張媛媛 陳勤

摘 ? 要：馬鈴薯脫毒主要是通過莖尖分生組織培養(yǎng)脫去馬鈴薯 PVX、PVY、PVS、PLRV和PSTV等病毒、類病毒。莖尖分生組織脫毒培養(yǎng)的主要技術(shù)步驟有培養(yǎng)基的配置、剝離材料的處理、脫毒苗的病毒檢測及脫毒苗防蟲網(wǎng)棚移栽。通過科學(xué)化管理，可生產(chǎn)出脫毒種薯用于推廣，這樣可以提高優(yōu)良品種特性，提高種薯產(chǎn)量和質(zhì)量，有效延長馬鈴薯品種服務(wù)生產(chǎn)的年限。

關(guān)鍵詞：莖尖脫毒技術(shù);原理;可行性;技術(shù)步驟

據(jù)報道可知，侵染馬鈴薯的病毒約有30種，在我國廣大馬鈴薯產(chǎn)區(qū)造成顯著影響的有7種，包括6種病毒（PVX，PVY，PVA，PVM，PVS，PLRV）和1種類病毒（PSTVd）。

1 ? 榆林地區(qū)脫毒種薯繁育體系概況

榆林市馬鈴薯脫毒技術(shù)應(yīng)用工作始于20世紀(jì)80年代中期，由于當(dāng)時經(jīng)費(fèi)嚴(yán)重不足、基礎(chǔ)設(shè)施條件太差以及繁種體系極不健全等原因，導(dǎo)致脫毒微型薯生產(chǎn)無法迅速發(fā)展。

2013年起，該市以探索馬鈴薯原種繁、供、儲、用新模式和補(bǔ)貼新辦法為出發(fā)點(diǎn)，組織實(shí)施馬鈴薯良種繁供“一畝田”工程，按照縣區(qū)每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)1/3村組實(shí)施的辦法，3年實(shí)現(xiàn)1個輪回。至2017年，全市馬鈴薯良種覆蓋率達(dá)到80%以上。

2 ? 榆林地區(qū)開展馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)的可行性

榆林市位于黃土高原北部，海拔高度為1 000～1 500 m，年均氣溫8 ℃，冬季時間長而寒冷，夏季涼爽，晝夜溫差大;光照充足，土層深厚，具備發(fā)展馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的自然條件。馬鈴薯耐旱、適應(yīng)性強(qiáng)、營養(yǎng)豐富、耐貯藏。因此，馬鈴薯一直是本地大面積種植的主要作物之一，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和農(nóng)民生活中占據(jù)相當(dāng)重要的位置，已被確定為榆林市農(nóng)業(yè)的五大主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一。

3 ? 馬鈴薯莖尖分生組織培養(yǎng)主要技術(shù)步驟

3.1 ? 培養(yǎng)基的制備

以MS作為基本培養(yǎng)基，通過添加NAA、6-BA、GA3、泛酸鈣、激動素（KT）5種生長調(diào)節(jié)劑，針對不同的品種設(shè)計不同激素成分和配比濃度的培養(yǎng)基。

3.2 ? 剝離材料的準(zhǔn)備

選用具備標(biāo)準(zhǔn)薯形的薯塊，在室溫下放置于暗光中萌芽，大約12 d薯塊長出0.5 cm的白色簇生芽時，將薯塊放置于自然散射光下繼續(xù)萌芽，長至1.5～2.0 cm時取芽。

3.3 ? 剝離材料的處理

用鑷子小心取下薯塊上的短壯芽，放在罩有紗布的燒杯中，用自來水沖洗30 min。在無菌操作臺上，用75%的酒精均勻噴濕靜置1 min，用滅菌水沖洗一遍，再用6%的次氯酸鈉溶液浸泡10 min，之后再用無菌水沖洗3遍，放置在燒杯內(nèi)備用。

3.4 ? 芽莖尖的剝離和培養(yǎng)

將處理好的芽子用無菌鑷子夾取放置10倍的體視顯微鏡下，用解剖針剝離1～2個葉原基的莖尖置于培養(yǎng)基中。將接種后的試管放在日光溫室內(nèi)培養(yǎng)，溫度條件為20～27 ℃，光照時間為16 h/d。待苗高約1 cm轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)。生根后的脫毒苗進(jìn)行切段擴(kuò)繁，擴(kuò)繁數(shù)量足夠進(jìn)行病毒檢測。

3.5 ? 脫毒效果的檢測

經(jīng)過脫毒處理的植株必須經(jīng)過病毒學(xué)檢測，才能確定是否存在病毒。

3.5.1 ? 6種病毒檢測方法

目前廣泛沿用的病毒檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA），是一種免疫酶技術(shù)（NY/T 1212-2006），是在不影響酶活性和免疫球蛋白分子共價結(jié)合成酶標(biāo)標(biāo)記抗體。酶標(biāo)記抗體可直接或通過免疫橋與包被在固相支持物上帶測定的抗原和抗體特異性的結(jié)合，再通過酶對底物作用產(chǎn)生有顏色或電子密度高的可溶性產(chǎn)物，借以顯示出抗體的性質(zhì)和數(shù)量。

3.5.2 ? 紡錘塊莖類病毒（PSTVD）檢測方法

檢測原理：將類病毒的核酸RNA在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下轉(zhuǎn)錄為cRNA，再以此cRNA為模板，在Taq DNA聚合酶的催化作用下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后根據(jù)判斷PCR產(chǎn)物中是否有目標(biāo)特異性條帶，從而達(dá)到鑒定類病毒的目的。

3.6 ? 脫毒苗防蟲網(wǎng)棚移栽

3.6.1 ? 煉苗

從培養(yǎng)室取出放置在溫室里，打開瓶蓋放置2～3 d煉苗。

3.6.2 ? 防蟲網(wǎng)棚的建立

選擇四周無高大建筑物，水源、電源、交通便利、通風(fēng)透光的地方建網(wǎng)棚，周圍2 km內(nèi)不能有馬鈴薯、其他茄科、十字花科作物和桃樹。網(wǎng)棚用熱鍍鋅鋼管作支撐，隔離網(wǎng)紗的孔徑要達(dá)到60～80目。

3.6.3 ? 移栽前準(zhǔn)備

以蛭石作為主要基質(zhì)。先用園藝地布鋪好地面，再把苗床架好，然后把蛭石和甲拌磷、硫酸鉀、磷酸二銨混合均勻，在移栽前1 d澆水浸透。

3.6.4 ? 移栽

將經(jīng)煉苗的脫毒苗用鑷子取出，洗凈根系殘留的培養(yǎng)基，剪短較長的根系，然后用生根粉溶液蘸根，按株行距6 cm×7 cm載入基質(zhì)2～2.5 cm深。7～10 d后及時去掉遮陽網(wǎng)，根據(jù)苗情噴施營養(yǎng)液;30 d后注意防治晚疫病，每隔7 d噴施代森錳鋅、甲基異硫磷、農(nóng)用鏈霉素等藥劑。收獲時應(yīng)避免機(jī)械損傷和品種混雜。收獲后攤晾4～7 d，剔除爛薯、病薯及雜物。

因此，本文采用莖尖脫毒技術(shù)來脫除馬鈴薯體內(nèi)對生產(chǎn)造成危害的病毒及類病毒，恢復(fù)馬鈴薯的優(yōu)良種性、改善品質(zhì)、提高產(chǎn)量，對提高榆林馬鈴薯生產(chǎn)技術(shù)水平和產(chǎn)業(yè)開發(fā)水平、增強(qiáng)市場競爭力、增加農(nóng)民收入、促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要意義。

（收稿日期：2019-06-13）