黃平權1 馮世鑫2

1.廣西白云山盈康藥業(yè)有限公司，廣西 南寧 530022; 2.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023

紅花青藤 (IlligerarhodanthaHance. ) 是連葉桐科青藤屬植物，別名三葉青藤、三姐妹藤、毛青藤(圖1，a)。主產于廣西，廣東、云南、福建及臺灣等省[1-3]。藥用根、莖藤，味甘、辛，性溫。具有消腫止痛、活血通絡、祛風散瘀等作用[4]。用于治療跌打腫痛、風濕骨痛、類風濕、肩周炎、小兒麻痹后遺癥等。在廣西民間應用較為廣泛?，F(xiàn)代藥理實驗表明，紅花青藤醇提物抗炎作用顯著，且毒性小[5]。是中成藥 “華佗風痛寶 ” 及其系列產品的主要原料藥[6]。一直以來，紅花青藤均依靠采集野生資源供給市場及臨床用藥，隨著研究的深入和開發(fā)力度的加大，各地的野生資源銳減，人工撫育或栽培迫在眉睫。經查閱，目前，紅花青藤的研究主要集中在藥理、藥化和臨床方面的研究，而在種子繁育和栽培等研究方面研究較少。為更好地開發(fā)和利用紅花青藤，探討種子萌發(fā)的最佳條件和方法，開展環(huán)境因子、條件和GA3對紅花青藤的種子萌發(fā)的影響的研究，現(xiàn)報導如下。

1 材料和方法

1.1 材料 供試種子采集于廣西南寧市郊區(qū)，經廣西藥用植物園副研究員彭玉德鑒定為紅花青藤(IlligerarhodanthaHance. )的種子(圖1，b)。種子取材除了不同成熟度對比試驗之外，其他試驗均選取果皮為黃棕色的種子作材料。

儀器LRH-400GSI(智能型)光照培養(yǎng)箱(由韶關市泰宏醫(yī)療器械有限公司生產)，BCD-212電冰箱(由博西華家用電器有限公司生產)，天平(型號YP202N，由上海精密科學儀器有限公司生產)，卡尺、發(fā)芽盒，培養(yǎng)基質材料為市售。自制的發(fā)芽基質配方，由河沙∶蛭石∶珍珠巖等于4∶2∶1 的比例配成。

1.2 方法

1.2.1 種子處理 4月至5月采收表皮呈黃棕色的果實，去除長翅，保留附著在種子上的果皮(圖1，c)。先用0.2%的高錳酸鉀液浸泡種子20 min后，再用蒸餾水沖洗4次。置于墊有5～6 cm厚的基質的發(fā)芽盒中，種子分散、平放，嵌入基質內，因略見上部果皮為宜，蓋上蓋子。每處理30粒種子，4個重復。

1.2.2 發(fā)芽試驗 按各處理的條件進行，考察其發(fā)芽率和發(fā)芽勢。種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢的統(tǒng)計和計算方法為：每24 h觀察1次，記錄當天種子發(fā)芽情況，并適當補充水分。以露白作為發(fā)芽的標志。從開始發(fā)芽的第7天統(tǒng)計發(fā)芽勢，20 d統(tǒng)計發(fā)芽率。計算公式如下：

發(fā)芽勢=(規(guī)定時間內發(fā)芽種子粒數÷供試種子粒數)×100%

發(fā)芽率=(發(fā)芽種子粒數÷供試種子粒數)×100%

1.2.3 數據處理 用SPSS.19.0和Excel進行數據統(tǒng)計處理。多重比較采用Duncan法：同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著。

1.2.4 成熟度對種子發(fā)芽的影響 按果皮顏色分為淺黃綠色、黃綠色、黃棕色和棕褐色4種，分別定為輕度成熟、中度成熟、成熟和老熟四個等級。在恒溫25 ℃條件下發(fā)芽。

1.2.5 溫度對紅花青藤種子萌發(fā)的影響 設置恒溫15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃和變溫23 ℃(16 h)-28 ℃(8 h)一共6個處理。種子隨采隨播，在光照強度1000 LX、光照時間8 h的培養(yǎng)箱內進行發(fā)芽。

1.2.6 光照強度對紅花青藤種子萌發(fā)的影響 種子隨采隨播，設置光照強度為1000 LX、2000 LX和3000 LX和0LX(無光照)共4種處理，光照時間為8 h，在25 ℃恒溫下發(fā)芽(無光照的處理是將種子置于黑暗的盒子中)。

1.2.7 紅花青藤種子失水對其萌發(fā)的影響 稱取剛采收的鮮種子的重量(風干前重)，置于室內攤晾，在自然條件下，存放5 d、10 d、15 d、20 d、25 d共5個處理，分別測定在規(guī)定存放時間的種子重量(風干后重)，計算種子失水率。分次及時將失水種子用清水浸泡4 h，在恒溫25 ℃條件下進行發(fā)芽培養(yǎng)。計算公式如下：

種子失水率(%)=(試樣風干前重-試樣風干后重)/試樣風干前重×100%

1.2.8 貯藏溫度和時間對種子發(fā)芽的影響 將種子分層放置于發(fā)芽盒中，每層用含水量23%～25%的細沙覆蓋，分別置于：0 ℃、5 ℃、10 ℃的環(huán)境(電冰箱)中，分別存放30 d、60 d、90 d后，取出。在恒溫25 ℃的環(huán)境中進行發(fā)芽培養(yǎng)。

1.2.9 GA3對老化的種子萌發(fā)的影響 取在室內常溫下存放10 d，已部分失水的老化種子，分別用濃度為40 mg/kg、80 mg/kg、120 mg/kg的GA3水溶液浸泡種子4 h后，取出，在恒溫25 ℃條件下進行發(fā)芽。

2 結果與分析

2.1 成熟度對紅花青藤種子發(fā)芽的影響 試驗表明：成熟度對紅花青藤種子發(fā)芽率的影響較大，以果莢為黃棕色的種子(成熟種子)發(fā)芽最高，發(fā)芽率達95.8%，顯著高于其他處理；其次為果莢黃帶綠色的種子(中度成熟種子)，發(fā)芽率達93.3%，也顯著高于老熟種子和輕度成熟種子的，最低的是輕度成熟種子。對于發(fā)芽勢也表現(xiàn)為成熟種子的最高，達到55.6%。顯著高于老熟種子和輕度成熟種子，但與中度成熟種子的差異不顯著。發(fā)芽勢高體現(xiàn)種子萌發(fā)集中，活力強。說明中度成熟的種子的活力已接近成熟種子。在各處理的種苗后續(xù)生長中，也表現(xiàn)出成熟度為成熟的種子所形成的植株生長旺盛，根系較為發(fā)達(圖2，a)，其次為中度成熟種子的植株(圖2,b)，第三為老熟種子的植株(圖2,c),生長最為弱小的為輕度成熟的植株(圖2,d)。因此，紅花青藤種子在果莢表皮呈黃帶綠色至黃棕色時采收為宜(表1)。

表1 紅花青藤種子成熟度不同對其發(fā)芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按高至低排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.2 溫度對種子萌發(fā)的影響 試驗表明：在恒溫的條件時，隨著溫度的升高紅花青藤種子的發(fā)芽率呈拋物線狀變化，在溫度25 ℃時達到最高，顯著高于同條件的其他溫度處理。在溫度25 ℃以下處理的發(fā)芽率和發(fā)芽勢均隨著溫度的升高而增大；而高于25 ℃的則隨著溫度的升高而減小。說明溫度過高或過低都對紅花青藤種子發(fā)芽均有影響。在23 ℃(16 h)～28 ℃(8 h)變溫的條件下，發(fā)芽率達到96.7%，高于恒溫25 ℃處理的，但兩者之間差異不顯著。從其發(fā)芽勢來看，則顯著高于恒溫25 ℃處理和其他處理。說明變溫處理更有利于紅花青藤的種子萌發(fā)(表2)，生產育苗時，溫度宜控制在23～28 ℃之間。

表2 不同的溫度條件對紅花青藤種子發(fā)芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.3 光照強度對紅花青藤種子萌發(fā)的影響 試驗中，強光照或無光(黑暗)均對種子萌發(fā)有影響，種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢均有隨著光照強度的增強呈拋物線形狀的變化，以1000 LX處理的最高，顯著高于其他處理。無光處理(黑暗)的發(fā)芽率比光照強度3000 LX處理的稍高，差異未達到顯著水平，但其發(fā)芽勢顯著高于光照強度3000 LX處理的。說明在一定范圍內的弱光照有利于紅花青藤種子萌發(fā)，以1000 LX為好(表3)。

表3 不同的光照條件下對紅花青藤種子發(fā)芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.4 紅花青藤種子失水對其萌發(fā)的影響 經試驗得知，種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢隨著種子失水率的增大而降低，與存放時間的密切相關。當種子失水率為0(鮮種子)時，其發(fā)芽率和發(fā)芽勢為最高，分別達到93.3%和58.3%，顯著高于其他處理。當種子失水率達43.1%時，其發(fā)芽率急劇下降，只有21.7%，已不能應用于生產。當種子失水率達到60.2%時(存放25 d)，發(fā)芽率僅為0.8%，即基本喪失活力。說明種子失水嚴重影響其發(fā)芽，且下降幅度大。也就是說，在自然條件下，紅花青藤種子壽命短(表4)。

表4 花青藤種子失水程度對其發(fā)芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

2.5 貯藏溫度和時間對種子發(fā)芽的影響 試驗結果表明，在保濕的條件下，低溫貯藏能保持紅花青藤種子有較高發(fā)芽率，發(fā)芽率的高低與貯藏的時間和溫度有關。在同一溫度條件下，種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢均隨著貯藏時間的延長而降低。說明種子不耐貯藏。在相同的貯藏時間條件時，種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢則隨著貯藏溫度的降低呈拋物線狀變化，均以5 ℃的貯藏溫度的發(fā)芽率最高，顯著高于10 ℃和0 ℃的處理；使用5 ℃的溫度將種子貯藏90 d，其發(fā)芽率仍有80.0%，發(fā)芽勢也達到44.2%，還可應用于大田生產[7]。綜上所述，紅花青藤種子貯藏時，溫度控制在5 ℃為宜，貯藏時間不宜大于90 d。

2.6 GA3對老化的紅花青藤的種子萌發(fā)的影響 在自然條件下，紅花青藤種子失水后其發(fā)芽率明顯下降。種子老化，失去活力。用 GA3處理因失水老化的種子，能提高種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢，隨著濃度增大而增加。試驗中，以濃度120 mg/kg處理的最高，其發(fā)芽率達82.5%，發(fā)芽勢50.8%，其次為濃度80 mg/kg處理的，兩者均顯著高于40 mg/kg及清水(對照)處理的。最低為對照處理。說明GA3對因失水老化的種子發(fā)芽有促進作用，濃度在80～120 mg/kg為好(表6)。

表5 不同的貯存方法對紅花青藤種子發(fā)芽的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按高至低排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

表6 GA3對老化的紅花青藤種子萌發(fā)的影響

注：表中同列的數值采用Duncan法進行顯著性分析，差異顯著與否，用字母表示，按大至小排列。同列中不同的小寫字母表示在5%的水平下差異顯著，否則不顯著。即a顯著高于b，b顯著高于c……依此類推。a為最大值，b次之……依次排列。

3 結論和討論

3.1 結論 紅花青藤種子在果莢黃色至黃棕色時，具有較強的發(fā)芽能力，種子無休眠性；在23 ℃～28 ℃的溫度、光照度1000 XL條件下，更有利于種子萌發(fā)，發(fā)芽率較高。種內水分含量對種子萌發(fā)影響較大，種子失水后發(fā)芽率明顯下降，種子老化較快，其下降的程度與失水率成正相關，反映出在自然條件下，種子壽命短。保濕低溫貯藏在一定時間內，能保持種子發(fā)芽能力，在5 ℃的溫度下，貯藏90 d仍有80%的發(fā)芽率；用GA3處理失水老化的種子，能在一定程度上提高種子發(fā)芽率。

3.2 討論 優(yōu)質的種子是中藥材規(guī)范化生產的源頭[7]，種子的萌發(fā)至成苗除了受種子的生活力影響以外，還受溫度、濕度和氧氣[8]的影響。種子的活力與其成熟度密切相關，種子處于果實之中，有些植物當果實成熟時，種子也已成熟，生活力強、發(fā)芽率高[9-10]。有些植物果實雖已成熟、脫落，但此時的種子并沒有發(fā)芽能力，是其種胚未成熟之故[11-12]，即生理未成熟。從本試驗結果可看出，紅花青藤果莢黃色至黃棕色時，種子已具有較高的發(fā)芽能力，發(fā)芽率達到93.3%以上，說明此階段的種子已達到生理成熟，可以采收。

種子在萌發(fā)過程中在酶的作用下，進行著活躍的代謝反應，適宜的溫度能促進種子呼吸作用和酶活性有利于種子萌發(fā)[13]。多種植物的種子在最適宜發(fā)芽溫度范圍以外,容易喪失發(fā)芽能力，低溫抑制種子萌發(fā)，高溫則會引起種子變性[14-15]。不同植物種子對溫度的需求不同，側柏在有光的條件下最適宜的溫度為13.8～25.9℃，發(fā)芽率達到93.3%[16]；苦參種子萌發(fā)的適宜溫度為15 ℃[17]。本試驗中，紅花青藤種子在23 ℃～28 ℃變溫的條件下發(fā)芽較好，達到96.7%。說明變溫更有利于其萌發(fā)。

不同的種子萌發(fā)時對光照反應不一，有些種子如黃岑、萌發(fā)時對光照不敏感[18-19],有些種子則對光照為萌發(fā)的必要條件[16-20]，這是由植物的遺傳性和環(huán)境共同決定[21].光對種子萌發(fā)的影響主要是作為一種信號刺激活化種子，不是作為能量物質直接參與種子萌發(fā)[22]。趙素婷[23]研究表明，不同植物種子的萌發(fā)對光照有不同的需求。在本試驗中，紅花青藤種子在較弱光照(1000 LX)條件下，發(fā)芽率達到95.0%，其次為2000 LX處理的，也有93.0%，而在較強光照環(huán)境下(3000 LX)和無光(0 LX)發(fā)芽率都較低，說明在1000～2000 LX的光照環(huán)境下，適宜紅花青藤種子發(fā)芽，無光或3000 LX光照強度均不利于種子萌發(fā)。

種子的貯藏是生產中的重要技術環(huán)節(jié)，為種子在異地推廣、運輸旅途和避開不良氣候提供保障。在貯藏過程中，溫度、濕度和種子含水量影響種子生活力[24]，其中，種子的含水量尤為重要[25]。多數種子在干燥的狀態(tài)下，貯藏較長時間不會喪失活力，如當歸種子的含水量為2.85%時，常溫貯藏10個月仍有85%的發(fā)芽率[26]。而三七[27]、山豆根[28]、廬山茶樹[29]等種子的貯藏需要保持適當的水分和低溫，才能獲得較高的發(fā)芽率。本試驗中，紅花青藤種子在5 ℃、細沙保濕的條件下貯藏，取得較高的發(fā)芽率，在貯藏90 d后仍有80%的發(fā)芽率，為同期處理的最高值。說明此貯藏方法有利于紅花青藤種子活力保持。

紅花青藤種子失水，發(fā)芽率明顯下降，形成老化種子，壽命縮短。在自然條件下存放10 d，種子失水率達到27.6%，此時發(fā)芽率只有61.7%；當存放20 d，種子失水率約為52.4%，此時種子的發(fā)芽率只有11.7%，已不能應用于生產。外源激素能改變種子代謝物質的變化[30],用GA3水溶液處理失水老化的紅花青藤種子，能在一定程度上提高種子的發(fā)芽率；濃度以80～120 mg/kg較好。