黃傳書 趙 珮 黃先智 唐小平 劉 艷 雷 霆 羅 莉

(1. 重慶市蠶業(yè)科學技術研究院，重慶 400700；2.西南大學蠶學與系統(tǒng)生物學研究所，重慶400716；3.西南大學動物科技學院，重慶 400716)

桑葉蛋白質含量高，并具降糖、降脂、消炎抗菌等作用，能提高畜禽水產(chǎn)動物的免疫力，在健康養(yǎng)殖方面具有巨大的發(fā)展?jié)摿?。研究發(fā)現(xiàn)：桑葉除含有豐富的礦物質及維生素外，還含有許多特殊功效的天然活性物質成分。100g干物質含甾醇46mg(比綠茶高3～4倍)，還含有異槲皮苷200～500mg、槲皮苷30mg、槲皮苦素100mg等能抑制脂質氧化作用的黃酮類物質。在飼料中添加10%的桑葉不會影響羅非魚的生長性能,同時可有效調節(jié)羅非魚的脂質代謝,改善其肌肉品質[1]，發(fā)酵桑葉能劑量依賴性地降低高脂血癥羅非魚的血脂、血糖水平，提高機體的抗氧化能力[2]，飼料中添加MLM和FMLM對胡須雞有降低血脂含量、增強免疫力、提高抗氧化能力等作用[3]，發(fā)酵桑葉粉替代50%的魚粉時，巴塔野鯪的增重率、特定生長率明顯高于對照組[4]，在草魚飼料中添加5%桑葉粉對其生長性能無顯著影響，當桑葉粉含量達到10%時，其生長性能受到抑制[5]。

草魚是中國重要的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類，產(chǎn)量位居全國淡水養(yǎng)殖之首，在集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，普遍采用提高飼料脂肪水平以節(jié)約蛋白質的策略，以達到促進魚類生長，減少氮磷排放，保護養(yǎng)殖水體環(huán)境的目的。由于草魚攝食量大、對能量的需求低以及對高脂飼料利用能力低，飼料中脂肪水平過高時容易導致魚體脂肪沉積過多、機體抗氧化能力下降，脂質過氧化程度加重，甚至導致高脂血癥和營養(yǎng)性脂肪肝的發(fā)生，危害魚類的生長。本研究以草魚幼魚為試驗對象，研究桑葉發(fā)酵飼料對投喂高脂飼料的草魚生長、肌肉營養(yǎng)組成、血液指標、肝臟脂肪含量、抗氧化能力的影響，旨在為探索解決高脂飼料導致草魚脂肪沉積增多、抗氧化能力降低及脂質代謝紊亂等問題，為草魚的健康養(yǎng)殖提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗飼料

桑葉粉(桐鄉(xiāng)青高溫殺青烘干)、進口魚粉、菜籽粕、棉籽粕、豆渣(豆粕)、面粉、維生素和礦物質混合料、發(fā)酵劑。

1.1.2 試驗魚苗

從漁場購0.55kg左右大小草魚苗，配0.52kg左右白鰱，整理前魚池內(nèi)鯽魚、鯉魚留大小比較均勻若干尾(共9.10kg)。

1.2 養(yǎng)殖魚塘

實驗魚塘為重慶市蠶業(yè)科學研究院果桑品種比較試驗園100m2水面魚池。于2017年9月12日清塘，用鮮石灰全池均勻撒布消毒，用鐵絲網(wǎng)將魚池均分為2等分，保證兩邊魚苗(草魚、鯽魚、白鰱等)不能混，只有水可以兩邊流動，兩邊魚池分別放置長、寬1.2m×0.8m的活動飼料臺，便于每日飼料食下情況觀察記錄，魚池準備完畢關水15d左右投放魚苗。

1.3 魚苗投放

2017年9月26日，從市場購買0.55kg左右大小的草魚苗50尾、0.52kg左右大小的白鰱12尾及原池中鯽魚(鯉魚)共9.10kg，分別放在鐵絲網(wǎng)分隔的兩邊魚池，2d后開始按比較試驗設計投放飼料。

1.4 精飼料配制

(1)處理組(CL)：桑葉粉混合發(fā)酵飼料,按干物重量比，魚粉4.9%～5.3%、豆渣19.0%～22.0%、豆粕38.0%～42.0%、棉籽粕26.0%～28.0%、維生素與礦物質預混料0.8%～1.2%、桑葉粉3.0%～5.0%、發(fā)酵劑0.2%。

(2)對照組(CK)：無桑葉粉發(fā)酵飼料，按干物重量比，魚粉4.9%～5.3%、豆渣19.0%～22.0%、豆粕38.0%～42.0%、棉籽粕26.0%～28.0%、維生素與礦物質預混料0.8%～1.2%、面粉3.0%～5.0%、發(fā)酵劑0.2%。

按食用草魚飼料國家標準(GB/T36205-2018)粗蛋白≥20.0%、粗脂肪≥2.0%、灰分≤13.0%，達到所配混合飼料粗蛋白36.0%～37.5%、粗脂肪3.7%～3.9%、灰分7.0%～10.0%、總能量11.5～12.0MJ/kg。

將上述飼料混合均勻，在25℃～28℃下，發(fā)酵48h干燥備用。

1.5 飼養(yǎng)

對照組(CK)用青草+無桑葉混合發(fā)酵飼料飼養(yǎng)，處理組(CL)用青草+桑葉粉混合發(fā)酵飼料，每天早上8:30和下午5:00各投放兩次飼料，每次投放飼料前，將上次投放飼料剩余量進行測量記錄，便于計算食下量。

1.6 記錄與抽樣調查方法

1.6.1 記錄

記錄投放魚苗重量、每日天氣情況、飼料食下量、魚兒生長情況等內(nèi)容。每次投放飼料前，將上次投放飼料全部清除并稱重，計算食下量，再根據(jù)上次食下量，確定下次飼料投放量。

1.6.2 抽樣調查

將魚塘所有魚全部清塘，并分類稱重，將未受傷草魚按CK和CL兩組分別放在充氧水箱，并在水箱放入適量MS-222 麻醉劑進行麻醉減少草魚活動，直接送到實驗室檢測肝臟組成、肉質、風味物質、血清脂質、肝臟抗氧化能力等指標。

1.7 樣品的制備與分析

將取回樣品，禁食24h后稱重，每個重復隨機取4 尾魚，用MS-222進行麻醉，剝離出內(nèi)臟、肝胰臟，用于肝體指數(shù)(HSI)和肝脂含量的測定; 每個重復另隨機取3尾魚于尾靜脈取血，于4000×g4℃條件下離心10min，收集血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

血脂指標均采用全自動生化分析儀(日立7100)測定，包括血清總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。血清超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量采用試劑盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn))進行測定。蛋白質含量采用考馬斯亮藍法測定。

1.8 數(shù)據(jù)處理與分析

部分數(shù)據(jù)采用SPSS22.0 對所得數(shù)據(jù)進行方差分析，差異較大數(shù)據(jù)直接用平均數(shù)比較。

2 結果與分析

2.1 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能有效改善草魚肝臟健康

由表1可知，CL組草魚生長速度、尾均重顯著高于對照。同時，CL組草魚肝體比和臟體比較CK組草魚比較，都有所下降，肝體比下降了71.7%，臟體比下降了30.1%，肥滿度CL組低于CK組，草魚體型優(yōu)美、鱗片緊實，形體接近于野生草魚形態(tài)，可能與添加桑葉量偏多有一定的關系，還需要進一步優(yōu)化其添加量。

表1 桑葉發(fā)酵飼料對草魚形體指標與尾增重影響比較

由表2可知，CK組草魚肝臟顏色偏淡，脂肪附著面積、脂肪厚度顯著高于CL組，CL組魚肝臟水分、肝臟脂肪、腸脂肪含量分別為73.80%、21.30%、8.86%，魚肝臟水分較CK組增加了6.26%；肝臟脂肪、腸脂肪分別較CK組下降了36.73%、54.38%，大幅改善了草魚脂肪肝的狀態(tài)，提高了草魚肝臟健康。

表2 桑葉發(fā)酵飼料對草魚肝臟脂肪的影響

2.2 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能提高草魚肝臟抗氧化能力

機體中自由基清除酶主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等。SOD可清除機體內(nèi)的超氧自由基，CAT和GSH-Px可清除機體內(nèi)的過氧化氫。丙二醛(MDA)是多不飽和脂肪酸過氧化的主要分解產(chǎn)物，是反映草魚氧化應激的重要指標。

由表3可知，CL組草魚與CK組草魚比較，肝臟總抗氧化能力(T-AOC)和T-SOD均有明顯增加， MDA明顯降低。飼料中添加發(fā)酵桑葉粉能極顯著提高草魚抗氧化能力，對草魚抗應激、耐缺氧能力有較大的作用，從而促進草魚生長。

2.3 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能有效調節(jié)血清脂肪代謝，促進草魚健康

由表4可知，適量添加發(fā)酵桑葉粉飼養(yǎng)草魚，能有效調節(jié)其脂質代謝，顯著降低草魚血清指標中的總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖含量(P<0.05)，能有效改善高能高脂飼料對草魚生長的不利影響，促進草魚健康。

表3 桑葉飼料對草魚抗氧化能力的影響

表4 桑葉飼料對草魚血清指標的影響

2.4 桑葉粉混合發(fā)酵飼料能顯著提高肉質及草魚風味物質

由表5和表6可知，CL組與CK組草魚比較，全魚水分、全魚灰分、全魚蛋白含量差異不顯著，但天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸等風味氨基酸含量均有顯著的提高，風味物質肌苷酸含量提高19.78%、苷氨酸提高21.74%，CL組全魚脂肪含量顯著低于CK組，但肌肉脂肪含量差異不顯著，說明桑葉主要是降低內(nèi)臟脂肪，CL組草魚肌肉中的不飽和脂肪酸總量高于CK組108.00%，影響肉質的油酸提高190.63%、亞油酸提高144.40%、亞麻酸提高14.29%,顯著提高了草魚的肉質和風味。

表5 桑葉飼料對草魚全魚和組織常規(guī)組成的影響

備注：水分外的其他成分(粗蛋白、粗脂肪和粗灰分)為干樣基礎。

表6 桑葉飼料對草魚肌肉風味物質含量比較

表7 桑葉飼料對草魚肉質脂肪酸含量比較

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，鮮桑葉中含有一些防御蛋白、植物凝集素和丹寧等抗營養(yǎng)因子，對水產(chǎn)動物消化吸收造成負面影響，另外桑葉表面覆蓋蠟質層，單胃動物難以消化利用[4]。本次試驗過程中發(fā)現(xiàn)，在用青草飼養(yǎng)草魚時，過多添加鮮桑葉對草魚生長有一定影響，草魚消化不完全，同時草魚排泄物直接造成水面大量綠藻生長，直接污染水質，對草魚生長有一定影響。飼料中添加75%的發(fā)酵桑葉養(yǎng)殖淡水鯰魚(Heteropneu-stesfossilis)不影響其生長和飼料利用，用發(fā)酵桑葉粉替代50%的魚粉飼養(yǎng)巴塔野鱗增重率、特定生長率顯著高于對照組，而且還展現(xiàn)出良好的飼料利用率[4]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，將適量桑葉粉與其他飼料成分混合共同發(fā)酵飼養(yǎng)草魚,草魚的健康性和生長率明顯高于對照，且飼養(yǎng)過程中草魚耐缺氧能力明顯提高。因此，在用桑葉養(yǎng)殖草魚最好不用鮮桑葉直接飼養(yǎng)。

SOD主要清除氧自由基，減輕或避免自由基和脂質過氧化物對動物機體造成的損傷。而CAT將SOD清除活性氧時產(chǎn)生的過氧化氫(H2O2)轉化為水(H2O)，保護機體免受損傷，預防性給予發(fā)酵桑葉能夠增加高脂血癥羅非魚血清SOD和CAT活性以及CAT/SOD，降低血清MDA含量[2]。本試驗結果也進一步證實這種推斷，即飼料中添加發(fā)酵桑葉能顯著降低試驗草魚血清指標中的總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖含量(P<0.05)，極顯著提高了草魚抗氧化能力，通過提高機體抗氧化能力及抑制脂質過氧化反應，改善脂質代謝功能，對改善草魚肝臟健康，提高草魚抗應激、耐缺氧能力有較大的作用，從而達到提高草魚健康養(yǎng)殖。

用桑葉粉混合發(fā)酵飼料與常規(guī)飼料飼養(yǎng)草魚比較，影響魚肉風味物質天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸等含量顯著高于對照(P<0.05)，全魚脂肪含量顯著低于對照(P<0.05)，但肌肉脂肪不顯著，說明桑葉主要是降低內(nèi)臟脂肪，桑葉草魚肌肉中的不飽和脂肪酸總量高于對照組108.00%，影響肉質的油酸高于對照190.63%、亞油酸高于對照144.40%、亞麻酸高于對照14.29%，說明桑葉發(fā)酵飼料飼養(yǎng)草魚不僅可以提高草魚養(yǎng)殖健康性，還可以提高草魚肉質和風味。

4 結論

適量添加桑葉粉混合發(fā)酵飼料，可以有效改善草魚肝臟健康，提高草魚抗氧化能力、抗體應激能力，從而促進草魚健康生長。同時，還可以提高營養(yǎng)價值和風味物質。