李杰　杭柏林　張亞男　夏一赫　張慧輝　胡建和

摘要為獲得具有抗菌作用的物質(zhì)，本研究對雞脾臟和肝臟的粗提物進(jìn)行了制備，并通過抑菌試驗(yàn)檢測了粗提物對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的抑菌活性。結(jié)果表明，雞脾臟和肝臟的粗提物中存在著抗菌活性物質(zhì)，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有較好的抑菌活性。

關(guān)鍵詞 雞;脾臟;肝臟;粗提物;抗菌活性

中圖分類號 S831

文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 1007-5739（2019）05-0201-01

現(xiàn)階段，抗生素的濫用造成了許多新問題，如細(xì)菌耐藥性獸藥殘留以及抗生素的環(huán)境污染等"這些問題嚴(yán)重制約了畜牧業(yè)發(fā)展，同時也危害著人類健康4。尋找新的抗菌藥物成為必然選擇。宿主體內(nèi)存在著許多可抵抗病原微生物感染的分子物質(zhì)。因此，尋找與開發(fā)動物體內(nèi)具有抗菌活性的物質(zhì)可為綠色畜牧業(yè)健康發(fā)展保駕護(hù)航。

雞的脾臟和肝臟中有很多具有重要生理功能的物質(zhì)刊，其中有許多物質(zhì)在抵抗病原微生物感染方面具有重要作用，維護(hù)了機(jī)體健康。本研究從雞的脾臟和肝臟中提取具有抗微生物活性的物質(zhì)，以期為研發(fā)新的抗菌藥物提供新思路。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1雞的脾臟和肝臟來源。雞的脾臟和肝臟采集自河南省新鄉(xiāng)市洪廣鎮(zhèn)中心菜市場。嚴(yán)格按無菌操作方法采取當(dāng)天早上屠宰的雞的新鮮脾臟和肝臟，經(jīng)過檢驗(yàn)確認(rèn)無傳染病，置于滅菌燒杯中，在4～10C冷藏條件下運(yùn)至河南科技學(xué)院動物科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，保存在-20C冰箱中，備用。1.1.2細(xì)菌來源。大腸桿菌CVCC2059和金黃色葡萄球菌ATCC25923菌種，由河南科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。1.1.3常規(guī)試劑與儀器。試劑：硫酸慶大霉素注射液，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn);高純度瓊脂糖，美國AMRE-SCO生產(chǎn);胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn);其他試劑為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑。儀器：移液器（型號為KHBBIOHIT），芬蘭百得公司生產(chǎn);一次性滅菌培養(yǎng)皿（直徑為90mm），海門門市三和興亞醫(yī)療器械廠生產(chǎn);高壓滅菌鍋，購自上海申安醫(yī)療器械廠;生物超凈工作臺，購自蘇州凈化設(shè)備有限公司;37C培養(yǎng)箱，購自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;數(shù)顯恒溫水浴鍋，購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司;純水儀，購自四川卓越水處理設(shè)備有限公司;電子天平，購自深圳市博途電子科技有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1培養(yǎng)基制備。營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基參照文獻(xiàn)[5]進(jìn)行制備，營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基參照文獻(xiàn)[6]進(jìn)行制備。

1.2.2細(xì)菌培養(yǎng)。參照文獻(xiàn)[6]進(jìn)行細(xì)菌的分離與培養(yǎng)。通過染色方法來判斷細(xì)菌純度，參照文獻(xiàn)[7]進(jìn)行染色。

1.2.3雞脾臟粗提物的制備。按照參考文獻(xiàn)[8-9]制備雞脾臟和肝臟粗提物，并測定蛋白濃度。

1.2.4抗菌活性分析。參照文獻(xiàn)[10]進(jìn)行粗提物的抗菌活性檢測。以慶大霉素為陽性對照，以滅菌生理鹽水為陰性對照。

2結(jié)果與分析

2.1雞脾臟和肝臟粗提物的測定

用滅菌去離子水將凍干后的雞脾臟和肝臟粗提物全部溶解后，通過紫外分光光度儀測定的質(zhì)量濃度分別為4.28、5.74g/L。

2.2抗菌活性分析

粗提物對于金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽性菌的代表）和大腸桿菌（革蘭氏陰性菌的代表）的抗菌活性結(jié)果如圖1、表1所示?？梢钥闯?，陽性對照和陰性對照均正確，雞脾臟和肝臟的粗提物對所測試的細(xì)菌具有抗菌活性作用。這表明從雞脾臟和肝臟中提取的粗提物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有很好的抑菌作用。

3結(jié)論與討論

畜牧業(yè)中抗生素濫用給人類健康帶來了極大威脅，國家開始禁止在飼料中添加抗生素"。尋找新的抗菌物質(zhì)代替抗生素成為一種必然。雞的脾臟和肝臟是屠宰后的“下水”，常被丟棄。本研究通過試驗(yàn)證實(shí)了雞的脾臟和肝臟粗提物中存在著抗菌物質(zhì)。因此，制備雞脾臟和肝臟的粗提物添加于飼料中代替抗生素，可以預(yù)防和治療雞的某些細(xì)菌性疾病，從而達(dá)到無抗養(yǎng)殖的目的。

本研究僅分析了分離自雞脾臟和肝臟的粗提物的抗菌活性，發(fā)現(xiàn)粗提物具有抗金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抗菌活性：但是針對發(fā)揮了抗菌活性作用的物質(zhì)還需進(jìn)行更深人的研究2。通過其他方法獲得雞脾臟和肝臟中具有抗菌活性的物質(zhì)，并進(jìn)一步分析其藥效學(xué)及藥物代謝動力學(xué)，對新抗菌活性物質(zhì)在臨床，上替代抗生素應(yīng)用具有重要意義。

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