diǎn)顯色來(lái)判定結(jié)果，該檢測(cè)用于中國(guó)人常見(jiàn)的3 種α 缺失型地中海貧血（-SEA、-α3.7和-α4.2），2 種α 突變型地中海貧血（CS、QS）及11 種β 突變型地中海貧血（CD41-42、CD43、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVS Ⅰ-1、CD27-28）。若在突變或缺失檢測(cè)探針處出現(xiàn)顯色強(qiáng)度與相應(yīng)的正常對(duì)照探針相近的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，則該位點(diǎn)為地中海貧血突變或缺失的雜合子。

2 結(jié)果

2.1 本組478例檢測(cè)者檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)過(guò)基因檢測(cè)確診為地中海貧血280 例，其中α-地中海貧血159 例，β-地中海貧血107 例，α-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血14 例，還發(fā)現(xiàn)一例有巴氏綜合征（胎兒水腫）。其中α-地中海貧血以東南亞型缺失的α-地中海貧血為主，數(shù)量達(dá)111 例（23.22%），其次是3.7 雜合缺失的α-地中海貧血數(shù)量為36 例（7.52%）。β-地中海貧血以41-42 位點(diǎn)純合突變的β-地中海貧血為主，數(shù)量為45 例（9.41%），其次是654 位點(diǎn)雜合突變的β-地中海貧血為31 例（6.48%）。見(jiàn)表1。

2.2 α-地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果

159 例α-地中海貧血共檢測(cè)出185 個(gè)含有6種常見(jiàn)α-地中海貧血等位基因，攜帶率、頻率和分布情況，見(jiàn)表2。

表1 478例檢測(cè)者檢測(cè)結(jié)果

2.3 β-地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果

107 例β-地中海貧血共檢測(cè)出115 個(gè)含有10 種常見(jiàn)等位基因，攜帶率、頻率和分布情況，見(jiàn)表3。

表2 α-地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果

表3 β-地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果

3 討論

流行病學(xué)資料顯示，地中海貧血廣泛流行于地中海沿岸、東南亞及我國(guó)南方地區(qū)，其發(fā)生率、基因突變類型和頻率存在明顯的種族地域及人群差異?；蚴怯芍榈鞍祖湹姆肿咏Y(jié)構(gòu)及合成來(lái)決定的，若正常人父母雙方各繼承2 個(gè)α 珠蛋白基因（αα/αα）合成足夠的α 珠蛋白鏈；自父母雙方各繼承1 個(gè)β 珠蛋白基因合成足夠的β 珠蛋白鏈。因珠蛋白基因的缺失或突變，肽鏈合成障礙致使發(fā)病，β 及α 在地中海貧血中是常見(jiàn)的類型。地中海貧血的檢測(cè)方法包括地中海貧血的初篩試驗(yàn)和基因確診，前者主要有平均紅細(xì)胞體積MCV、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量MCH 和紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)及血紅蛋白電泳，可以初步診斷地中海貧血[4-5]；而后者則依靠地中海貧血基因的分子生物學(xué)診斷。本研究中的478 例檢測(cè)者已有302 例經(jīng)初步懷疑是地中海貧血，在進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)后有280 例確診為地中海貧血，發(fā)生率為58.57%。其中α-地中海貧血159 例，占33.26%，β-地中海貧血107例，占22.38%。α-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血14 例，占2.93%；與賀鈺等報(bào)道的檢測(cè)結(jié)果[3]相符。由于中型和重型的α 或β 地中海貧血均為致死性或致殘性血液病，目前尚無(wú)理想的治愈方法，因此，通過(guò)大規(guī)模人群的遺傳篩查、基因分型檢測(cè)、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷，避免受累胎兒的出生是最佳選擇[6-8]。

從本地區(qū)兒童地中海貧血發(fā)生情況來(lái)看，結(jié)果依然不容樂(lè)觀。自2003 年國(guó)家取消強(qiáng)制婚前檢查，我國(guó)出生缺陷發(fā)生率有所上升[9-11]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示[12-13]：地中海貧血發(fā)生率沒(méi)有得到改善反而有所上升。此外，還發(fā)現(xiàn)14 例αβ 復(fù)合型地中海貧血，1 例巴氏綜合征（胎兒水腫）。由于αβ 復(fù)合型地中海貧血的血紅蛋白電泳表現(xiàn)不典型，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行α 和β 地中海貧血基因檢測(cè)，避免復(fù)合型地中海貧血的漏診。

159 例α-地中海貧血共檢測(cè)出185 個(gè)α-地中海貧血等位基因，攜帶率為38.70%，以-SEA 基因?yàn)樽疃?11 個(gè)，攜帶率為23.22%，構(gòu)成比占60.00%。其次是-α3.7 和-α4.2 構(gòu)成比分別為19.47%、9.73%；此結(jié)果與同類研究結(jié)果吻合[14]。107 例β-地中海貧血患者共檢測(cè)出115 個(gè)β-地中海貧血患者等位基因，攜帶率為24.06%，其中β41-42 基因45 例，攜帶率為9.41%，構(gòu)成比占39.13%。其次是β654和β17 構(gòu)成比分別為26.96%、9.56%。此結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道[15]的相符。地中海貧血基因同型攜帶者婚配的下一代有1/4 的機(jī)會(huì)患重癥地中海貧血[16]。因此，監(jiān)測(cè)本地區(qū)人群中地中海貧血患者的基因類型和頻率，對(duì)減少地中海貧血的危害，提高本地區(qū)的人口素質(zhì)具有重要的意義。

總而言之，基因檢測(cè)技術(shù)可精準(zhǔn)的檢測(cè)出兒童地中海貧血的類型，初步了解了湛江地區(qū)兒童地中海貧血的基因突變普，為地中海貧血的診斷提供了科學(xué)的依據(jù)，更是促進(jìn)了湛江地區(qū)地中海貧血的防治工作，對(duì)提高湛江地區(qū)得到人口質(zhì)量有著重大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。