劉娟 陳燦明 徐楊

[摘要]目的 探討GSTP1基因rs1695位點(diǎn)多態(tài)性與暴露二 英危險(xiǎn)因素間的交互作用在子宮內(nèi)膜異位癥（EMT）發(fā)病中的作用。方法 選擇2016年12月～2019年1月因盆腔包塊來揚(yáng)州市婦幼保健院住院手術(shù)治療的患者，將手術(shù)病理確診為EMT的25例患者作為病例組，將25例非EMT患者作為對照組。采用自制問卷進(jìn)行環(huán)境流行病學(xué)調(diào)查，分析二 英暴露與EMT的相關(guān)性。采用定量PCR為基礎(chǔ)的高分辨率熔解曲線（HRM）法檢測基因多態(tài)性，采用單純病例研究方法將基因多態(tài)性與暴露二 英的危險(xiǎn)因素進(jìn)行基因-環(huán)境交互作用分析。結(jié)果 病例組中經(jīng)常燒飯燒菜人數(shù)所占比例高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但病例組中食用鴨蛋和鵪鶉蛋人數(shù)所占比例低于對照組（P<0.05）。經(jīng)常燒飯燒菜與GSTP1 313 A/G基因突變型兩者間具有協(xié)同交互作用（OR=3.44，95%CI=1.14～52.54），與其他基因多態(tài)性間無交互作用。經(jīng)常食用鴨蛋和鵪鶉蛋與各基因多態(tài)性均無交互作用。結(jié)論 經(jīng)常燒飯燒菜與GSTP1 313 A/G基因突變型對EMT發(fā)生存在正向交互作用。

[關(guān)鍵詞]子宮內(nèi)膜異位癥;危險(xiǎn)因素;GSTP1基因多態(tài)性;基因環(huán)境交互作用

[中圖分類號(hào)] R711.71? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）7（c）-0004-05

[Abstract] Objective To explore the effect of interaction between GSTP1 gene polymorphism and risk factors exposed dioxin in endometriosis pathogenesis. Methods From December 2016 to January 2019， patients hospitalized for pelvic mass in Maternal and Child Health Hospital of Yangzhou City were selected， 25 patients diagnosed as EMT by operation and pathology were selected as the case group， and 25 non-EMT patients were selected as the control group. The correlation between dioxin exposure and EMT was analyzed by self-designed environmental epidemiological investigation questionnaire. High resolution melting （HRM） curve based on quantitative PCR was used to detect gene polymorphism. The interactions between gene polymorphism and risk factors were analyzed based on the simple-case-study method. Results The number of people who cook regularly in the case group were significantly higher than that in the control group， with significant difference （P<0.05）. However， the proportion of duck eggs and quail eggs eaten in the case group was lower than that in the control group （P<0.05）. A synergistic interaction was detected between mutated GSTP1 313 A/G gene and cook regularly （OR=3.44， 95%CI：1.14-52.54）， while no interaction was found between cooking regularly and other gene polymorphisms. There were no interaction between eating duck and quail eggs regularly and gene polymorphisms. Conclusion The positive interaction between mutated GSTP1 313 A/G gene and cooking regularly may play a critic role in the pathogenesis of endometriosis.

[Key words] Endometriosis; Risk factors; GSTP1 gene polymorphism; Gene-environment interaction

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMT）簡稱內(nèi)異癥，是育齡女性的常見病和多發(fā)病，嚴(yán)重干擾女性的生活和健康[1]。研究顯示，EMT可能和二 英暴露有關(guān)[2-10]，但其具體機(jī)制不明，有學(xué)者報(bào)道二 英可能通過改變解毒代謝酶的表達(dá)參與EMT的發(fā)病[11]。二 英的解毒代謝酶主要包括細(xì)胞色素P450酶系和谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶系（GST），其基因多態(tài)性改變可能會(huì)增加機(jī)體對環(huán)境致病因素的敏感性，引發(fā)疾病[12-13]。GST中研究較多的是GSTM1、GSTT1和GSTP1，目前，GST基因多態(tài)性與EMT的關(guān)系仍存在爭議[14]。此外，EMT病情復(fù)雜，單獨(dú)環(huán)境暴露或遺傳易感性均不能全面解釋疾病的發(fā)生，現(xiàn)有研究多側(cè)重于從遺傳易感性角度入手[15]，忽略了疾病致病中基因-環(huán)境交互作用的復(fù)雜性。因此，本研究將探討GSTP1基因rs1695位點(diǎn)多態(tài)性與暴露二 英的環(huán)境危險(xiǎn)因素在EMT致病中的交互作用，旨在為EMT的預(yù)防和個(gè)體化治療提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

采用病例-對照研究，選取2016年12月～2019年1月在揚(yáng)州市婦幼保健院經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的25例卵巢EMT患者作為病例組，年齡23～53歲，平均（38.46±8.74）歲。選取同期因盆腔包塊在揚(yáng)州市婦幼保健院經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為非EMT的25例患者作為對照組，年齡16～74歲，平均（39.96±18.68）歲。兩組入組對象必須符合一般情況的均衡性，按1∶1比例配對。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)病理確診為EMT;②臨床病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在交流溝通障礙或精神疾病患者;②哺乳期;③拒絕參加臨床調(diào)查者;④存在血緣或親屬關(guān)系。根據(jù)1997年美國生育學(xué)會(huì)（AFS）提出的“修正子宮內(nèi)異位癥分期法”對EMT進(jìn)行分期[16]。兩組的年齡、職業(yè)、生育史等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有參與研究的對象被告知研究目的并簽署知情同意書。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查并通過。

1.2研究方法

1.2.1問卷調(diào)查? 根據(jù)二 英暴露途徑（呼吸暴露和食物暴露）制訂結(jié)構(gòu)式調(diào)查表，對病例組和對照組進(jìn)行問卷調(diào)查。調(diào)查內(nèi)容包括臨床資料（如姓名、年齡、月經(jīng)史、有無痛經(jīng)、孕產(chǎn)史、手術(shù)診斷、病理結(jié)果等）、吸煙飲酒、飲水飲食、居住環(huán)境（如居住所得附近有無廢物處理中心，有無焚燒工廠發(fā)電廠等）、X線接觸史、染發(fā)史、職業(yè)史、居室裝潢史、家中是否經(jīng)常使用的排油煙設(shè)備以及魚、蝦、乳制品攝入頻次等。問卷中膳食攝入頻率分為“經(jīng)常吃”“偶爾吃”“從不吃”。至少1次/周為“經(jīng)常吃”，1次/月歸為“偶爾吃”，從來不吃定義為“從不吃”。

1.2.2 GSTP1基因多態(tài)性檢測? 抽取兩組靜脈血2 ml，置于有乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）抗凝的5 ml試管，用鹽析法提取DNA，采用定量PCR為基礎(chǔ)的高分辨率熔解曲線（high resolution melt，HRM）法檢測GSTP1基因單核苷酸位點(diǎn)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。病例組和對照組基因多態(tài)位點(diǎn)基因型頻率分別行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，P>0.05表示所選樣本已達(dá)遺傳平衡。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法分析組間各基因型頻率分布的差異，計(jì)算優(yōu)勢比（odds ratio，OR）及95%置信區(qū)間（95%confidence interval，95%CI）。用單純病例研究方法，采用非條件Logistic多元回歸模型中交互作用的相乘模型分析基因-環(huán)境之間的交互作用，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1暴露二 英的環(huán)境危險(xiǎn)因素在病例組和對照組中的分布

研究對象中近乎一半人數(shù)為職員（48.0%），其他職業(yè)還包括教師、農(nóng)民、服務(wù)人員、醫(yī)護(hù)人員、個(gè)體、學(xué)生、退休和無業(yè)。兩組的年齡、職業(yè)、生育和規(guī)律月經(jīng)方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。病例組中大部分患者為中重型，EMT分期Ⅲ～Ⅳ期為19例，占76.0%。病例組中經(jīng)常燒飯燒菜人數(shù)所占比例高于對照組（72% vs. 40%，P<0.05）。此外，病例組中經(jīng)常食用鴨蛋和鵪鶉蛋人數(shù)所占比例低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;兩組其余指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2兩組GSTP1基因型頻率的比較

GSTP1基因rs1695位點(diǎn)的基因頻率分布在病例組和對照組均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，納入樣本符合人群代表性。病例組和對照組中，GSTP1313A/G以基因型AA最常見，GG最少見，兩組基因型分布的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

2.3二 英暴露的環(huán)境危險(xiǎn)因素和GSTP1基因多態(tài)性在EMT發(fā)病中的交互作用

GSTP1 313 A/G基因突變型與經(jīng)常燒飯燒菜兩者間具有協(xié)同交互作用，與經(jīng)常食用鴨蛋和鵪鶉蛋無交互作用（表3）。

3討論

3.1暴露二 英的環(huán)境危險(xiǎn)因素與EMT

二 英是在廢棄物焚燒、化工生產(chǎn)等過程中隨廢氣和殘?jiān)欧诺奈⒘炕蚝哿坑袡C(jī)污染物，來源廣泛。人體暴露二 英的途徑首先是二 英污染源如汽車尾氣、燃燒廢氣等遍布在空氣、土壤和水中，然后再污染動(dòng)物、食物，這些被污染的動(dòng)物、食物進(jìn)入人體。人群接觸二 英的方式95%是源于污染的膳食通過消化道吸收;其次是通過呼吸道和皮膚接觸。本研究問卷調(diào)查內(nèi)容基于人體暴露二 英的途徑，涵蓋了可能暴露二 英的危險(xiǎn)因素，并比較這些危險(xiǎn)因素在病例組和對照組中分布的差異，結(jié)果顯示，經(jīng)常燒飯燒菜的人數(shù)在EMT病例組中所占比例顯著高于對照組（72% vs. 40%），推測經(jīng)常燒飯燒菜可能是本研究中EMT患者暴露二 英的危險(xiǎn)因素之一，其原因可能是由于燒飯燒菜產(chǎn)生的油煙內(nèi)含二 英類樣化合物有關(guān)，據(jù)報(bào)道焚燒產(chǎn)生的二 英占已知二 英排放量的95%。二 英容易在乳汁、動(dòng)物脂肪、肉類以及海產(chǎn)品魚蝦體內(nèi)蓄積，二 英通過這些食物鏈進(jìn)入體內(nèi)發(fā)揮毒性，產(chǎn)生疾病。本研究對膳食暴露情況進(jìn)行評估，發(fā)現(xiàn)兩組病例在奶制品以及魚蝦肉類等膳食攝入方面均無顯著差異，與Porpora等[17]的報(bào)道一致，分析其原因可能有以下兩點(diǎn)：①研究對象居住地區(qū)環(huán)境污染不嚴(yán)重，膳食未被污染，或其含量可能未超過安全水平，然而目前缺乏對本市環(huán)境二 英污染方面的研究報(bào)道;②樣本量小，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)未發(fā)現(xiàn)顯著差異。此外，本研究意外發(fā)現(xiàn)，和對照組相比，EMT患者食用鴨蛋和鵪鶉蛋的人數(shù)明顯減少，其具體原因不明，這些問題的闡明需要通過增加樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。

3.2 GSTP1基因多態(tài)性與EMT的關(guān)系

GSTP1屬于人類谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶超基因家族（GSTs），和CYP1A1同屬于解毒代謝酶。解毒代謝酶根據(jù)功能分為Ⅰ相代謝酶和Ⅱ相代謝酶。CYP1A1屬于Ⅰ相代謝酶，其主要功能是激活活化環(huán)境毒物并結(jié)合形成親電子中間產(chǎn)物，呈現(xiàn)毒性。GSTP1屬于Ⅱ相代謝酶，其主要功能是將Ⅰ相代謝酶活化的毒物解毒，轉(zhuǎn)化為無毒物質(zhì)排出。正常情況下，外來毒物進(jìn)入體內(nèi)，被人體內(nèi)Ⅱ相代謝酶代謝解毒，降低環(huán)境毒素，但如果代謝酶的某個(gè)基因位點(diǎn)多態(tài)性，可能會(huì)造成酶活性降低或喪失，成為某種環(huán)境毒素誘發(fā)疾病的潛在病因，從而使機(jī)體對疾病的易感性增加。本研究結(jié)果顯示，GSTP1 313 A/G基因多態(tài)性在對照組和病例組分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，與其他學(xué)者報(bào)道一致[11]。

3.3基因環(huán)境交互作用和EMT的關(guān)系

關(guān)于EMT的基因-環(huán)境交互作用國內(nèi)未見報(bào)道。意大利學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)GSTP1基因多態(tài)性本身并不增加EMT疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，但對于血液中含有中高水平多氯聯(lián)苯的人群而言，GSTP1野生型基因（Ile/Ile）會(huì)顯著增強(qiáng)其發(fā)生EMT的風(fēng)險(xiǎn)[18]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)常燒飯燒菜可能是EMT患者暴露二 英的危險(xiǎn)因素之一，將經(jīng)常燒飯燒菜這一環(huán)境危險(xiǎn)因素與GSTP1基因rs1695位點(diǎn)進(jìn)行交互分析，發(fā)現(xiàn)GSTP1 313A/G突變基因型與經(jīng)常燒飯燒菜（OR=3.44，95%CI=1.14～52.54）呈正向交互作用，提示兩者在EMT的發(fā)病中可能起著協(xié)同作用，即如果兩者同時(shí)存在時(shí)，發(fā)生EMT的概率將明顯增加。

EMT疾病復(fù)雜，其發(fā)病受多基因以及環(huán)境因素交互作用影響。本研究樣本量小，所得結(jié)果需要通過擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證，但本研究對二 英致EMT發(fā)病機(jī)制的探索有重要價(jià)值，可以為未來更多研究提供參考。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李雷，冷金花.子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)生活質(zhì)量的研究進(jìn)展[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2017，97（45）：3593-3596.

[2]Smarr MM，Kannan K.Endocrine disrupting chemicals and endometriosis[J].Fertil Steril，2016，106（4）：959-966.

[3]Porpora MG，Ingelido AM，di Domenico A，et al.Increased levels of polychlorobiphenyls in Italian women with endometriosis[J].Chemosphere，2006，63（8）：1361-1367.

[4]De Felip E，Porpora MG，di Domenico A，et al.Dioxin-like compounds and endometriosis：a study on Italian and Belgian women of reproductive age[J].Toxicol Lett，2004，150（2）：203-209.

[5]Caroline S，Hoffman MSPH，Chanley M.Endometriosis among women exposed to polybrominated biphenyls[J].Ann Epidemiol，2007，17（7）：503-510.

[6]Rier SE，Martin DC，Bowman RE，et al.Endometriosis in rhesus monkeys （Macaca mulatta） following chronic exposure to 2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin[J].Fundam Appl Toxicol，1993，21（4）：433-441.

[7]劉娟，任慕蘭.環(huán)境激素二惡英與子宮內(nèi)膜異位癥[J].中國婦幼健康研究，2008，19（5）：484-486.

[8]Wen X，Xiong Y，Qu X，et al.The risk of endometriosis after exposure to endocrine-disrupting chemicals：a meta-analysis of 30 epidemiology studies[J].Gynecol Endocrinol，2019，23：1-6.

[9]陳蘇，周子寒，陽曉敏，等.環(huán)境內(nèi)分泌干擾物暴露與子宮內(nèi)膜異位癥[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2018，45（22）：4058-4061.

[10]Huang Q，Chen Y，Chen Q，et al.Dioxin-like rather than non-dioxin-like PCBs promote the development of endometriosis through stimulation of endocrine-inflammation interactions[J].Arch Toxicol，2017，91（4）：1915-1924.

[11]托婭，楊菁，陳秀娟，等.CYPl9A1、GSTM1、GSTT1和GSTP1基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥患者發(fā)病的相關(guān)研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2019，99（7）：515-519.

[12]Guan L，F(xiàn)an P，Liu X，et al.Association study between GSTT1 and GSTM1 polymorphisms and risk of preeclampsia in Chinese population[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2016，204：31-35.

[13]Barbosa AM，de Souza SR，F(xiàn)rare AB，et al.Association of CYP1A1 （cytochrome P450） MspI polymorphism in women with endometriosis[J].Genet Mol Res，2016，15（3）：102-105

[14]Hassani M，Saliminejad K，Heidarizadeh M，et al.Association study of Glutathione S-Transferase polymorphisms and risk of endometriosis in an Iranian population[J].Int J Reprod Biomed （Yazd），2016，14（4）：241-246.

[15]曹現(xiàn)嶺.子宮內(nèi)膜異位癥的遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志，2019，38（1）：67-70，82.

[16]王媚.ASRM修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法指導(dǎo)子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后應(yīng)用GnRH-a的臨床研究[J].醫(yī)學(xué)信息，2017， 30（16）：50-51.

[17]Porpora MG，Medda E，Abballe A，et al.Endometriosis and organochlorinated environmental pollutants：a case-control study on Italian women of reproductive age[J].Environ Health Perspect，2009，117（7）：1070-1075.

[18]Vichi S，Medda E，Ingelido AM，et al.Glutathione transferase polymorphisms and risk of endometriosis associated with polychlorinated biphenyls exposure in Italian women：a gene-environment interaction[J].Fertil Steril，2012，97（5）：1143-1151，e1-e3.

（收稿日期：2019-06-14? 本文編輯：祁海文）