司孝清，黃庭亮

反相高效液相色譜法測定鹽酸萘甲唑啉滴鼻液有關(guān)物質(zhì)

司孝清，黃庭亮

（廣東恒健制藥有限公司，廣東 江門 529040）

針對鹽酸萘甲唑啉滴鼻液有關(guān)物質(zhì)使用反相高效液相色譜法進(jìn)行測定，色譜柱采用Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為辛烷磺酸鈉溶液，即在1 000 mL乙腈-冰醋酸-水（35∶0.5∶70）中加入1.1 g辛烷磺酸鈉，攪拌溶解；流速、柱溫以及檢驗波長分別設(shè)置為1.0 mL/min、40 ℃、280 nm。結(jié)果表明，該色譜條件下，萘甲唑啉峰與各雜質(zhì)峰之間分離良好，各已知雜質(zhì)峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系，回收率良好。所用測定方法操作較為簡便快捷，且靈敏度與準(zhǔn)確度相對較高，可用于產(chǎn)品質(zhì)量控制。

鹽酸萘甲唑啉；反相高效液相色譜法；鼻粘膜；檢測器

鹽酸萘甲唑啉屬于咪唑啉類的擬交感神經(jīng)藥，是廣泛用于眼和鼻黏膜的減充血劑，是一種有效的作用于結(jié)膜小動脈α腎上腺素能受體的血管收縮劑。當(dāng)應(yīng)用于黏膜時，萘甲唑啉引起血管收縮，從而達(dá)到迅速和延長減少腫脹和結(jié)膜充血的作用，廣泛用于成人過敏性及炎癥性鼻充血、急慢性鼻炎。中國藥典2015版（ChP2015）收載原料、滴眼液及滴鼻液，美國藥典40版（USP40）也有收載，歐洲藥典9.0版（EP9.0）收載原料。ChP2015萘甲唑啉滴鼻液無有關(guān)物質(zhì)的檢測，使用反相液相色譜法對USP40和EP9.0原料中存在的有關(guān)物質(zhì)實施檢查，因此本研究針對鹽酸萘甲唑啉滴鼻液相關(guān)物測定方法的建立，主要以USP40和EP9.0鹽酸萘甲唑啉有關(guān)物質(zhì)的測定方法作為參考。

1 儀器與試藥

檢測儀器有SARTORIUS BT125D 型電子天平，LC-2030島津二極管陣列檢測器，LC-2030四元低壓泵，Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱。鹽酸萘甲唑啉對照品（50 mg/支）購自撫生實業(yè)有限公司，乙腈購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，冰醋酸（分析純，廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)），辛烷磺酸鈉（離子對試劑，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)），萘甲唑啉雜質(zhì)A與D購自上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司、雜質(zhì)B生產(chǎn)廠家為深圳振強(qiáng)生物技術(shù)有限公司、雜質(zhì)C生產(chǎn)廠家為蘇州愛瑪特生物科技有限公司，鹽酸萘甲唑啉滴鼻液生產(chǎn)廠家為廣東恒建制藥有限公司。

2 色譜條件

色譜柱：Angela Venusil XBP C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

流動相：流動相為辛烷磺酸鈉溶液，即在1 000 mL乙腈-冰醋酸-水（35∶0.5∶70）中加入1.1 g辛烷磺酸鈉，攪拌溶解；流速、柱溫以及檢驗波長分別設(shè)置為1.0 mL/min、40 ℃、280 nm，進(jìn)樣量為10 μL。

溶劑：流動相。雜質(zhì)A峰與萘甲唑啉峰應(yīng)當(dāng)保持1.5以上的分離度。

3 方法與結(jié)果

3.1 溶液的制備

選擇鹽酸萘甲唑啉滴鼻液作為本次研究的供試品溶液。

3.2 已知雜質(zhì)的分離

分別在雜質(zhì)A、B、C、D對照品中以及鹽酸萘甲唑啉對照品進(jìn)行適量稱取，在加入流動相后將雜志對照品與鹽酸萘甲唑啉對照品稀釋成每含有1 mg鹽酸萘甲唑啉，各雜質(zhì)含量為5 μg/mL的混合溶液，進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。

結(jié)果顯示，各已知雜質(zhì)峰之間以及各已知雜質(zhì)峰與主峰之間均能達(dá)到基線分離，如圖1所示。

圖1 已知雜質(zhì)分離色譜圖

3.3 專屬性試驗

在空白輔料以及供試品溶液各分別取10 μL進(jìn)行進(jìn)樣，并對所形成的色譜圖實施記錄。結(jié)果顯示，輔料無干擾。

3.4 破壞試驗

取鹽酸萘甲唑啉滴鼻液及空白輔料溶液，各5份，分別用于光照箱（照度大于等于5 000 Lux，近紫外能量大于等于90 uW/cm2）中光照5 d、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氫氧化鈉溶液60 ℃水浴5 min、5 mol/L鹽酸溶液100 ℃水浴2 h、121 ℃高壓蒸汽加熱30 min、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的H2O2（100 ℃）水浴2 h進(jìn)行破壞試驗。結(jié)果表明：萘甲唑啉對堿最不穩(wěn)定，但各降解產(chǎn)物與萘甲唑啉主峰均有良好的分離，空白輔料無干擾。

3.5 線性和范圍

精密稱取雜質(zhì)A、B、C、D對照品各適量，用流動相定量稀釋成每1 mL分別含雜質(zhì)A、B、C、D（1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg）的混合溶液，取上述溶液分別進(jìn)樣10 μL，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，結(jié)果如下：雜質(zhì)A曲線方程為=15 741 282.2－28.0，=0.999 9（=5），表明雜質(zhì)A進(jìn)樣量在0.010 33～0.206 5 μg范圍內(nèi)，與峰面積成良好線性關(guān)系；雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為=1 704 244.6－2 102.5，=1.000 0（=5），表明雜質(zhì)B進(jìn)樣量在0.010 51～0.210 2 μg范圍內(nèi)，與峰面積成良好線性關(guān)系；雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為=1 685 876.2－1 238.9，=0.999 9（=5），表明雜質(zhì)C進(jìn)樣量在0.010 47～0.209 3 μg范圍內(nèi)，與峰面積成良好線性關(guān)系；雜質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為=1 716 326.4+535.0，=0.999 9（=5），表明雜質(zhì)D進(jìn)樣量在0.010 56～0.211 2 μg范圍內(nèi)，與峰面積成良好線性關(guān)系；萘甲唑啉標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為=1 596 106.6－114.3，=0.999 9（=5），表明萘甲唑啉進(jìn)樣量范圍在0.010 41～0.208 3 μg，與峰面積能夠形成較為良好的線性關(guān)系。

3.6 檢測限

精密稱取適量的鹽酸萘甲唑啉對照品以及各雜質(zhì)對照品，使用流動相進(jìn)行逐級稀釋，直至達(dá)到約為3倍的信噪比，結(jié)果顯示，萘甲唑啉檢測限為0.14 ng，雜質(zhì)A檢測限為0.12 ng，雜質(zhì)B檢測限為0.22 ng，雜質(zhì)C檢測限為0.52 ng，雜質(zhì)D檢測限為0.15 ng。

3.7 回收率試驗

精密稱取雜質(zhì)A、B、C、D對照品各適量，用鹽酸萘甲唑啉滴鼻液定量稀釋成每1 mL分別含雜質(zhì)A、B、C、D（1 μg、5 μg、10 μg）的混合溶液，取上述溶液分別進(jìn)樣10 μL，計算回收率。結(jié)果顯示，雜質(zhì)A、B、C、D的平均回收率分別為98.0%（=9）、99.8%（=9）、100.6%（=9）、99.8%（=9），方法準(zhǔn)確度較高。

4 討論

檢測波長時通過全波長掃描，萘甲唑啉、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D均在220 nm和280 nm附近有最大，因220 nm波長檢測基線噪聲較大，影響雜質(zhì)檢測，因此，選擇280 nm 為本品檢測波長。實驗中流動相比例的調(diào)整方面，主峰保留時間約為12 min出峰為宜。

R765.21

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2019.15.055

2095－6835（2019）15－0135－02

〔編輯：張思楠〕