吳鳳天 楊 英 王云云 朱海紅 陳 智

TAM酪氨酸激酶受體是新近發(fā)現(xiàn)的具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)的信號(hào)蛋白分子。作為Toll樣受體(Toll like receptors, TLRs)及細(xì)胞因子誘導(dǎo)炎性免疫反應(yīng)的多效性抑制劑，TAM受體家族在炎癥環(huán)境下通過調(diào)控細(xì)胞因子等進(jìn)一步調(diào)控固有免疫，促進(jìn)組織修復(fù)，減輕炎性反應(yīng)[1]。和其他酪氨酸激酶受體家族(receptor tyrosine kinases, RTKs)一樣，它的下游分子也參與到生長(zhǎng)因子信號(hào)通路中，這些下游分子在人體很多腫瘤組織中呈過表達(dá)狀態(tài)，并且和腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等相關(guān)。TAM家族的獨(dú)特之處在于它有特殊的配體結(jié)構(gòu)，這些配體在固有免疫和適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用[2]。本文將圍繞TAM受體家族配體、TAM家族的免疫調(diào)節(jié)作用以及TAM受體家族與肝臟疾病(包括肝癌、肝衰竭、肝纖維化和丙肝等)發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系進(jìn)行闡述，有助于深入理解有關(guān)TAM受體對(duì)各種肝臟疾病的免疫調(diào)節(jié)作用。

一、TAM受體家族的配體

最早發(fā)現(xiàn)的TAM受體家族的兩個(gè)共同配體蛋白是Gas 6和Pro S。兩者同為維生素K依賴蛋白，Pro S主要由肝細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，Gas 6主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞，兩者參與到MERTK介導(dǎo)的凋亡細(xì)胞吞噬清除過程；巨噬細(xì)胞表面的MERTK 蛋白可以通過與凋亡細(xì)胞表面翻轉(zhuǎn)的磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine, PtdSer)結(jié)合，促進(jìn)巨噬細(xì)胞更早地發(fā)揮胞吞作用(圖1)[3]。

圖1 巨噬細(xì)胞通過TAM受體發(fā)揮胞吞作用

近年來發(fā)現(xiàn)，半乳糖凝集素3(galectin-3)、桶蛋白(tubby)和桶裝樣蛋白1(tubby‐like protein 1,TULP-1)也是TAM受體家族的配體。其中半乳糖凝集素3主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，在組織損傷時(shí)表達(dá)上升，例如在心肌梗死或急/慢性肝損傷時(shí)，它募集纖維母細(xì)胞至損傷組織，促進(jìn)組織纖維化。半乳糖凝集素3有一系列下游信號(hào)級(jí)聯(lián)，但與TAM受體家族相關(guān)的信號(hào)作用目前尚不明確，目前僅知它通過MERTK分子來發(fā)揮吞噬作用，仍需進(jìn)一步研究[4]。而tubby 和TULP-1是TAM受體家族中MERTK的專有配體，它們表達(dá)在視網(wǎng)膜上皮支持細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面，促進(jìn)細(xì)胞胞吞作用[5]。

二、TAM家族在免疫調(diào)節(jié)中的作用

TAM受體家族TAM是負(fù)向調(diào)節(jié)受體，是Toll樣受體及細(xì)胞因子誘導(dǎo)炎性免疫反應(yīng)的多效性抑制劑，TAM受體的減少會(huì)引起組織持續(xù)的炎性損傷，這在無菌或者是感染性炎癥的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭卸伎梢缘玫津?yàn)證。在模擬內(nèi)毒素血癥環(huán)境下，MERTK敲除的模型小鼠體內(nèi)存在持續(xù)高濃度的腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白介素1(interleukin-1,IL-1)并引起組織損傷，這些小鼠大部分發(fā)生了感染性休克甚至死亡[6]。Ruthin等表明大鼠樹突狀細(xì)胞的Toll樣信號(hào)通路激活并產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，這一過程可被TAM受體抑制，尤其是MERTK和Axl分子。TAM受體可以介導(dǎo)細(xì)胞因子抑制因子1(suppressors of cytokine signaling 1,SOCS 1)及細(xì)胞因子抑制因子3(suppressors of cytokine signaling 3,SOCS 3)參與到Toll樣受體信號(hào)通路激活的過程，并在其中一些節(jié)點(diǎn)發(fā)揮抑制細(xì)胞因子生成的作用。這也證明了TAM受體家族是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子從而實(shí)現(xiàn)固有免疫的調(diào)控。反過來SOCS 1及SOCS 3的持續(xù)增加也會(huì)使下游TAM受體激活，在這個(gè)負(fù)反饋過程中，細(xì)胞因子作為TLR信號(hào)通路的產(chǎn)物與它們各自的受體結(jié)合并激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1(signal transducers and activators of transcription1，STAT 1)，作為炎性細(xì)胞因子，STAT 1也可以誘導(dǎo)Axl的表達(dá)。

在Gas 6或Pro S的協(xié)同作用下，Axl可以直接結(jié)合白細(xì)胞干擾素(interferon, IFN)相關(guān)受體，這個(gè)蛋白復(fù)合物可以改變STAT 1下游途徑轉(zhuǎn)而激活SOCS 1及SOCS 3，從而阻斷被病原體活化的TLR信號(hào)通路及其下游細(xì)胞因子的釋放[7]。根據(jù)以往對(duì)TLR信號(hào)通路的大量研究，筆者已經(jīng)認(rèn)識(shí)到TLR信號(hào)通路再識(shí)別和清除外來病原體，引發(fā)炎性反應(yīng)，同時(shí)啟動(dòng)體內(nèi)固有免疫應(yīng)答，調(diào)節(jié)特異性免疫等發(fā)揮著重要作用。但在炎癥恢復(fù)階段，負(fù)向調(diào)控分子必須及時(shí)終止炎性反應(yīng)，才可以避免炎癥的進(jìn)一步擴(kuò)大及慢性炎癥對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的損傷。而上述研究以及筆者所在實(shí)驗(yàn)室的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果均證實(shí)TAM受體家族在負(fù)向調(diào)控TLR信號(hào)通路誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)方面起著關(guān)鍵作用。

另外，巨噬細(xì)胞的TAM信號(hào)通路既可以促進(jìn)細(xì)胞發(fā)揮胞吞作用，又可以影響細(xì)胞因子的釋放，從而促進(jìn)傷口愈合及抑制炎癥。MERTK介導(dǎo)的胞吞作用促進(jìn)了Th 2型細(xì)胞因子的釋放，這些細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素4(interleukin-4,IL-4)，白細(xì)胞介素10(interleukin-10,IL-10)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子beta(transforming growth factor beta, TGF-β)[8]。一項(xiàng)小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明這一作用是通過抑制NF-κB信號(hào)通路、激活磷脂酰肌醇-3(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)。凋亡細(xì)胞的攝入產(chǎn)物進(jìn)一步誘導(dǎo)了MERTK表達(dá),細(xì)胞膜碎片的膽固醇代謝物激活了肝X受體(liver X receptor, LXR)，LXR結(jié)合并激活了MERTK啟動(dòng)子，并促進(jìn)在組織損傷過程中抑炎因子的釋放[9]。目前TAM受體的促進(jìn)劑及抑制劑均已研制成功，若能深入研究明確TAM受體在炎性反應(yīng)中如何有效調(diào)控固有免疫應(yīng)答等，或可為病原體誘發(fā)過度炎性反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體免疫失衡(例如重癥肺炎、急性肝衰竭等)這一問題提供新的解決方法。

三、TAM受體家族與肝癌

TAM受體作為酪氨酸激酶受體家族的一份子，不僅具有致癌性，還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生存，產(chǎn)生耐藥性并向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[10]。正如前文提到的，TAM受體相較其他RTKs而言，其獨(dú)特的一點(diǎn)正是其配體Gas 6可以和凋亡細(xì)胞細(xì)胞膜暴露的PtdSer結(jié)合，激活巨噬細(xì)胞表面的MERTK分子，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的胞吞作用并誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向抑炎方向極化。在腫瘤內(nèi)部，不僅存在大量凋亡細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞還能自分泌或旁分泌配體Gas 6，腫瘤細(xì)胞微環(huán)境處在抑炎的免疫抑制狀態(tài)下，更加有利于它的生存及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。He等研究表明，在體外實(shí)驗(yàn)中，肝癌細(xì)胞表面Axl的表達(dá)和肝癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。用小干擾RNA抑制Axl在小鼠肝癌細(xì)胞株Hca-F和Hca-P的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖能力明顯降低。無論是體外實(shí)驗(yàn)還是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)都顯示，配體Gas 6通過Axl介導(dǎo)的某種信號(hào)通路來發(fā)揮促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用，其中可能和Axl引起Cyr 61蛋白下調(diào)有關(guān)，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)支持論證[11]。

在肝細(xì)胞癌中，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移常與肝癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition ,EMT)相關(guān)。Reichl等研究表明EMT轉(zhuǎn)化的肝癌細(xì)胞中Axl受體存在上調(diào)現(xiàn)象。在體外實(shí)驗(yàn)中， Axl表達(dá)下調(diào)會(huì)引起間質(zhì)轉(zhuǎn)化的肝癌細(xì)胞的侵襲性和跨內(nèi)皮遷移能力減弱，反之Axl過表達(dá)會(huì)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移定植。TGF-β在體外能抑制肝細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在肝細(xì)胞癌中會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抑制Axl的表達(dá)會(huì)減弱肝細(xì)胞對(duì)TGF-β介導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制作用的耐受性[12]。這一作用可能與Axl/14-3-3ζ信號(hào)通路相關(guān)。 Axl/14-3-3ζ信號(hào)通路激活會(huì)引起Ser 213處Smad 3接頭區(qū)(Smad 3L)的磷酸化，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞中TGF-β靶基因如PAI 1，MMP 9和Snail的上調(diào)以及增強(qiáng)的TGF-β1在間質(zhì)肝癌細(xì)胞中的分泌[13]?？傊伟┘?xì)胞上Axl高表達(dá)會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞的血管侵襲，促進(jìn)肝移植后腫瘤復(fù)發(fā)甚至減低患者遠(yuǎn)期生存率[10]。一項(xiàng)關(guān)于索拉菲尼耐藥的肝細(xì)胞癌研究發(fā)現(xiàn)，TYRO3在肝癌細(xì)胞尤其是索拉菲尼耐藥的肝癌細(xì)胞中表達(dá)明顯升高。該研究前期從體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩個(gè)層面確認(rèn)miR-7-5p (miR-7)在人肝細(xì)胞癌中發(fā)揮的抑癌作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TYRO3通過PI3K/PKB途徑調(diào)節(jié)Huh-7細(xì)胞的增殖、遷移和侵入，并且隨著索拉菲尼耐藥的產(chǎn)生而表達(dá)顯著升高。而miR-7可靶向作用于TYRO3基因，從而有效抑制了索拉非尼敏感和索拉非尼耐藥Huh-7細(xì)胞中的TYRO3表達(dá)，進(jìn)一步抑制癌細(xì)胞的遷移和侵襲[11]。

四、TAM受體家族與肝癌治療靶點(diǎn)

TAM受體在促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換、侵襲及轉(zhuǎn)移等腫瘤生物學(xué)行為發(fā)揮多種作用，并與晚期肝癌的一線藥物索拉菲尼的耐藥有關(guān)?？ú┨婺崾切屡d多激酶抑制劑，作用靶點(diǎn)包括除了TAM受體中的Axl，還包括c-MET、RET、ROS1、VEGFR1-3等。它的一項(xiàng)2期、隨機(jī)停藥臨床實(shí)驗(yàn)顯示出對(duì)肝癌具有抗腫瘤效果[14]。為了評(píng)估卡博替尼對(duì)于接受索拉菲尼或者其余系統(tǒng)治療后的晚期肝癌患者的抗腫瘤作用，一項(xiàng)國(guó)際多中心隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的3期臨床試驗(yàn)因此展開。最后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明使用卡博替尼患者的中位生存期為10.2個(gè)月(安慰劑8.0個(gè)月)，無進(jìn)展生存期為5.2個(gè)月(安慰劑1.9個(gè)月)，這顯示其對(duì)晚期肝細(xì)胞癌具有抗腫瘤效果，對(duì)于接受過系統(tǒng)治療的晚期肝癌患者，卡博替尼相較于安慰劑均可延長(zhǎng)患者的總生存期及無進(jìn)展生存期[15]?？深A(yù)見這一臨床實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)一步激發(fā)了研究者在肝癌領(lǐng)域中對(duì)TAM受體的研究熱情，目前急需解決的問題是進(jìn)一步研究TAM受體在肝癌中發(fā)揮的抗腫瘤作用的具體機(jī)制。根據(jù)2015年版的《慢性乙型肝炎防治指南》提供的數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)肝癌患者中由乙型肝炎引起的約占80%[16]。另外結(jié)合TAM受體在炎性反應(yīng)中對(duì)機(jī)體免疫的調(diào)節(jié)作用，為避免炎癌轉(zhuǎn)換，探索其通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答來實(shí)現(xiàn)抗腫瘤效應(yīng)的可行性。

五、TAM受體家族與肝衰竭

在急性肝衰竭和慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure,ACLF)中均有關(guān)于MERTK信號(hào)通路的相關(guān)研究，MERTK在急性肝衰竭中可能發(fā)揮保護(hù)作用。小鼠肝臟模型的肝動(dòng)脈結(jié)扎后不久，血清Gas 6水平升高。通過蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)分析肝勻漿組織提取物，提示在缺血性損傷過程中MERTK磷酸化而非Axl選擇性增加，這表明MERTK介導(dǎo)的信號(hào)通路優(yōu)先發(fā)揮作用。Gas 6敲除小鼠表現(xiàn)出更活躍的炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平(IL-1A、TNF-α)，并在部分肝缺血損傷后患者中更容易出現(xiàn)暴發(fā)性肝衰竭。補(bǔ)充重組Gas 6蛋白可以大大緩解暴發(fā)性肝衰竭的發(fā)生[17]。在體外實(shí)驗(yàn)中，仍存在Gas 6對(duì)細(xì)胞因子的調(diào)控作用，同樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在庫普弗細(xì)胞系上可以得到復(fù)制[18]。

肝衰竭患者發(fā)病的一個(gè)重要原因是全身炎性反應(yīng)。Bernsmeier等開展的研究顯示，和健康組及肝硬化組對(duì)比，慢加急性肝衰竭的患者外周血中MERTK陽性的單核細(xì)胞明顯增多，同時(shí)Gas 6、Pro S1、半乳凝素-3以及磷酸化的MERTK均升高，提示MERTK信號(hào)通路在肝衰竭時(shí)被激活。而用ACLF患者的血漿刺激健康人的單核細(xì)胞，同樣觀察到MERTK陽性表型的單核細(xì)胞增多。MERTK陽性單核細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)內(nèi)毒素的刺激不敏感。而再用小分子MERTK抑制劑作用于單核細(xì)胞，則發(fā)現(xiàn)可以恢復(fù)細(xì)胞對(duì)脂多糖刺激的反應(yīng)并產(chǎn)生TNF-α和IL-6。研究者認(rèn)為MERTK陽性單核細(xì)胞更容易發(fā)生跨內(nèi)皮遷移，并提出了一個(gè)建立動(dòng)態(tài)模型來觀察外周血單核細(xì)胞在損傷肝組織中的募集。研究結(jié)論得出，受損的肝組織可以導(dǎo)致MERTK表達(dá)增加。在全身炎性反應(yīng)中，內(nèi)皮功能障礙能使肝臟內(nèi)的單核細(xì)胞逆轉(zhuǎn)移到外周血液和局部淋巴結(jié)，可能會(huì)導(dǎo)致免疫休克及更易發(fā)生的膿毒血癥[18]。Taehoon Chun等在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，Axl可以通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞自噬來抑制NLRP 3炎性小體從而起到抑制肝臟炎性反應(yīng)的效應(yīng)[19]。

目前TAM家族在肝臟炎癥中的負(fù)反饋調(diào)節(jié)方面的基礎(chǔ)研究并不少見，但如何將成果進(jìn)一步轉(zhuǎn)化應(yīng)用于臨床之中，仍值得思考。

六、TAM受體家族與肝臟纖維化

在肝衰竭中，TAM受體家族可能有利于維持肝臟免疫穩(wěn)定狀態(tài)，但在慢性肝病中TAM受體則與肝臟纖維化密切相關(guān)。肝星狀細(xì)胞的激活在肝損傷進(jìn)展中起關(guān)鍵作用，在慢性肝病中，這些細(xì)胞分泌膠原蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，促進(jìn)肝臟纖維化并向肝硬化發(fā)展。已有小鼠實(shí)驗(yàn)證實(shí)TAM受體家族參與到慢性肝損傷過程中。暴露在四氯化碳中的模型小鼠，其肝星狀細(xì)胞的活化依賴于Gas 6介導(dǎo)的Axl的激活，進(jìn)而上調(diào)信號(hào)蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)和NF-κB(圖2)[20]。Axl的轉(zhuǎn)錄和翻譯增加也引起了下游肝臟巨噬細(xì)胞和星狀細(xì)胞的活化。在另一種慢性肝損傷模型中，用蛋氨酸-膽堿缺乏飼料喂養(yǎng)小鼠，使其誘發(fā)脂肪性肝炎，在這種飲食條件下，Gas 6基因敲除小鼠顯示肝星狀細(xì)胞及TGF-β的表達(dá)被抑制。此外，和野生型小鼠比較，肝臟壞死性炎癥和脂肪變性均延遲發(fā)生； TNF-α、IL-1β和巨噬細(xì)胞趨化蛋白1 的信使RNA表達(dá)均降低，并且7天后解剖Gas 6基因敲除的小鼠肝臟時(shí)，發(fā)現(xiàn)其肝臟的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)減少[20]。在Petta等[21]開展的一項(xiàng)700余例關(guān)于非酒精性肝硬化患者的臨床隊(duì)列研究中發(fā)現(xiàn)，攜帶MERTK AA等位基因的患者明顯比GA/GG等位基因患者的肝纖維化程度低，MERTK表達(dá)在人類肝臟星狀細(xì)胞表面并促進(jìn)肝纖維化的形成。

圖2 慢性炎癥下肝星狀細(xì)胞被Axl激活

七、TAM受體家族與丙肝

最近在慢性丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染的患者研究中發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)烈的干擾素反應(yīng)可以促進(jìn)病毒清除。慢性丙型肝炎患者體內(nèi)發(fā)生干擾素Ⅰ/Ⅲ型信號(hào)通路的長(zhǎng)期激活及其下游IFN刺激基因(IFN-stimulated genes, ISGs)的高基線表達(dá)，這使得丙肝患者在接受治療之前是不太可能獲得持續(xù)的病毒學(xué)應(yīng)答的，人們認(rèn)為這是由于缺乏對(duì)ISGs的敏感度而導(dǎo)致的。這種現(xiàn)象的機(jī)制沒有完全闡明。然而，Read等[22]研究表明，無論在體外或體內(nèi)模型中，慢性HCV感染的肝細(xì)胞中Axl表達(dá)上調(diào)。

綜上所述，TAM受體及其配體是廣泛的在肝臟中表達(dá)并有助于肝臟免疫調(diào)節(jié)，通過細(xì)胞因子信號(hào)通路調(diào)節(jié)固有免疫來維持穩(wěn)態(tài)。目前關(guān)于TAM受體家族的研究主要聚焦在免疫調(diào)節(jié)和腫瘤生物學(xué)兩個(gè)方面。正如上文所說， TAM受體在肝衰竭中發(fā)揮著抑制免疫應(yīng)答過度活化，阻止炎癥重癥化的重要作用。在慢性肝病中，TAM受體可能參與促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化過程，引起肝臟纖維化。不過目前TAM受體對(duì)其他炎性肝臟疾病的影響仍未闡述清楚，因此，進(jìn)一步研究TAM信號(hào)在其他免疫介導(dǎo)的肝臟炎癥疾病中的作用，并針對(duì)肝病時(shí)異常TAM信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)域進(jìn)行靶向干預(yù)，或許會(huì)開創(chuàng)肝病治療的新局面。同時(shí)，TAM受體在人類大多數(shù)癌癥中過表達(dá)，起著抑制宿主抗腫瘤免疫作用，促進(jìn)了腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。同樣的情況也存在肝細(xì)胞癌中，TAM受體的配體Gas 6對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的影響，以及在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞，和CD8+T細(xì)胞來促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的機(jī)制方面仍待進(jìn)一步研究。這些發(fā)現(xiàn)極有可能推動(dòng)針對(duì)肝細(xì)胞癌免疫療法的發(fā)展。