徐瀟穎，朱炳祺，劉 柱，趙超群，梁晶晶，羅金文

（1．浙江省食品藥品檢驗研究院，浙江杭州310000；2．浙江中醫(yī)藥大學醫(yī)學技術(shù)學院，浙江杭州310000）

近年來牛奶中農(nóng)藥殘留的問題同樣存在于含乳飲料中，目前許多國家對牛奶中農(nóng)藥的最高殘留限量做了嚴格的限定，而對于含乳飲料中農(nóng)藥的監(jiān)測尚不全面。因此，開發(fā)一種針對含乳飲料中多農(nóng)殘檢測的方法迫在眉睫。侯逸眾等［1］建立牛奶中多組分農(nóng)藥殘留的測定，采用內(nèi)標稀釋－分散固相萃?。瓪庀嗌V／串聯(lián)質(zhì)譜法，得到的檢出限在0．02～0．55μg／kg范圍，獲得的回收率在58．7%～127．1%之間。

含乳飲料為復配食品，復雜的基質(zhì)易對含量較低的目標物的分析造成影響，在分析前需要進行提取、富集、凈化等處理手段。通常采用凝膠滲透色譜（GPC）［2］、液－液萃?。?］、固相萃取（SPE）［4］、基質(zhì)分散固相萃取（MSPD）［5］等方法凈化。QuEChERS方法［6－7］具有分析速度快、溶劑用量少、操作簡單等優(yōu)勢，在農(nóng)藥多殘留檢測中的使用日益增加，至今已有超過200種農(nóng)藥殘留測定可采用QuEChERS方法凈化。針對目前含乳飲料中規(guī)定的有限量要求的5種農(nóng)藥，本文通過對提取方法進行優(yōu)化，比較SPE法以及QuEChERS凈化法，最終建立同時測定含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留的氣相色譜－質(zhì)譜檢測方法。

1 實驗方法

1．1 儀器與試劑

安捷倫7890C氣相色譜，7000C三重四極桿質(zhì)譜儀；LYNX6000離心機（德國，Thermo）；Turbo Vap LV氮吹儀（瑞典，Biotage）。

醚菌酯、咯菌腈、氯菊酯、丙溴磷以及氯氰菊酯有效成分含量均大于99．0%，其中氯菊酯、氯氰菊酯、環(huán)氧七氯購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研研究所，咯菌腈、丙溴磷、醚菊酯購于北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。乙腈、正己烷為色譜純，無水 MgSO4、NaCl均為分析純。乙二胺－N－丙基硅烷（PSA，40～60μm），十八烷基硅烷（C18，50μm）均購自于天津Agela公司。

含乳飲料及含乳飲品購自當?shù)爻小?/p>

1．2 標準溶液配制

精確移取適量5種農(nóng)藥標準品溶液，分別置于5mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成50μg／mL的標準儲備液，－18℃冰箱中保存，使用前根據(jù)需要將標準儲備液稀釋成適當濃度的混合標準工作液。內(nèi)標環(huán)氧七氯臨用前稀釋成適當濃度的內(nèi)標工作液。

1．3 樣品處理

稱取10g（精確至0．01g）樣品于50mL離心管中，加入10．0mL乙腈，渦旋1min后，加入4．0g無水 MgSO4、1．0g NaCl，振蕩提取10min，8 000r／min離心5min，待凈化。

1．3．1 固相萃取柱凈化 本文中選用兩種固相萃取柱進行凈化。其中ENVITM－18固相萃取柱為C18柱填料進行石墨化碳黑封端處理，在牛奶多農(nóng)藥殘留檢測中較為常見，凈化前先用10mL乙腈對固相萃取柱進行活化，后取2．0mL待凈化液通過固相萃取柱。而Prime HLB固相萃取柱基于對凈化液中的脂類物質(zhì)存在吸附，凈化前，需在2．0mL待凈化液中加入0．5mL水混勻。待凈化液通過固相萃取柱后，用4mL乙腈分兩次洗脫，收集全部洗脫液，氮吹至近干后，用正己烷交換溶劑，最終定容至1．0mL，經(jīng)0．22μm濾膜過濾后，供氣相色譜－質(zhì)譜測定。

1．3．2 QuEChERS凈化 移取3mL待凈化液到預先裝有100mg無水 MgSO4、50mg PSA和50mg C18的5mL離心管中，渦旋混合1min，于4℃、8 000r／min下離心2min，取2．0mL上清液氮吹至盡干后，用正己烷交換溶劑，最終定容至1．0mL，經(jīng)0．22μm濾膜過濾后，供氣相色譜－質(zhì)譜測定。

1．4 色譜與質(zhì)譜條件

1．4．1 氣相色譜條件 Agilent HP－5MS毛細管柱（30m×0．25mm，0．25μm）；升溫程序：120℃保持1min，以20℃／min速率升至200℃，再以10℃／min升至300℃，保持5min，總運行時間19．5min；進樣口溫度：270℃，載氣：氦氣（＞99．999%），流速：1．2mL／min；進樣量：1．0μL；進樣模式：不分流；溶劑延遲時間：5．5min。

1．4．2 質(zhì)譜條件 電子轟擊（EI）電離源；離子源溫度：230℃；掃描方式：選擇離子模式（SIM）?？┚娑侩x子m／z248，定性離子m／z127、154；，醚菌酯定量離子m／z116，定性離子m／z206、131；氯菊酯定量離子m／z183，定性離子m／z184、255；丙溴磷定量離子m／z339，定性離子m／z374、297；氯氰菊酯定量離子m／z181，定性離子m／z152、180；環(huán)氧七氯定量離子m／z353，定性離子m／z351、355。

2 結(jié)果與討論

2．1 提取條件的優(yōu)化

實驗比較了二氯甲烷、乙腈、丙酮對含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留的提取效果。結(jié)果表明，正己烷提取，提取液濃縮后顏色較深、雜質(zhì)多、不易凈化；二氯甲烷提取，部分待測物回收率偏低；而乙腈較前兩者較好，但采用乙腈作為提取溶劑時，需加入NaCl使乙腈層與水層分離，加入無MgSO4以及Pb（Ac）2沉淀蛋白質(zhì)，提高乙腈對含乳飲料的萃取效果。結(jié)果表明，乙腈提取后，NaCl、無水MgSO4以及Pb（Ac）2的加入可以使5種農(nóng)藥殘留的回收率更穩(wěn)定。

2．2 凈化方法的選擇

實驗選用陰性樣品進行加標實驗，加標濃度為15．0μg／kg，分別考察固相萃取柱凈化以及QuECh－ERS法凈化效果。結(jié)果表明，經(jīng)過QuEChERS法凈化后，樣品基質(zhì)對目標物的干擾未完全消除，存在基質(zhì)干擾。選用ENVITM－18固相萃取柱對提取液進行凈化時，目標物咯菌腈以及醚菌酯的絕對回收率偏低。Prime－HLB柱能有效吸附牛奶中的磷脂等非極性干擾物，結(jié)合提取條件中的蛋白沉淀技術(shù)，凈化后在目標物峰附近不存在基質(zhì)干擾。不同凈化方式對目標農(nóng)藥回收率的影響見表1，目標物的色譜圖如圖1。

表1 不同凈化方式對目標物的回收率的影響Table 1 Effect of different purification methods on recoveries

圖1 牛奶基質(zhì)中5種農(nóng)藥的SIM色譜圖Fig．1 SIM chromatograms of 5pesticides in milk matrix

2．3 方法的線性關(guān)系與檢出限

采用1．3節(jié)下樣品處理中Prime－HLB柱凈化法獲得的空白基質(zhì)溶液，配制5種農(nóng)藥的混合標準工作溶液，濃度在5～120μg／L范圍內(nèi)，以環(huán)氧七氯作為內(nèi)標，將待測物質(zhì)峰面積和內(nèi)標峰面積的比值（Y）為縱坐標，質(zhì)量濃度（X）為橫坐標繪制標準曲線，線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表2。結(jié)果表明，5種農(nóng)藥在5～120μg／L范圍線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0．995。選用空白基質(zhì)按國家標準（GB／T 23210－2008）中檢出限濃度進行加標后，采用已建立方法進行檢測，其中丙溴磷、氯菊酯以及氯氰菊酯的信噪比均高于100，鑒于不同儀器的差異和方法的適用性，根據(jù)信噪比（S／N≥3）確定本方法的檢出限，結(jié)果如表2所示。

表2 5種農(nóng)殘的線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 2 Linear equations，correlation coefficients（R2）and limits of detection for 5kinds of pesticide residues

2．4 方法的回收率及精密度

為了驗證方法的準確性和可靠性，在空白含乳飲料樣品中進行加標回收實驗，添加水平分別為5．0、15．0和75．0μg／kg，每個添加水平重復6次，結(jié)果見表3。

2．5 實際樣品的測定

用建立的方法檢測了20批市售的含乳飲料，結(jié)果均為陰性樣品。

表3 牛奶中不同加標水平下5種農(nóng)藥的回收率和相對標準偏差（RSDs）（n＝6）Table 3 Recoveries and RSDs of 5kinds of pesticides residue spiked in milk（n＝6）

3 結(jié)論

建立了固相萃取凈化結(jié)合氣相色譜－質(zhì)譜法測定含乳飲料中醚菌酯、咯菌腈、丙溴磷、氯菊酯、氯氰菊酯殘留量的分析方法。獲得5種目標物的方法檢出限在0．5～1．0μg／kg之間。方法具有穩(wěn)定性好、靈敏度高、快速便捷等特點，能滿足含乳飲料中5種農(nóng)藥殘留同時測定的要求，為該類產(chǎn)品的監(jiān)管提供保障。