林秀敏 張振凌 王勝超 閆夢(mèng)真 陳祎甜 張江山

摘 要 目的：建立白芍飲片的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，并進(jìn)行聚類(lèi)分析和主成分分析。方法：采用HPLC法。色譜柱為SunFire? C18，流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸水溶液（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為30 ℃，采集時(shí)間為70 min，進(jìn)樣量為15 μL。以芍藥苷為參照，建立26批不同產(chǎn)地白芍飲片及30批不同炮制方法白芍飲片的HPLC指紋圖譜;采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版）進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，確定共有峰;采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析和主成分分析。結(jié)果：26批不同產(chǎn)地白芍飲片共有9個(gè)共有峰，相似度均大于0.880;共指認(rèn)了6個(gè)峰，分別為沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷;聚類(lèi)分析結(jié)果顯示，當(dāng)余弦距離為15時(shí)26批樣品可聚為2類(lèi)，S1～S21聚為一類(lèi)，S22～S26聚為一類(lèi);經(jīng)主成分分析，前2個(gè)主成分的累積方差貢獻(xiàn)率為81.124%。30批不同炮制方法白芍飲片共有10個(gè)共有峰，相似度均大于0.970;共指認(rèn)了7個(gè)峰，分別為沒(méi)食子酸、兒茶素、丹皮酚新苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷;聚類(lèi)分析結(jié)果顯示，當(dāng)余弦距離為25時(shí)，30批樣品可聚為2類(lèi)，B1～B10聚為一類(lèi)，C1～C10、J1～J10聚為一類(lèi);經(jīng)主成分分析，前4個(gè)主成分的累積方差貢獻(xiàn)率為86.887%。結(jié)論：所建HPLC指紋圖譜及聚類(lèi)分析和主成分分析結(jié)果可為不同白芍飲片的質(zhì)量控制提供參考。

ABSTRACT?  OBJECTIVE： To establish HPLC fingerprints of Paeonia tactilora decoction pieces， and to conduct its cluster analysis and principal component analysis. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on SunFire? C18 column with mobile phase consisted of acetonitril-0.05% phosphoric acid solution （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 230 nm， the column temperature was 30 ℃， the collection time was 70 min，and sample size was 15 μL. Using paeoniflorin as reference， HPLC fingerprints of 26 batches P. tactilora decoction pieces from different habitats and 30 batches by different processed methods were established. The similarity of samples was evaluated by TCM Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System （2012 edition） to confirm common peak. Cluster analysis and principal component analysis were performed by using SPSS 20.0 software. RESULTS： There were 9 common peaks in HPLC fingerprints of 26 batches of sample from different habitats， the similarity of which was higher than 0.880. Six peaks were identified， including gallic acid， catechin， albiflorin， paeoniflorin， 1，2，3，4，6-pentagalloylglucose and benzoylpaeoniflorin. Cluster analysis showed that 26 batches of samples were clustered into 2 categories when cosine distance was 15. S1-S21 were clustered into one category; S22-S26 were clustered into the other category. By principal component analysis， the accumulative contribution rate of two main components was 81.124%. There were 10 common peaks in HPLC fingerprints of 30 batches of sample by different processed methods， the simi- larity of which was higher than 0.970. Seven peaks were identified， including gallic acid， catechin， aplopaeonoside， albiflorin， paeoniflorin， 1，2，3，4，6-pentagalloylglucose and benzoylpaeoniflorin. Cluster analysis showed that 30 batches of samples were clustered into 2 categories when cosine distance was 25. B1-B10 were clustered into one category; C1-C10 and J1-J10 were clustered into the other category. By principal component analysis， the accumulative contribution rate of four main components was 86.887%. CONCLUSIONS： Established HPLC fingerprint， the results of cluster analysis and principal component analysis can provide reference for quality control of decoction pieces of P. tactilora.

KEYWORDS? ?Paeonia tactilora decoction pieces; HPLC; Fingerprint; Cluster analysis; Principal component analysis

白芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，其性微寒，味苦、酸，歸肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)之功效，可用于治療血虛萎黃、月經(jīng)不調(diào)、自汗、盜汗、脅痛、腹痛、四肢攣痛、頭痛眩暈等癥[1]?，F(xiàn)代研究表明，白芍的主要藥理作用為保肝、鎮(zhèn)痛、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等[2-5]。2015年版《中國(guó)藥典》（一部）以芍藥苷作為白芍的控制指標(biāo)，而赤芍的指標(biāo)性控制成分也是芍藥苷，因此以芍藥苷作為白芍的質(zhì)量指標(biāo)，具有一定的局限性[1]。白芍中含有單萜及其苷類(lèi)、三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)類(lèi)和多糖類(lèi)等多種化學(xué)成分[6-9]，因此測(cè)定其中某個(gè)或幾個(gè)成分的含量，并不能全面反映白芍的質(zhì)量。指紋圖譜以表征中藥內(nèi)在質(zhì)量的整體變化為目的，符合中藥質(zhì)量控制整體性表征的分析特點(diǎn)[10-12]，同時(shí)借助化學(xué)計(jì)量法進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，能更全面地體現(xiàn)中藥的內(nèi)在品質(zhì)[13-14]。為此，本研究建立了26批不同產(chǎn)地白芍飲片及30批不同炮制方法白芍飲片的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，并結(jié)合相似度分析、聚類(lèi)分析、主成分分析對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，旨在為其質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

UltiMate 3000型HPLC儀，包括U3000型二極管陣列檢測(cè)器、version 7 Chromatogram 化學(xué)工作站（美國(guó)Thermo Fisher公司）;600型HPLC儀，包括2487型紫外檢測(cè)器、version 2 Empower化學(xué)工作站（美國(guó)Waters公司）;KQ-500 SV型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;BT25S型十萬(wàn)分之一天平、BSA224S-CW型萬(wàn)分之一天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16041901，純度：≥98.5%）、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16051601，純度：≥98.5%）、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16061211，純度：≥98.5%）、兒茶素對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16030812，純度：≥98%）均由成都曼斯特生物科技有限公司提供;沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)：PS-0258-0050，純度：98.5%）、苯甲酰芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：PS-13011802，純度：98.5%）、丹皮酚新苷對(duì)照品（批號(hào)：PS-08080102，純度：≥98%）均由成都普斯生物科技有限公司提供;乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

白芍藥材（編號(hào)：S1～S26）經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院張振凌教授鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia Lactiflora Pall.）的干燥根，并按2015年版《中國(guó)藥典》（四部）[15]“炮制”通則制成飲片;白芍飲片（編號(hào)：B1～B10，中試生產(chǎn)）、炒白芍飲片（編號(hào)：C1～C10）、酒白芍飲片（編號(hào)：J1～J10）均由安徽亳州市滬譙藥業(yè)有限公司提供（中試生產(chǎn)是指按國(guó)家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目要求，將實(shí)驗(yàn)室工藝在合作企業(yè)進(jìn)行工藝放大生產(chǎn)，以滿(mǎn)足企業(yè)生產(chǎn)的要求）。樣品信息詳見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：SunFire? C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，8%A→18%A;10～25 min，18%A→20%A;25～30 min，20%A;30～40 min，20%A→25%A;40～55 min，25%A →40%A;55～60 min，40%A→45%A;60～70 min，45%A→8%A）;采集時(shí)間：70 min;進(jìn)樣量：15 μL;流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品14.08 mg、兒茶素對(duì)照品10.90 mg、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品6.76 mg、芍藥苷對(duì)照品11.52 mg、丹皮酚新苷對(duì)照品10.51 mg、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖對(duì)照品10.33 mg、苯甲酰芍藥苷對(duì)照品10.99 mg，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得各單一對(duì)照品溶液。分別精密量取各單一對(duì)照品溶液1 mL，置于同一25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱(chēng)取白芍中粉（中粉指能全部通過(guò)四號(hào)篩，但混有不超過(guò)60%能通過(guò)五號(hào)篩的粉末）0.1 g，置于50 mL量瓶中，加50%乙醇35 mL，超聲（功率：500 W，頻率：50 Hz）處理30 min，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S10）適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，以芍藥苷峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，9個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.19%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD均小于2.34%（n= 6），表明本方法精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S10）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以芍藥苷峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，9個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.21%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD均小于2.61%（n=6），表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品（編號(hào)：S10）0.1 g，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以芍藥苷峰的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，9個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.34%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD均小于2.75%（n= 6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.4 儀器適用性試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液5 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以芍藥苷為參照，計(jì)算沒(méi)食子酸、兒茶素、丹皮酚新苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖和苯甲酰芍藥苷的相對(duì)保留時(shí)間。通過(guò)配對(duì)t檢驗(yàn)，考察不同儀器對(duì)色譜條件的適用性。結(jié)果，t=1.38，雙側(cè)P=0.22>0.05，表明相同色譜條件下，以芍藥苷為參照，兩種儀器所測(cè)色譜峰可定位其他成分的相對(duì)保留時(shí)間，且無(wú)顯著性差異，不同儀器不影響目標(biāo)峰的出峰順序，相對(duì)定位準(zhǔn)確，詳見(jiàn)表2、圖1。

2.4 不同產(chǎn)地白芍飲片HPLC指紋圖譜的生成與相似度、共有峰分析

2.4.1 HPLC指紋圖譜的生成 取26批不同產(chǎn)地白芍飲片（編號(hào)：S1～S26）各0.1 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版）進(jìn)行分析，得HPLC指紋圖譜，詳見(jiàn)圖2、圖3。

2.4.2 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版），以樣品的HPLC對(duì)照指紋圖譜為對(duì)照，進(jìn)行整體相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果，26批不同產(chǎn)地白芍飲片（編號(hào)：S1～S26）的相似度為0.887～0.998，提示不同產(chǎn)地白芍存在微小的質(zhì)量差異，詳見(jiàn)表3。

2.4.3 共有峰的指認(rèn)及相關(guān)分析 26批不同產(chǎn)地白芍飲片（編號(hào)：S1～S26）共有9個(gè)共有峰，通過(guò)與對(duì)照品圖譜比對(duì)，共指認(rèn)了6個(gè)色譜峰，分別為沒(méi)食子酸（峰2）、兒茶素（峰3）、芍藥內(nèi)酯苷（峰4）、芍藥苷（峰5）、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖（峰7）、苯甲酰芍藥苷（峰9）。因芍藥苷的峰面積較大、分離度較好，故以其為參照峰，計(jì)算其他成分的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，詳見(jiàn)表4、表5。

2.4.4 不同產(chǎn)地白芍飲片鏡像對(duì)比 隨機(jī)選取3批不同產(chǎn)地白芍飲片（編號(hào)：S9、S16、S22）的圖譜進(jìn)行鏡像對(duì)比，詳見(jiàn)圖4。由圖4可知，在同一檢測(cè)條件下，亳白芍（S9）檢測(cè)出1個(gè)色譜峰，經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)判定為丹皮酚新苷，而杭白芍（S22）、川白芍（S16）未檢測(cè)出該成分。

2.4.5 聚類(lèi)分析 以各共有峰的峰面積除以稱(chēng)樣量的數(shù)值作為原始數(shù)據(jù)，采用SPSS 20.0 軟件，以組間連接法結(jié)合余弦距離對(duì)26批不同產(chǎn)地白芍飲片（編號(hào)：S1～S26）進(jìn)行聚類(lèi)分析，詳見(jiàn)圖5。由圖5可知，當(dāng)余弦距離為15時(shí)，樣品可聚為2類(lèi)，S1～S21聚為一類(lèi)，S22～S26聚為一類(lèi);當(dāng)余弦距離小于5時(shí)，樣品可聚為5類(lèi)，S1～S15聚為一類(lèi)，S16～S21聚為一類(lèi)，S22、S23聚為一類(lèi)，S24、S26聚為一類(lèi)，S25聚為一類(lèi)。

2.4.6 主成分分析 對(duì)26批不同產(chǎn)地白芍飲片的9個(gè)共有峰的絕對(duì)峰面積進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行主成分分析。結(jié)果顯示，共得到2個(gè)主成分因子，特征值分別為6.002、1.299，方差貢獻(xiàn)率分別為66.686%、14.438%，累積方差貢獻(xiàn)率為81.124%，提示主成分因子1、2可作為不同產(chǎn)地白芍飲片的評(píng)價(jià)指標(biāo)。故以主成分因子1、2為指標(biāo)對(duì)26批不同產(chǎn)地白芍飲片（S1～S26）進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，主成分因子1與9個(gè)共有峰相關(guān)性均較強(qiáng)，特別是峰1、峰7和峰8;主成分因子2對(duì)峰5、峰6的影響較大;主成分因子1得分對(duì)S16～S26影響較大，主成分因子2對(duì)S1～S15 影響較大，以峰面積為指標(biāo)進(jìn)行歸一化，結(jié)果顯示亳白芍、川白芍、杭白芍之間存在差異，詳見(jiàn)表6～表8。

2.5 不同炮制方法白芍飲片HPLC指紋圖譜的生成與相似度、共有峰分析

2.5.1 不同炮制方法白芍飲片HPLC指紋圖譜的生成 按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制備白芍（編號(hào)：B1～B10）、炒白芍（編號(hào)：C1～C10）、酒白芍（編號(hào)：J1～J10）供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版）進(jìn)行分析，得到HPLC指紋圖譜，詳見(jiàn)圖6、圖7。

2.5.2 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)系統(tǒng)》（2012版），以樣品的HPLC對(duì)照指紋圖譜為對(duì)照，進(jìn)行整體相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果，30批不同炮制方法白芍飲片與對(duì)照指紋圖譜之間差別不明顯，相似度均大于0.970，表明不同炮制方法白芍飲片間差異不大，詳見(jiàn)表9。

2.5.3 共有峰的指認(rèn)及相關(guān)分析 30批不同炮制方法白芍飲片共有10個(gè)共有峰，通過(guò)與對(duì)照品比對(duì)，共指認(rèn)了7個(gè)色譜峰，分別為沒(méi)食子酸（峰1）、兒茶素（峰2）、丹皮酚新苷（峰3）、芍藥內(nèi)酯苷（峰4）、芍藥苷（峰5）、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖（峰8）、苯甲酰芍藥苷（峰10）。因芍藥苷的峰面穩(wěn)定、分離度良好，故以其為參照峰，計(jì)算其他成分的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，詳見(jiàn)表10、表11。

2.5.4 不同白芍炮制飲片鏡像對(duì)比 取白芍飲片（編號(hào)：B1）、炒白芍飲片（編號(hào)：C1）、酒白芍飲片（編號(hào)：J1）的圖譜進(jìn)行鏡像對(duì)比，詳見(jiàn)圖8。由圖8可知，在同一檢測(cè)條件下，酒白芍檢測(cè)到1個(gè)未知峰，白芍、炒白芍均未檢出該成分。

2.5.5 聚類(lèi)分析 按“2.4.5”項(xiàng)下方法對(duì)30批不同白芍炮制飲片（編號(hào)：B1～B10、C1～C10、J1～J10）進(jìn)行聚類(lèi)分析，詳見(jiàn)圖9。由圖9可知，當(dāng)余弦距離為25時(shí)，樣品可聚為2類(lèi)，B1～B10聚為一類(lèi)，C1～C10、J1～J10聚為一類(lèi);當(dāng)余弦距離為20時(shí)，可聚為4類(lèi)，B1～B10聚為一類(lèi)，C5～C8聚為一類(lèi)，C1～C4、C9、C10聚為一類(lèi)，J1～J10聚為一類(lèi)。

2.5.6 主成分分析 對(duì)30批不同炮制方法白芍飲片的10個(gè)共有峰的絕對(duì)峰面積進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行主成分分析。結(jié)果顯示，共得到4個(gè)主成分因子，特征值分別為3.899、2.105、1.365、1.319，方差貢獻(xiàn)率分別為38.988%、21.052%、13.654%、13.193%，累積方差貢獻(xiàn)率為86.887%，提示主成分因子1、2、3、4可作為不同炮制方法白芍飲片的評(píng)價(jià)指標(biāo)。故以主成分因子1、2、3、4為指標(biāo)對(duì)30批不同炮制方法白芍飲片（B1～B10、C1～C10、J1～J10）進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，主成分因子1對(duì)峰1和峰10影響較大，主成分因子2對(duì)峰6影響較大，主成分因子3對(duì)峰5影響較大，主成分因子4對(duì)峰4和峰9影響較大;主成分因子1和主成分因子4得分在樣品J1～J10中較高，表明其對(duì)酒白芍影響較顯著;主成分因子2得分對(duì)樣品C1～C10影響較大，表明其對(duì)炒白芍影響較明顯;主成分因子3得分對(duì)樣品B1～B10影響較大，表明其對(duì)白芍飲片影響突出。以10個(gè)共有峰的峰面積進(jìn)行歸一化，結(jié)果顯示不同炮制方法白芍飲片存在質(zhì)量差異，詳見(jiàn)表12～表14。

3 討論

本研究前期對(duì)液相條件進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)以乙腈-0.05%磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，各成分的分離效果較好，保留時(shí)間適當(dāng)，峰形良好。同時(shí)，采用二極管陣列檢測(cè)器在190～400 nm波長(zhǎng)內(nèi)進(jìn)行掃描，得三維光譜圖。結(jié)果顯示，檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm時(shí)，1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖、沒(méi)食子酸峰有最大吸收，但峰形較差，基線波動(dòng)較大，對(duì)樣品峰面積的積分影響大;當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm時(shí)，芍藥苷峰有最大吸收，且色譜峰形較好，出峰數(shù)目較多，各色譜峰之間分離度較好，基線平穩(wěn)，故選擇230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

26批不同產(chǎn)地白芍飲片的整體相似度較高，共有化學(xué)成分沒(méi)食子酸、芍藥苷、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷等較穩(wěn)定，提示不同產(chǎn)地間白芍飲片的化學(xué)成分接近;但亳白芍比杭白芍、川白芍多了1個(gè)丹皮酚新苷峰，后續(xù)將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。26批不同產(chǎn)地白芍飲片共有9個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0～0.97%，相對(duì)峰面積的RSD為0～74.45%，表明不同產(chǎn)地白芍飲片中雖然化學(xué)成分相似，但含量存在差異。聚類(lèi)分析和主成分分析結(jié)果顯示，當(dāng)余弦距離為15時(shí)，26批不同產(chǎn)地白芍飲片可聚為2類(lèi)，S1～S21聚為一類(lèi)，S22～226聚為一類(lèi)，提示不同產(chǎn)地白芍飲片的成分含量存在差異，可能與生長(zhǎng)環(huán)境不同有關(guān)[16]。

30批不同炮制方法白芍飲片的整體相似度較高，但酒白芍檢測(cè)出1個(gè)未知峰，炒白芍和白芍飲片未檢出。30批不同炮制方法白芍飲片共有10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0～0.59%，相對(duì)峰面積的RSD為0～92.89%，表明白芍經(jīng)不同方法炮制后，其化學(xué)成分含量變化較大[17-18]。聚類(lèi)分析和主成分分析結(jié)果顯示，當(dāng)余弦距離為25時(shí)，30批不同炮制方法白芍飲片可聚為2類(lèi)，B1～B10聚為一類(lèi)，C1～C10、J1～J10聚為一類(lèi)，提示白芍炮制飲片具有明顯的分類(lèi)趨勢(shì)，間接證明其經(jīng)炮制后內(nèi)部化學(xué)成分可能發(fā)生變化，體現(xiàn)出不同炮制飲片的差異性[17]。

綜上所述，本研究建立的HPLC指紋圖譜及聚類(lèi)分析和主成分分析結(jié)果可為不同白芍飲片的質(zhì)量控制提供參考。

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（收稿日期：2019-06-22 修回日期：2019-10-29）

（編輯：陳 宏）