胡孔泉，鄭琳日，陳國華

(中國藥科大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京 210000)

Selonsertib(1)，化學(xué)名為5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-N-(6-(4-異丙基-4H-1，2，4-三氮唑-3-基)吡啶-2-基)-4-甲基苯甲酰胺，是由吉利德制藥公司研發(fā)的一種細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1(ASK1)抑制劑，用于非酒精性脂肪肝(NAFLD)的治療[1]。臨床研究表明，selonsertib是一種高選擇性，有效的ASK1抑制劑，具有潛在的抗腫瘤、抗炎、抗纖維化活性，單用或聯(lián)合用藥均表現(xiàn)出很好的療效[2-3]。

通過查閱文獻，(1)的合成方法主要有兩條：首先都是將(1)拆分成5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(8)和6-(4-異丙基-4H-1，2，4-三氮唑-3-基)吡啶-2-胺(12)兩個中間體對其分別合成，最后再將兩者縮合得到終產(chǎn)物(1)；其中，(12)的合成路線主要是以6-氨基吡啶甲酸甲酯(9)，經(jīng)水合肼氨解得6-氨基吡啶-2-酰肼(10)，(10)與DMF-DMA縮合得(E)-N'-(6-(2-((E)- (二甲氨基)亞甲基)酰肼-1羰基)吡啶-2-基)-N，N-二甲基甲酰胺(11)，(11)再與異丙胺反應(yīng)得到(12).而(8)的合成路線有兩條：①以環(huán)丙基甲基酮(2)為起始原料與Koser試劑反應(yīng)得到2-環(huán)丙基-2-氧乙基-4-甲基苯磺酸鹽(17)，以甲苯為溶劑，與3-氟-4-溴-6-氨基甲苯(18)縮合得到2-((5-溴-4-氟-2-甲基苯基)氨基)-1-環(huán)丙基乙基-1-酮(4)，經(jīng)甲酸，醋酐反應(yīng)得到N-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-N-(2-環(huán)丙基-2-乙酰氧基)甲酰胺(5)，與乙酸銨，乙酸反應(yīng)環(huán)化得到1-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-4-環(huán)丙基-1-H-咪唑(6)，與異丙基氯化鎂反應(yīng)后，通入二氧化碳反應(yīng)得到5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(7)，在甲醇條件下與濃鹽酸反應(yīng)得到5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(8)[4-5]。該法(4)的合成反應(yīng)時間偏長，且后處理收率低；制備(7)時，所使用的親和試劑異丙基氯化鎂在工業(yè)生產(chǎn)中會產(chǎn)生低沸點、易燃燒的丙烷，存在安全隱患。

圖1 路線 ①

Fig.1 Route ①

②3-氟-4-溴-6-氨基甲苯(18)與氰化亞銅反應(yīng)得到5-氨基-2-氟-4-甲基苯甲腈(13)，經(jīng)溴代環(huán)丙基甲基酮(3)反應(yīng)得到5-(2-環(huán)丙基-2-氧代乙基氨基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(14)，與硫氰化鉀反應(yīng)得到5-(4-環(huán)丙基-2-巰基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(15)，在氮氣保護下，與過氧化氫反應(yīng)得到5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-2-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(16)，再與濃鹽酸成鹽得到5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(8)[6-7]。該法(13)的制備中，溫度偏高，副產(chǎn)物生成多；制備(16)時，用到了易制爆試劑過氧化氫，且該步操作較復(fù)雜，操作要求較高。

圖2 路線②

Fig.2 Route ②

本研究通過參考上述工藝思路，選擇路線①作為化合物(8)的主體合成路線，并做了以下改進：制備(4)時，文獻用甲苯做溶劑，且在90～100℃反應(yīng)接近10 h，生成副產(chǎn)物多且耗費時間，收率46.6%。本研究以(3)代替(17)，以價廉易得的DMF作溶劑，在氮氣保護下，逐滴加入DIPEA，于100℃反應(yīng)2 h即可；后處理采用乙酸乙酯萃取，正庚烷中重結(jié)晶，收率55.4%，節(jié)約了成本，提高了收率。制備(7)時，將親和試劑異丙基氯化鎂替換成環(huán)己基氯化鎂，同時后處理采用異丙醚重結(jié)晶，在保持收率相當?shù)那闆r下，排除了安全隱患，也使析晶更易進行。

圖3 1的合成路線

Fig.3 Synthetic Route of 1

1 實驗部分

1.1 6-氨基吡啶甲酰肼 (10)

將6-氨基吡啶甲酸甲酯(9)(上海拓萊化學(xué)科技有限公司，5.02，33 mmol)加至60 mL甲醇中，再加入水合肼(南京化學(xué)試劑股份有限公司，16.5 g，)，反應(yīng)于80℃下加熱回流3 h，TLC[展開劑：甲醇∶二氯甲烷(1∶10)]顯示反應(yīng)結(jié)束。將反應(yīng)冷卻到室溫逐漸有固體析出，過濾，并用乙酸乙酯(20 mL*2)洗滌后于40℃烘箱中干燥，得黃色泡沫狀固體(3.81 g，收率76.1%)。

mp 195～198℃。

ESI-MS：152.9[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：9.13(s，1H)，7.53-7.48(t，J=7.92Hz，1H)，7.12～7.10(d，J=7.17Hz，1H)，6.62～6.59(d，J=8.41Hz，1H)，6.05(s，2H)，4.47(s，2H)。

1.2 (E)-N'-(6-(2-((E)- (二甲氨基)亞甲基)酰肼-1羰基)吡啶-2-基)-N，N-二甲基甲酰胺(11)

將化合物(10)(5.01 g，32 mmol)加入DMF-DMA(薩恩化學(xué)技術(shù)(上海)有限公司，30 mL)中，并將反應(yīng)于110℃條件下加熱回流16 h。TLC[展開劑：甲醇∶二氯甲烷(1∶8)]顯示反應(yīng)結(jié)束。冷卻到室溫，減壓除去溶劑，于殘渣中加入乙酸乙酯(20 mL)，50℃反應(yīng)半小時；冷卻到室溫，有固體析出，過濾，于40℃烘箱中干燥得黃色固體(7.07g，85.2%)。

mp 108～112℃。

ESI-MS：263.1[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：10.66(s，1H)，8.84(s，1H)，8.05(s，1H)，7.70～7.65(t，J=7.68Hz，1H)，7.50～7.47(d，J=7.34，1H)，6.92～6.89(d，J=7.82Hz，1H)，3.12(s，3H)，2.99(s，3H)，2.84(s，6H)。

1.3 6-(4-異丙基-4H-1，2，4-三氮唑-3-基)吡啶-2-胺(12)

將化合物(11)(4.00 g，15 mmol)加入至乙腈-乙酸(20 mL，4∶1)中，再加入異丙胺(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，4.84 g，82 mmol)，于95℃加熱回流反應(yīng)18 h，TLC[展開劑：甲醇∶二氯甲烷(1∶10)]顯示反應(yīng)已結(jié)束，冷卻至室溫，減壓除去溶劑，向殘渣中加入水(15 mL)，并用10%NaOH調(diào)節(jié)pH值至8，可觀察到有固體析出；轉(zhuǎn)移至0℃老化，過濾，異丙醇洗滌，于40℃烘箱中干燥得淡黃色固體(2.16 g，54.1%)。

mp 185～188℃。

ESI-MS：204.0 [M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：8.74(s，1H)，7.53-7.48(t，J=7.84Hz，1H)，7.18～7.15(d，J=7.40Hz，1H)，6.54～6.51(d，J=8.3Hz，1H)，6.12(s，2H)，5.56～5.47(m，J=6.88Hz，1H)，1.43～1.41(d，J=6.66Hz，6H)。

1.4 溴甲基環(huán)丙基酮(3)

將環(huán)丙基甲基酮(南京協(xié)尊醫(yī)藥科技有限公司10.01 g，119 mmol)、甲醇(80 mL)加至反應(yīng)瓶中，并將反應(yīng)至于0℃的冷阱中，同時逐滴加入溴(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，19.26 g，120 mmol)，反應(yīng)1.5 h，隨后轉(zhuǎn)至室溫再反應(yīng)半小時。加入150 mL水淬滅反應(yīng)，二氯甲烷(80 mL*3)萃取，合并有機層；分別用NaHCO3水溶液(10 mL)、水(10 mL)、氯化鈉溶液(10 mL)洗滌有機層，加入無水硫酸鈉干燥。過濾，減壓蒸除溶劑得淺棕色液體，于100℃下減壓蒸餾，收集64℃～68℃的餾分得無色透明狀液體(10.53g，54.3%)[8]。

ESI-MS：162.4 &164.5 [M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：4.37(s，2H)，2.25～2.18(m，1H)，1.01～0.82(m，4H)。

1.5 2-((5-溴-4-氟-2-甲基苯基)氨基)-1-環(huán)丙基乙基-1-酮(4)

將3-氟-4-溴-6-氨基甲苯(18)(上海畢得醫(yī)藥科技有限公司，5.01 g，24 mmol)、二異丙基乙胺(DIPEA，6.50 g，50.4 mmol)加入DMF(70 mL)中，升溫至95℃，并在氮氣氛圍下逐滴加入(3)(4.30 g，26.40 mmol)，反應(yīng)2 h，TLC[展開劑：乙酸乙酯∶石油醚(1∶6)]顯示反應(yīng)完全。冷卻至室溫，加入水(50 mL)，二氯甲烷(40 mL*3)萃取，合并有機層，依次用NH4Cl水溶液(40 mL)、NaHCO3水溶液(40 mL)、氯化鈉溶液(40 mL)洗滌有機層，加入無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除大部分溶劑，殘留物在正庚烷中重結(jié)晶，過濾，烘干得類白色固體(4.85 g，55.4%)。

mp 84～87℃。

ESI-MS：285.9 &287.9 [M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ： 7.04～7.01(d，J=9.3Hz，1H)，6.51～6.49(d，J=6.10Hz，1H)，5.26～5.22(t，J=5.6Hz，1H)，4.16～4.14(d，J=5.33Hz，2H)2.21～2.12(m，1H)，2.08(s，3H)，0.96～0.85(m，4H)。

1.6 N-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-N-(2-環(huán)丙基-2-乙酰氧基)甲酰胺(5)

于0℃的冷阱中，將乙酸酐(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，4.27 g，41.96 mmol)加入到甲酸溶液(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，20 mL)中，再將溶解在二氯甲烷中的(4)(3 g，10.49 mmol)加入其中，反應(yīng)兩小時。TLC[展開劑：乙酸乙酯∶石油醚(1∶1.8)]顯示反應(yīng)完全。加入水(20 mL)淬滅反應(yīng)，并用40%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至9，分離有機層，二氯甲烷(20 mL*2)萃取，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，過濾，柱層析分離得無色透明粘稠狀液體(2.97 g，90.3%)。

ESI-MS：313.6&315.6[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：8.16～8.14(d，J=8.6Hz，1H)，7.64～7.62(d，J=5.8Hz，1H)，7.42～7.39(d，J=6.8Hz，1H)，4.7～4.67(d，2H)，2.50(s，3H)，2.14～1.99(m，1H)，0.95～0.86(m，4H)。

1.7 1-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-4-環(huán)丙基-1-H-咪唑(6)

向化合物(5)(3 g，9.00 mmol)中加入冰醋酸(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，20 mL)溶解，再加入乙酸銨(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，2.70 g，35.10 mmol)，115℃下反應(yīng)過夜。冷卻到室溫，減壓除去溶劑，加入水(20 mL)，并用40%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至9，乙酸乙酯(25 mL*3)萃取，合并有機層并用無水硫酸鈉干燥，過濾，在50℃～60℃活性炭脫色半小時，濃縮，于殘渣中加入3 mL N，N-二甲基乙酰胺(DMAC)，再加入10 mL水可得漿液形式的化合物；過濾，依次用水，正己烷洗滌，烘干，得白色固體(1.33 g，50.3%)。

mp 62～64℃。

ESI-MS：294.7&296.6[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：7.72～7.70(d，J=6.56Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.51～7.49(d，J=9.55Hz，1H)，7.15(s，1H)，2.15(s，3H)，1.88～1.83(m，1H)，0.84～0.79(m，2H)，0.73～0.70(m，2H)。

1.8 5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(7)

于50 mL三口瓶中，加入化合物(6)(2 g，6.78 mmol)、THF(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，30 mL)，置于0℃的冷阱中，并緩慢滴加環(huán)己基氯化鎂(1.45 g，10.17 mmol)，反應(yīng)1 h，向體系中緩緩?fù)ㄈ隒O2，反應(yīng)兩小時；加入水(20 mL)淬滅反應(yīng)，用6 mol/L HCl的水溶液調(diào)節(jié)pH值到4.8，乙酸乙酯(20 mL*3)萃取，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘留物在異丙醚中重結(jié)晶，過濾，烘干得白色固體(0.71 g，40.5%)。

mp 235～239℃。

ESI-MS：260.7[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：7.72～7.70(d，J=6.64Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.51～7.49(d，J=9.44Hz，1H)，7.15(s，1H)，2.15(s，3H)，1.88～1.83(m，1H)，0.84～0.80(m，2H)，0.73～0.70(m，2H)。

1.9 5-(4-環(huán)丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸鹽酸鹽(8)

于50 mL單口瓶中，加入化合物(7)(0.5 g，1.92 mmol)、二氯甲烷(15 mL)，攪拌均勻，逐滴加入12 mol/L HCl至固體全部溶解后，停止滴加，室溫繼續(xù)反應(yīng)1 h。減壓除去溶劑，40℃烘干得白色固體(0.55，97.0%)。

mp 248～252℃。

ESI-MS：261.0[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：9.21(s，1H)，8.02～8.01(d，J=6.71Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.57～7.55(d，J=11.16Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.07～2.01(m，1H)，1.08～1.04(m，2H)，0.89～0.86(m，2H)。

1.10 Selonsertib(1)

將化合物(8)(0.3 g，1.01 mmol)加入二氯甲烷(20 mL)中，攪拌均勻，氮氣氛圍下，緩慢滴入草酰氯(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，0.115 mL，1.318 mmol)，然后加入N，N-二甲基甲酰胺(0.01 mL，0.145 mmol)。室溫反應(yīng)2 h，減壓除去溶劑，并將溶劑替換成二氯甲烷，在氮氣環(huán)境下快速加入化合物12(0.23 g，1.11 mmol)和4-二甲氨基吡啶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，0.124 g，1.01 mmol)，于室溫反應(yīng)2 h。加入飽和NaHCO3水溶液(10ml)繼續(xù)攪拌15 min。分離有機層，并用二氯甲烷(20 mL*1)洗滌水層，合并有機層；無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮于硅膠板分離得白色固體(0.15 g，34.3%)。

mp 195～199℃。

ESI-MS(m/z)：446.0[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：10.94(s，1H)，8.88(s，1H)，8.22～8.20(d，J=8.17Hz，1H)，8.07～8.04(t，J=8.15Hz，1H)，7.92～7.91(d，J=7.73Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.68～7.67(d，J=6.46Hz，1H)，7.51～7.49(d，J=10.67Hz，1H)，7.20(s，1H)，5.70～5.65(m，J=6.7Hz，1H)，2.27(s，3H)，1.90～1.85(m，1H)，1.50～1.45(d，J=6.7Hz，6H)，0.84-0.81(m，2H)，0.74～0.71(m，2H)。