俞幸嘉， 陳 婧

(東莞市人民醫(yī)院， 廣東 東莞 523059)

平衡鹽沖洗液為手術(shù)用沖洗液，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有收載雜質(zhì)的檢查項(xiàng)目，也未見(jiàn)有相關(guān)的報(bào)道，但該產(chǎn)品為手術(shù)使用，會(huì)直接接觸創(chuàng)口，對(duì)雜質(zhì)也是有控制的必要。葡萄糖二酸鈉雜質(zhì)為本品原料葡萄糖酸鈉生產(chǎn)過(guò)程中由葡萄糖過(guò)氧化產(chǎn)生，筆者采用陽(yáng)離子色譜法對(duì)該產(chǎn)品的葡萄糖二酸鈉雜質(zhì)檢查進(jìn)行了研究并建立了檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

Waters2695高效液相色譜儀(2487紫外檢測(cè)器)；Waters2695高效液相色譜儀(2996 DAD檢測(cè)器)；BT125D 電子天平(十萬(wàn)分之一)賽多利斯公司；色譜柱：Agilent TC-C18色譜柱(250×4.6 mm，5μm)；色譜甲醇(天地公司)；硫酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、純化水；葡萄糖二酸鉀對(duì)照品(SIGMA，以葡萄糖二酸根折算葡萄糖二酸鈉的含量)；研究用樣品(平衡鹽沖洗液，河北天成藥業(yè)生產(chǎn))。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用氫型陽(yáng)離子交換色譜柱；以0.025 mol/L的硫酸溶液為流動(dòng)相；用水為稀釋溶劑；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm[1]；柱溫30℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。

2.2 供試品溶液與對(duì)照溶液的配制

供試品溶液：取本品作為供試品溶液。對(duì)照溶液：精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加稀水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

2.3 葡萄糖二酸鈉的定位

分別取質(zhì)量研究用樣品制成有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的供試品溶液和25.0 μg/mL的葡萄糖二酸鈉(以葡萄糖二酸根計(jì)為22.5 μg/mL)對(duì)照品溶液，按上述確定的色譜條件，進(jìn)樣20 μL并定位，結(jié)果葡萄糖二酸鈉于4.996 min出峰；供試品溶液中葡萄糖酸鈉于保留時(shí)間5.358 min出峰，并分離出保留時(shí)間與葡萄糖二酸鈉接近的4.969 min的雜質(zhì)。見(jiàn)圖1。

1為雜質(zhì)葡萄糖二酸鈉；2為主成分葡萄糖酸鈉圖1 紫外檢測(cè)器

為進(jìn)一步確認(rèn)本品有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下供試品溶液保留時(shí)間4.969 min雜質(zhì)即為葡萄糖二酸鈉，另取上述葡萄糖二酸鈉對(duì)照品溶液與上述有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下供試品溶液按1∶1混勻后進(jìn)樣40 μL，結(jié)果葡萄糖二酸鈉保留時(shí)間為4.920 min，葡萄糖酸鈉保留時(shí)間為5.358 min；葡萄糖二酸鈉與原供試品溶液中保留時(shí)間為4.969 min的雜質(zhì)峰重疊。我們通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器，對(duì)混合溶液中的雜質(zhì)進(jìn)行峰純度檢查，結(jié)果葡萄糖二酸鈉的純度角為7.986，小于要求的閾值8.621，表明混合溶液中葡萄糖二酸鈉為純峰，原供試品溶液中保留時(shí)間為4.969 min的雜質(zhì)為葡萄糖二酸鈉，葡萄糖二酸鈉為已知結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)，確定采用外標(biāo)法對(duì)葡萄糖二酸鈉進(jìn)行檢查。見(jiàn)圖2。

1為雜質(zhì)葡萄糖二酸鈉；2為主成分葡萄糖酸鈉圖2 DAD檢測(cè)器

2.4 葡萄糖二酸鈉的定量限與檢測(cè)限

取25 μg /mL的葡萄糖二酸鈉對(duì)照品溶液用水逐級(jí)稀釋，使其峰高為基線噪音10倍，此時(shí)的進(jìn)樣濃度約為1.96 μg/mL，進(jìn)樣體積為20 μL，故定量限為39.2 ng，同時(shí)，將定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。將定量限溶液進(jìn)一步稀釋，使其峰高為基線噪音的3倍，此時(shí)的進(jìn)樣濃度為0.59 μg/mL，進(jìn)樣體積為20 μL，故檢測(cè)限為11.8 ng。

2.5 葡萄糖二酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取葡萄糖二酸鈉約10 mg(葡萄糖二酸單鉀鹽實(shí)稱11.01 mg，折算成葡萄糖酸鈉為10.30 mg，含量98.0%)，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取該溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5 mL至10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。結(jié)果表明：葡萄糖二酸鈉在1.96～50.45 μg/mL范圍內(nèi)濃度與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性方程為：y=932.56 x -1354.8，R2=0.9998。

2.6 葡萄糖二酸鈉加樣回收率

取本品有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下供試品溶液，測(cè)定葡萄糖二酸鈉含量，由于葡萄糖二酸鈉含量極低，按對(duì)照品濃度的80%、100%和120%精密加入葡萄糖二酸鈉對(duì)照品(因稱取量太低，通過(guò)稱量后配成溶液加入)，照有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下供試品溶液制備方法，平行制備高、中、低濃度9份。按外標(biāo)法測(cè)定葡萄糖二酸鈉的含量，并計(jì)算葡萄糖二酸鈉的加樣回收率，測(cè)得平均回收率97.08%，RSD0.74%。結(jié)果表明， 葡萄糖二酸鈉加樣回收率較好，本測(cè)定方法準(zhǔn)確度較高。

2.7 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取濃度約為25 μg/mL葡萄糖酸鈉對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣20 μL 6次，記錄色譜圖，考察其進(jìn)樣精密度試驗(yàn)，測(cè)得RSD0.92%。結(jié)果表明：本品雜質(zhì)葡萄糖二酸鈉對(duì)照品溶液定量測(cè)定法進(jìn)樣精密度較好。

2.8 葡萄糖二酸鈉對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

取濃度約為25 μg/mL葡萄糖二酸鈉對(duì)照品溶液，與室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、12、18、24 h依法進(jìn)樣20 μL，考察葡萄糖二酸鈉的穩(wěn)定性，測(cè)得RSD0.89%。結(jié)果顯示：葡萄糖二酸鈉對(duì)照品溶液室溫24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品的葡萄糖二酸鈉雜質(zhì)檢查

經(jīng)對(duì)樣品按上述方法進(jìn)行檢查，樣品的葡萄糖二酸鈉雜質(zhì)為0.01%。

3 結(jié)論

平衡鹽沖洗液國(guó)內(nèi)引進(jìn)的時(shí)間約為2013年，當(dāng)時(shí)并未對(duì)該產(chǎn)品的雜質(zhì)提出要求，筆者此次用氫型陽(yáng)離子交換色譜柱能對(duì)該雜質(zhì)進(jìn)行良好的分離測(cè)定，建立了葡萄糖二酸鈉雜質(zhì)的檢測(cè)方法。筆者也對(duì)上述檢測(cè)條件進(jìn)行了耐用性試驗(yàn)，調(diào)整了柱溫為28℃及32℃，對(duì)檢查結(jié)果無(wú)影響；調(diào)整流動(dòng)相硫酸濃度為0.024及0.026 mol/L，對(duì)對(duì)檢查結(jié)果無(wú)影響。該方法可靠、靈敏度高、重現(xiàn)性好，是一種實(shí)用的檢測(cè)方法。