員盎然 孫小娟 馬小雯 高靜 謝禛名 張妍 秦棟 霍俊偉

摘要：【目的】了解黑穗醋栗發(fā)生二次萌芽過程中總酚含量及其合成代謝關(guān)鍵酶活性的變化規(guī)律，為揭示黑穗醋栗發(fā)生二次萌芽的內(nèi)在機(jī)理及其人工調(diào)控提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā恳砸装l(fā)生二次萌芽的黑穗醋栗品種亞德和不易發(fā)生二次萌芽的黑穗醋栗品種布勞德為試材，使用30.0 mg/L赤霉素（GA3）和50.0 mg/L脫落酸（ABA）進(jìn)行葉面噴施處理，以噴清水為對照（CK1和CK2），利用Folin-酚比色法和酶聯(lián)免疫分析試劑盒測定各處理黑穗醋栗品種二次萌芽的總酚含量及關(guān)鍵酶活性。【結(jié)果】在黑穗醋栗品種亞德和布勞德發(fā)生二次萌芽過程中，總酚含量及苯丙氨酸解氨酶（PAL）、查爾酮異構(gòu)酶（CHI）和肉桂酸-4-羥化酶（C4H）活性降低，多酚氧化酶（PPO）活性升高;經(jīng)30.0 mg/L GA3處理后亞德和布勞德二次萌芽的總酚含量明顯低于CK1和CK2，PAL和CHI活性明顯低于CK1和CK2，PPO活性明顯高于CK1和CK2，C4H活性總體上低于CK1和CK2;經(jīng)50.0 mg/L ABA處理后亞德二次萌芽的總酚含量顯著高于GA3處理和CK1（P<0.05，下同），經(jīng)50.0 mg/L ABA處理亞德各測定日期（除8月17日外）的總酚含量均顯著高于GA3處理，且明顯高于CK2;50.0 mg/L ABA處理的亞德和布勞德PAL活性明顯高于GA3處理及CK1和CK2，PPO活性除8月17日外均顯著低于GA3處理，且明顯低于CK1和CK2，CHI和C4H活性總體上明顯高于GA3處理及CK1和CK2?！窘Y(jié)論】葉面噴施50.0 mg/L ABA可提高黑穗醋栗品種亞德和布勞德二次萌芽的代謝關(guān)鍵酶PAL、CHI和C4H活性，降低PPO活性，促進(jìn)總酚合成并抑制其氧化分解，從而抑制黑穗醋栗品種亞德和布勞德發(fā)生二次萌芽。

關(guān)鍵詞： 黑穗醋栗;二次萌芽;赤霉素（GA3）;脫落酸（ABA）;酚類物質(zhì)含量;酶活性

中圖分類號： S663.9? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）06-1263-08

Abstract：【Objective】The aim of the study was to investigate the changes of total phenolic content and anabolic key enzyme activities during the secondary bud burst of black currant，and provide a scientific basis for revealing the internal mechanism and artificial regulation of secondary bud burst. 【Method】The black currant variety Adelinia which was easily to be germinated twice and the black currant variety Brodtrop which was not easily to be germinated twice were used as test materials，and foliar spray treatment with 30.0 mg/L gibberellin（GA3） and 50.0 mg/L abscisic acid（ABA） was set，and water was used as control（CK）. Folin-phenol colorimetric assay and enzyme-linked immunosorbent assay kit were used to determine the total phenolic content and its key enzyme activity in secondary bud burst. 【Result】During the se-condary bud burst of the black currant varieties Adelinia and Brodtrop，the total phenolic content decreased gradually，phenylalanine ammonia lyase（PAL），chalcone isomerase（CHI） and cinnamic acid-4-hydroxyl（C4H）activities were decreased，and the activity of polyphenol oxidase（PPO） was increased. The decrease speed of total phenolic content of 30.0 mg/L GA3 treated Adelinia and Brodtrop was? faster than that of CK1 and CK2，respectively. The activities of PAL and CHI were lower than that of CK1 and CK2. PPO activity was higher than CK1 and CK2，C4H activity was lower than CK1 and CK2. The total phenolic content of 50.0 mg/L ABA treated Adelinia secondary bud burst was significantly higher than GA3 treatment and CK1（P<0.05， the same below），and total phenolic content on the date of determination（except Brodtrop on August 17） was significantly higher than that of GA3 treatment， and was also higher than CK2. The PAL activities of 50.0 mg/L ABA treated Adelinia and Brodtrop were higher than GA3 treatment， CK1 and CK2， PPO activity except on August 17 was significantly lower than GA3 treatment， was greatly lower than CK1 and CK2， CHI and C4H activity was higher than GA3 treatment， CK1 and CK2. 【Conclusion】Foliar application of 50.0 mg/L ABA inhibits the activity of key enzymes PAL，CHI and C4H in the secondary bud burst of Adelinia and Brodtrop，promotes PPO activity of key enzymes，promotes total phenol synthesis and inhibits total phenol oxidation，thereby inhibiting the secondary bud burst of Adelinia and Brodtrop.

Key words： black currant（Ribes nigrum L.）;secondary sprouting;gibberellin（GA3）;abscisic acid（ABA）;phenolic content;enzyme activity

0 引言

【研究意義】黑穗醋栗（Ribes nigrum L.）俗稱黑加侖，屬虎耳草科（Saxifragaceae）茶藨子屬（Subgen ribes）植物，果實(shí)為紫黑色小果，含有大量糖、有機(jī)酸、花青素、礦物質(zhì)及各種維生素，風(fēng)味獨(dú)特且營養(yǎng)豐富（霍俊偉等，2011;胡習(xí)禎和徐曉燕，2013;李曙雷，2013;李芳曉，2014），是以富含維生素C而著稱的新興水果之一（Qin et al.，2017b），在亞洲、歐洲和北美洲均有栽培，我國主要集中種植于東北三省及新疆等地（Ghedira et al.，2008;Qin et al.，2012;李芳曉等，2014），南方部分省份也有引種栽培（王瑞等，2016）。黑穗醋栗的葉片可用于制茶，全株經(jīng)提煉入藥可用于預(yù)防和治療貧血、通風(fēng)及水腫等多種疾病，是整株植株均可開發(fā)利用的優(yōu)良果樹品種（楊玉平等，2006;賈麗麗和路金才，2008）。但在實(shí)際生產(chǎn)中，黑龍江地區(qū)的一些黑穗醋栗品種出現(xiàn)嚴(yán)重的二次萌芽現(xiàn)象（相對于春季萌發(fā)，稱之為二次萌芽），株叢發(fā)生二次萌芽的枝條在90%以上（王歡歡等，2015），使樹體營養(yǎng)大量流失，嚴(yán)重影響樹體次年的發(fā)育，限制了該產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。已有研究表明，外源赤霉素（GA3）可促進(jìn)甜櫻桃萌芽（魏海蓉等，2005a，2015b），而脫落酸（ABA）在一定程度上能抑制黑穗醋栗二次萌芽（秦棟等，2017;張椿浩，2017;張椿浩等，2018），但對其內(nèi)在機(jī)理的研究不夠深入。因此，探究黑穗醋栗發(fā)生二次萌芽的內(nèi)在機(jī)理，對其人工調(diào)控及黑穗醋栗產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】魏海蓉等（2005a，2015b）研究發(fā)現(xiàn)，外源ABA通過增強(qiáng)甜櫻桃PAL活性、降低PPO活性而間接促進(jìn)酚類物質(zhì)合成，減緩酚類物質(zhì)氧化分解速度，從而抑制芽的萌發(fā)。王海波等（2006）研究報(bào)道，油桃和梨等果樹的酚類物質(zhì)含量及其關(guān)鍵酶活性變化直接影響芽的休眠和萌發(fā)進(jìn)程。Cevallos-Casals和Cisneros-Zevallos（2010）研究認(rèn)為，植物多酚是次生代謝物的重要組成部分，具有極強(qiáng)的自由基清除能力，也是非常重要的非酶類抗氧化物，參加植物抗逆應(yīng)答反應(yīng)，其含量和代謝變化與植物的休眠及萌發(fā)密切相關(guān)。本課題組前期研究表明，外源GA3在一定程度上可促使黑穗醋栗二次萌芽發(fā)生，而ABA可抑制黑穗醋栗二次萌芽發(fā)生，且隨二次萌芽發(fā)生進(jìn)程的推移，芽內(nèi)的內(nèi)源激素及呼吸代謝和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等隨之發(fā)生變化（秦棟等，2017;張椿浩，2017;Qin et al.，2017a;張椿浩等，2018）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，關(guān)于黑穗醋栗二次萌芽發(fā)生過程中總酚含量和關(guān)鍵酶活性變化及外源激素對總酚含量和關(guān)鍵酶活性產(chǎn)生作用的研究鮮見報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問題】測定ABA和GA3處理下2個黑穗醋栗品種發(fā)生二次萌芽過程中芽內(nèi)總酚含量及4種關(guān)鍵酶[（苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、查爾酮異構(gòu)酶（CHI）、肉桂酸-4-羥化酶（C4H）]活性，為全面揭示黑穗醋栗二次萌芽發(fā)生的內(nèi)在機(jī)理提供科學(xué)依據(jù)，為人工調(diào)控黑穗醋栗二次萌芽及促進(jìn)其產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2017年8月在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑穗醋栗資源圃進(jìn)行，選取生長勢一致的黑穗醋栗品種亞德（Adelinia）和布勞德（Brodtrop）各15株為試驗(yàn)用樹。其中，亞德為在常規(guī)管理下易發(fā)生二次萌芽品種，布勞德為在常規(guī)管理下不易發(fā)生二次萌芽品種。GA3和ABA購自哈爾濱德利福斯試劑公司。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 參考張椿浩（2017）的方法，配制30.0 mg/L GA3和50.0 mg/L ABA溶液，以清水處理為對照（CK1和CK2），在果實(shí)采收后的2017年8月11日開始選擇生長勢較一致的亞德和布勞德10年生株叢進(jìn)行噴施處理，連續(xù)處理3 d，每個品種分別噴施GA3、ABA和清水各5株，以噴至葉片滴水為止。于2017年8月10日進(jìn)行第1次采樣，此后從處理第1 d算起，每7 d采集1年生枝條的中上部芽1次，每次約采集100個芽，直至完全萌芽，共采樣5次（各次采集的黑穗醋栗二次萌芽見圖1）。采集的二次萌芽用液氮速凍后帶回實(shí)驗(yàn)室置于-80 ℃保存，用于測定酚類物質(zhì)含量和關(guān)鍵酶活性。

1. 2. 2 總酚含量測定 參考秦棟（2009）的方法，利用Folin-酚比色法（略加改進(jìn)）測定各處理黑穗醋栗芽的總酚含量。

1. 2. 3 酶活性測定 參考李合生（2000）的方法（略加改進(jìn)）進(jìn)行PAL提取并測定其活性，參考Kee-nan等（2012）的方法（略加改進(jìn)）進(jìn)行PPO活性測定，分別參照植物查爾酮異構(gòu)酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒和植物肉桂酸-4-羥化酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）說明進(jìn)行CHI和C4H提取并測定其活性。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2003進(jìn)行整理和繪圖，以SPSS 22.0進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 黑穗醋栗品種二次萌芽的總酚含量變化情況

從圖2-A可看出，隨測定時間的推移，各處理亞德的總酚含量均呈降低趨勢，且在9月7日降至最低值。其中，GA3處理亞德二次萌芽的總酚含量在8月17日—9月7日均低于CK1，但在8月17日和9月7日與CK1差異不顯著（P>0.05，下同），在8月24和31日顯著低于CK1（P<0.05，下同）;ABA處理亞德二次萌芽的總酚含量在8月17日—9月7日均顯著高于GA3處理和CK1，其中在9月7日萌芽結(jié)束時的總酚含量最低值（5.76 mg/gFW）是GA3處理最低值的2.47倍，是CK1最低值的1.92倍，即ABA處理亞德二次萌芽的總酚含量降速明顯慢于GA3處理和CK1，GA3處理則明顯快于CK1。說明葉面噴施50.0 mg/L ABA可促進(jìn)亞德二次萌芽的總酚合成并抑制其分解，而葉面噴施30.0 mg/L GA3會抑制亞德二次萌芽的總酚合成。

從圖2-B可看出，各處理布勞德二次萌芽的總酚含量均隨測定時間推移而降低，但在8月17日—9月7日的總酚含量均以ABA處理最高，CK2次之，GA3處理始終最低，至9月7日萌芽結(jié)束時，ABA處理、CK2和GA3處理的總酚含量分別為6.57、4.05和3.13 mg/gFW。其中，在8月17日三者間的總酚含量無顯著差異，在8月24日ABA處理顯著高于GA3處理，與CK2差異不顯著;在8月31日三者間差異顯著;在9月7日ABA處理顯著高于GA3處理和CK2，CK2與GA3處理差異不顯著，即ABA處理布勞德二次萌芽的總酚含量降速總體上慢于GA3處理和CK2，GA3處理則快于CK2。說明葉面噴施50.0 mg/L ABA可抑制布勞德二次萌芽的總酚分解，而葉面噴施30.0 mg/L GA3會抑制布勞德二次萌芽的總酚合成。

綜上所述，葉面噴施30.0 mg/L GA3會促使亞德和布勞德二次萌芽的總酚分解，葉面噴施50.0 mg/L ABA則促進(jìn)亞德和布勞德二次萌芽的總酚合成。

2. 2 黑穗醋栗二次萌芽的代謝關(guān)鍵酶活性變化特征

2. 2. 1 PAL活性的變化 從圖3可看出，各處理亞德和布勞德二次萌芽PAL活性的變化趨勢與總酚含量的變化趨勢一致，均隨測定時間推移而降低，且降速在8月17—24日最快，在9月7日降至最低值。其中，CK1和CK2在8月24日的PAL活性分別為0.82和0.97 ΔOD290/gFW，較其相應(yīng)的初始PAL活性（分別為2.12和2.10 ΔOD290/gFW）降低61.32%和53.81%，至9月7日萌芽結(jié)束時降至最低值（分別為0.45和0.58 ΔOD290/gFW）。說明亞德和布勞德在二次萌芽過程中其PAL活性降低對二次萌芽發(fā)生產(chǎn)生一定抑制作用。

從圖3-A可看出，在亞德發(fā)生二次萌芽過程中，ABA處理二次萌芽的PAL活性在8月17日—9月7日均高于GA3處理和CK1，而GA3處理始終低于CK1。其中，ABA處理二次萌芽的PAL活性在8月17日—9月7日均顯著高于GA3處理，在8月17和24日與CK1差異不顯著，在8月31日和9月7日顯著高于CK1;在9月7日萌芽結(jié)束時ABA處理二次萌芽的PAL活性為0.82 ΔOD290/gFW，約是GA3處理（0.45 ΔOD290/gFW）和CK1（0.27 ΔOD290/gFW）的3.04和1.82倍。說明噴施50.00 mg/L ABA可提高亞德的芽內(nèi)PAL活性，而噴施30.00 mg/L GA3會降低亞德的芽內(nèi)PAL活性。

從圖3-B可看出，各處理布勞德二次萌芽的PAL活性在8月17日無顯著差異，在8月24日差異顯著，至8月31日時ABA處理顯著高于GA3處理和CK2，但GA3處理與CK2差異不顯著;在9月7日萌芽結(jié)束時GA3處理、CK2和ABA處理的PAL活性分別為0.41、0.58和0.69 ΔOD290/gFW，ABA處理顯著高于GA3處理，但二者均與CK2差異不顯著。說明噴施50.00 mg/L ABA可提高布勞德的芽內(nèi)PAL活性，而噴施30.00 mg/L GA3會降低布勞德的芽內(nèi)PAL活性。

綜上所述，葉面噴施30.00 mg/L GA3會降低亞德和布勞德的PAL活性，葉面噴施50.00 mg/L ABA可提高亞德和布勞德的PAL活性。

2. 2. 2 PPO活性的變化 從圖4可看出，隨測定時間的推移，各處理亞德和布勞德二次萌芽的PPO活性總體上呈升高變化趨勢，并在9月7日升至最高值，與總酚含量的變化趨勢相反。其中，各處理二次萌芽PPO活性的升速在8月17—24日最快;CK1和CK2二次萌芽的PPO活性在9月7日萌芽結(jié)束時升至最高值（分別為19.34和18.02 ΔOD460/gFW），分別為亞德初始PPO活性（8.34 ΔOD460/gFW）的2.32倍、布勞德初始PPO活性（5.21 ΔOD460/gFW）的3.46倍。說明亞德和布勞德在發(fā)生二次萌芽過程中其芽內(nèi)PPO活性的提高對二次萌芽發(fā)生產(chǎn)生一定促進(jìn)作用。

從圖4-A可看出，GA3處理亞德二次萌芽的PPO活性在8月17日—9月7日均高于ABA處理和CK1。GA3處理亞德二次萌芽的PPO活性在8月17日—9月7日與CK1無顯著差異;ABA處理的PPO活性在8月17日高于CK1，低于GA3處理，但差異均不顯著，而在8月24日—9月7日低于CK1，且在8月31日和9月7日顯著低于CK1，在8月24日—9月7日均顯著低于GA3處理;至9月7日萌芽結(jié)束時ABA處理的PPO活性為16.67 ΔOD460/gFW，分別較GA3處理（19.90 ΔOD460/gFW）和CK1（19.34 ΔOD460/gFW）低16.23%和13.81%。說明噴施50.00 mg/L ABA可降低亞德的芽內(nèi)PPO活性，而噴施30.00 mg/L GA3會提高亞德的芽內(nèi)PPO活性。

從圖4-B可看出，GA3處理布勞德二次萌芽的PPO活性均高于CK2和ABA處理。8月24日—9月7日GA3處理布勞德二次萌芽的PPO活性均顯著高于ABA處理，但與CK2無顯著差異，ABA處理與CK2也無顯著差異;至9月7日萌芽結(jié)束時ABA處理的PPO活性為16.23 ΔOD460/gFW，分別較GA3處理（19.01 ΔOD460/gFW）和CK2（18.02 ΔOD460/gFW）低14.62%和9.93%。說明噴施50.00 mg/L ABA可降低布勞德的芽內(nèi)PPO活性，而噴施30.00 mg/L GA3會提高布勞德的芽內(nèi)PPO活性。

綜上所述，葉面噴施30.00 mg/L GA3會提高亞德和布勞德的芽內(nèi)PPO活性，噴施50.00 mg/L ABA則降低亞德和布勞德的芽內(nèi)PPO活性。

2. 2. 3 CHI活性的變化 從圖5可看出，各處理二次萌芽的CHI活性隨萌芽進(jìn)程的推移總體上呈降低趨勢，與總酚含量的變化規(guī)律基本一致，并在9月7日降至最低值。其中，CK1和CK2在9月7日的CHI活性分別為0.54和0.61 U/mgFW，分別較亞德初始CHI活性（2.32 U/mgFW）和布勞德初始CHI活性（2.08 U/mgFW）低76.72%和70.67%。說明亞德和布勞德在發(fā)生二次萌芽過程中芽內(nèi)CHI活性的降低對其二次萌芽的發(fā)生具有一定抑制作用。

從圖5-A可看出，GA3處理亞德二次萌芽的CHI活性在8月17日—9月7日均低于ABA處理和CK1，而ABA處理亞德二次萌芽的CHI活性在8月17日低于CK1，在8月24日—9月7日均高于CK1。其中，ABA處理亞德二次萌芽的CHI活性在8月17日和9月7日與GA3處理和CK1無顯著差異;在8月24和31日顯著高于GA3處理，但與CK1差異不顯著;至9月7日萌芽結(jié)束時，ABA處理的CHI活性為0.77 U/mgFW，稍高于GA3處理（0.53 U/mgFW）和CK1（0.54 U/mgFW）。說明噴施30.00 mg/L GA3會降低亞德二次萌芽的CHI活性，而噴施50.00 mg/L ABA總體上可提高亞德二次萌芽的CHI活性。

從圖5-B可看出，ABA處理布勞德二次萌芽的CHI活性在8月17和24日低于CK2，但高于GA3處理，差異不顯著;在8月31日ABA處理布勞德二次萌芽的CHI活性高于CK2，且顯著高于GA3處理;至9月7日萌芽結(jié)束時ABA處理的CHI活性為0.76 U/mgFW，明顯高于CK2的0.61 U/mgFW，顯著高于GA3處理的0.43 U/mgFW。說明噴施30.00 mg/L會促使布勞德二次萌芽的CHI活性降低，而噴施50.00 mg/L ABA總體上可提高布勞德二次萌芽的CHI活性。

綜上所述，噴施30.00 mg/L GA3會促使亞德和布勞德的芽內(nèi)CHI活性降低，噴施50.00 mg/L ABA可提高亞德和布勞德的芽內(nèi)CHI活性。

2. 2. 4 C4H活性的變化 從圖6可看出，各處理二次萌芽的C4H活性均隨萌芽進(jìn)程的推移均呈降低趨勢，并在9月7日降至最低值。其中，CK1和CK2在9月7日的C4H活性分別為0.04和0.06 U/mgFW，分別比CK1初始C4H活性（1.12 U/mgFW）和CK2初始C4H活性（1.11 U/mgFW）降低96.43%和94.59%。說明亞德和布勞德在發(fā)生二次萌芽過程中芽內(nèi)C4H活性的降低對其二次萌芽的發(fā)生具有一定抑制作用。

從圖6-A可看出，ABA處理亞德二次萌芽的C4H活性在8月17日—9月7日均高于GA3處理和CK1，CK1的C4H活性總體上也高于GA3處理。其中，ABA處理的C4H活性在8月17日顯著高于GA3處理和CK1，但GA3處理與CK1差異不顯著;ABA處理的C4H活性在8月24日與CK1差異不顯著，但顯著高于GA3處理;ABA處理的C4H活性在8月31日和9月7日與GA3處理和CK1無顯著差異;至9月7日萌芽結(jié)束時ABA處理的C4H活性為0.05 U/mgFW，與GA3處理和CK1的C4H活性（均約為0.04 U/mgFW）相近。說明噴施30.00 mg/L GA3對亞德二次萌芽C4H活性降低無明顯影響，而噴施50.00 mg/L ABA對提高亞德二次萌芽的C4H活性具有一定促進(jìn)作用。

從圖6-B可看出，ABA和GA3處理對布勞德二次萌芽C4H活性的影響效果與對亞德較相似，說明噴施30.00 mg/L GA3對布勞德二次萌芽C4H活性降低無明顯影響，而噴施50.00 mg/L ABA對提高布勞德二次萌芽的C4H活性具有一定促進(jìn)作用。

綜上所述，噴施30.00 mg/L GA3對亞德和布勞德二次萌芽C4H活性變化的影響不明顯，而噴施50.00 mg/L ABA可在一定程度上提高亞德和布勞德二次萌芽的芽內(nèi)C4H活性。

3 討論

黑穗醋栗是第三代果樹的優(yōu)秀代表，具有極好的發(fā)展前景，但生產(chǎn)中亟待解決其發(fā)生二次萌芽問題（王歡歡等，2015），而且目前對其二次萌芽的酚類物質(zhì)代謝特征與發(fā)生二次萌芽關(guān)系的了解甚少，因此，需全面揭示其發(fā)生二次萌芽的機(jī)理以促進(jìn)黑穗醋粟產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

本研究結(jié)果表明，易發(fā)生二次萌芽的亞德和不易發(fā)生二次萌芽的布勞德在發(fā)生二次萌芽過程中其芽內(nèi)的總酚含量均隨芽萌發(fā)時間推移而降低，并在萌芽結(jié)束時降至最低值，表明酚類物質(zhì)在黑穗醋栗發(fā)生二次萌芽過程中對二次萌芽產(chǎn)生一定程度的抑制作用，與Benkeblia（2003）對洋蔥、魏海蓉等（2006）對甜櫻桃、畢磊（2009）對梨的研究結(jié)果相似。

植物體內(nèi)酚類物質(zhì)的主要合成途徑包括類黃酮途徑、生物堿生物合成途徑和異戊二烯代謝途徑，其中以類黃酮途徑為主（Wojdylo et al.，2008），且在主要代謝酶如PAL、C4H和CHI等的作用下合成（Grotewold，2006;馬君蘭等，2007;李雪等，2016），在PPO等的作用下氧化分解（代麗等，2007）。本研究結(jié)果表明，隨黑穗醋栗二次萌芽的發(fā)生，休眠被打破，總酚含量降低，PAL、CHI和C4H活性隨之降低，而PPO活性升高，與王海波（2006）對油桃、劉芳（2014）對百合的研究結(jié)果一致?？梢?，通過調(diào)控PAL、PPO、CHI和C4H等的活性可控制酚類物質(zhì)含量，進(jìn)而控制植物芽的休眠或解除進(jìn)程。

魏海蓉等（2005b）研究表明，外源ABA可增強(qiáng)甜櫻桃PAL活性，降低PPO活性，間接促進(jìn)酚類物質(zhì)合成，減緩酚類物質(zhì)氧化分解速度，從而抑制芽的萌發(fā)，外源GA3的作用卻與之相反。本研究中，葉面噴施30.00 mg/L GA3后，黑穗醋栗品種亞德和布勞德二次萌芽的PPO活性升高，PAL和CHI活性降低，總酚合成減少;而噴施50.00 mg/L ABA后，黑穗醋栗品種亞德和布勞德二次萌芽的PPO活性降低，PAL和CHI活性升高，從而加快總酚合成，減緩總酚氧化分解速度，與魏海蓉等（2005b）的研究結(jié)果相似，與Qin等（2017a）的研究結(jié)果也吻合。本研究僅探究GA3和ABA對易發(fā)生二次萌芽品種亞德和不易發(fā)生二次萌芽品種布勞德二次萌芽總酚含量變化的影響，針對單種酚類物質(zhì)含量變化與二次萌芽的關(guān)系還需進(jìn)一步探究證實(shí)。

4 結(jié)論

酚類是影響黑穗醋栗發(fā)生二次萌芽的物質(zhì)，葉面噴施30.0 mg/L GA3可降低易發(fā)生二次萌芽黑穗醋栗品種亞德和不易發(fā)生二次萌芽品種布勞德二次萌芽的PAL、CHI和C4H活性，提高PPO活性，抑制總酚合成，從而促使亞德和布勞德發(fā)生二次萌芽;而葉面噴施50.0 mg/L ABA可提高亞德和布勞德二次萌芽的PAL、CHI和C4H活性，降低PPO活性，促進(jìn)總酚合成并抑制其氧化分解，從而抑制亞德和布勞德發(fā)生二次萌芽。

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（責(zé)任編輯 思利華）