牛建均　劉春艷　李開(kāi)斌　謝宇　龍立慧　姚元貴　王亮　張麗艷　羅君

【摘要】目的：考查不同產(chǎn)地的太子參、野菊花、三七、茯苓、魚(yú)腥草有機(jī)氯農(nóng)藥殘留情況，了解我國(guó)目前中藥材農(nóng)藥殘留存在的問(wèn)題，為后續(xù)開(kāi)發(fā)利用藥材資源提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)。方法：采用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)（ GC-ECD） Rtx-1701彈性石英毛細(xì)管柱（0.25?mm×30?mm×0.25?μm），樣品經(jīng)丙酮，二氯甲烷與石油醚混合有機(jī)溶劑超聲提取，進(jìn)樣口溫度230?℃，檢測(cè)器溫度300?℃;程序升溫，初始溫度100 ℃，先以10 ℃/min升至220?℃，再以8?℃/min升至250?℃保持10 min，外標(biāo)法計(jì)算含量，應(yīng)用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：9種有機(jī)氯的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.995;最低檢出限為0.00012～0.00057?μg/g;檢測(cè)儀器的精密度良好，RSD均小于5%;檢測(cè)方法重現(xiàn)性好，RSD均小于8%;回收率范圍為94.91～105.09%。5種中藥材中均含有滴滴涕，僅有三七中含有五氯硝基苯;參考2015版《中國(guó)藥典》和《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》（WM-T2-2004）收載的品種項(xiàng)下“農(nóng)藥殘留量”部分檢查限度，50批中藥材檢出含有機(jī)氯農(nóng)藥殘留率占50%，但含量均較低，其中總六六和總滴滴涕超標(biāo)率分別為10%和6%，50批中藥材合格率達(dá)84%，整體符合要求。結(jié)論：氣相色譜檢測(cè)法簡(jiǎn)便快捷、分離效果好，能廣泛用于中藥材有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】中藥;農(nóng)殘;有機(jī)氯;氣相色譜法

【中圖分類號(hào)】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）9-0014-06

Study on Safety Limits of Five Chinese Medicinal Materials from Different

Producing Areas-Analysis of Pesticide Residues

NIU Jianjun1LIU Chunyan1LI Kaibin2XIE Yu3LONG Lihui1YAO Yuangui1WANG Liang1ZHANG Liyan1*LUO Jun4*

1. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China;

2. Anshun Institute for Food and Drug Control， Anshun 561000， China;

3. Guizhou Guangjitang Pharmaceutical Company Limited， Guiyang 550014， China;

4. The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China

Abstract：Objective To investigate the residues of organochlorine pesticides in Radix Pseudostellariae， Wild Ch-rysanthemum， Sanqi， Poria and Houttuynia cordata from different producing areas， to understand the existing pro-blems of pesticide residues in Chinese herbal medicines， and to provide theoretical basis for the subsequent devel-opment and utilization of medicinal materials basis.Methods Gas chromatography-electron capture detection （GC-ECD） Rtx-1701 elastic quartz capillary column （0.25 mm×30 mm×0.25 μm） was used. The sample was ultraso-nically extracted with acetone， dichloromethane and petroleum ether mixed organic solvent to achieve splitless fl-ow. Mode injection， inlet temperature 230 ℃， detector temperature 300 ℃; programmed temperature， initial te-mperature 100 ℃， first 10 ℃/min rose to 220 ℃ then 8 ℃/min rose to 250 ℃ for 10 min， outside the contenttwas calculated by standard method， and the data were statistically analyzed using SPSS 22.0 software.ResultsThe linearrelationship of the nine organochlorines is good， the correlation coefficient is greater than 0.995;the minimum detection limit is 0.00012～0.00057 g/g; the precision of the detection instrument is good，the RSD is less than 5%; the reproducibility of the detection method is good， and the RSD is smallerthan 8%; recovery ranged from 94.91 to 105.09%. Drip sputum is contained in all five kinds of Chi-nese medicinal materials， but only hexachloride benzene is contained in Panaxnotoginseng; it is included in the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia and “Green Standards for Foreign Trade of Medicinal Pla-nts and Preparations”（WM-T2-2004）. According to the partial inspection limit of “Pesticide Residues” un-der the variety， 50 batches of Chinese herbal medicines detected 50% of organochlorine pesticide residu-es， but the content was low， and the total rate of total sixty-six and total DDT was 10% and 6% res-pectively. The qualified rat of 50 batches of Chinese herbal medicines reached 84%， and the overall re-quirements were met. Conclusion Gas chromatography detection method is simple， rapid， and has good separat-ion effect. It can be widely used in the detection of organochlorine pesticide residues in Chinese herbal medicines.

Key：words：Traditional Chinese Medicine; Agricultural Residues; Organochlorine; Gas Chromatography

隨著中藥的國(guó)際化發(fā)展，衡量中藥品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)除了自身有效性，還有安全性。其中影響中藥材品質(zhì)的原因包括缺乏規(guī)范性種植以及農(nóng)藥的濫用造成農(nóng)殘超標(biāo)現(xiàn)象[1-2]。因此改善中藥材的外源性污染是保障中藥安全性，也是中醫(yī)藥國(guó)際化的基本要求[3]。有機(jī)氯類農(nóng)藥其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在常規(guī)條件下具有不易揮發(fā)的特點(diǎn)，只能在環(huán)境中通過(guò)自身緩慢的降解。因此，在禁用10余年后，仍能在土壤和生物體內(nèi)找到殘留[4]。

2015版《中國(guó)藥典》[5]只規(guī)定4種藥材的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留限度，具有農(nóng)殘限度規(guī)定的藥材品種較少，但農(nóng)殘超標(biāo)現(xiàn)象普遍存在，嚴(yán)重影響中藥市場(chǎng)國(guó)際化的發(fā)展。《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》[6]是中華人民共和國(guó)藥用植物及其制劑在對(duì)外經(jīng)濟(jì)貿(mào)易活動(dòng)中重要的外經(jīng)貿(mào)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一，適用于藥用植物原料及制劑的品質(zhì)檢驗(yàn)，其中對(duì)農(nóng)藥殘留限度規(guī)定：六六六（BHC）≤0.1?μg/g;滴滴涕（DDT）≤0.1?μg/g;五氯硝基苯（PCNB）≤0.1?μg/g。氣相色譜法是農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主要方法，該方法樣品前處理技術(shù)簡(jiǎn)便易行，適用于大批量藥材的測(cè)定，方法快速、成本較低，結(jié)果良好，在檢測(cè)有機(jī)氯類農(nóng)藥中占主導(dǎo)地位[7-8]。有學(xué)者采用氣相色譜法對(duì)中藥三七中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行了測(cè)定，其結(jié)果顯示該方法可行[9]。本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)的太子參、魚(yú)腥草、茯苓、野菊花等中藥材來(lái)源于全國(guó)各地，應(yīng)嚴(yán)格控制中藥材安全限量檢查。因此本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用2015版藥典氣相色譜法，同時(shí)選用Rtx-1701彈性石英毛細(xì)管進(jìn)行檢查，結(jié)果顯示此條件下9種農(nóng)藥達(dá)到良好的基線分離。因此對(duì)不同產(chǎn)地5種中藥材總六六六、總滴滴涕和五氯硝基苯9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，提高傳統(tǒng)中藥材的用藥質(zhì)量，為建全和完善中藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢測(cè)方法提供依據(jù)的同時(shí)，推進(jìn)中藥材的規(guī)范化種植，加快中藥的國(guó)際化進(jìn)程。

1儀器與材料

1.1實(shí)驗(yàn)藥材實(shí)驗(yàn)所用三七產(chǎn)于云南、廣西。野菊花產(chǎn)于湖北、四川、山西、貴州、安徽。茯苓產(chǎn)于貴州、安徽、云南。魚(yú)腥草產(chǎn)于貴州、四川、重慶。太子參產(chǎn)于貴州、江西、安徽、江蘇、陜西、福建。所有藥材經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院植物栽培教研室魏升華教授鑒定，均符合《中國(guó)藥典》2015版一部的要求。

1.2農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品α-BHC標(biāo)準(zhǔn)品、γ-BHC標(biāo)準(zhǔn)品、β-BHC標(biāo)準(zhǔn)品、δ-BHC標(biāo)準(zhǔn)品、p，p′-DDE標(biāo)準(zhǔn)品、p，p′-DDT標(biāo)準(zhǔn)品、p，p′-DDD標(biāo)準(zhǔn)品、p，p′-DDT標(biāo)準(zhǔn)品、PCNB五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)值100 μg/mL;純度均為99%以上（購(gòu)于：北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司）。

1.3儀器2010PIΜS島津氣相色譜儀（島津公司）;TG16WS臺(tái)式高速離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;KQ3200D.E數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;BSA224S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.4試劑氮?dú)饧兌?99.99%（安順光大氣廠），氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉、石油醚、二氯甲烷、濃硫酸、丙酮均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1氣相色譜條件參照2015版《中國(guó)藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測(cè)定法第一法項(xiàng)下“9種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測(cè)定法”，以Rtx-1701彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），Ni～ECD電子捕獲檢測(cè)器。進(jìn)樣口溫度230?℃，檢測(cè)器溫度300?℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始100?℃，每分鐘10?℃升至220?℃;每分鐘8?℃，升至250?℃，保持10 min。

2.2混合對(duì)照品制備精密稱取六六六 （α-BHC，β-BHC，γ- BHC，δ-BHC）、滴滴涕（p，p′-DDE，p，p′-DDD，o，p′-DDT，p，p′-DDT） 及五氯硝基苯（PCNB）農(nóng)藥對(duì)照1 mL，標(biāo)準(zhǔn)值100?μg/mL。用石油醚（60～90 ℃）分別制成每1?mL約含2～3?μg的溶液，即得各對(duì)照品貯備溶液;精密量取上述各對(duì)照品貯備液1 mL，置25 mL量瓶中，用石油醚（60～90 ℃）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品制備參照2015版《中國(guó)藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測(cè)定法第一法項(xiàng)下“9種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測(cè)定法”，同法制備樣品，即得。具體操作如下所述：取供試品，粉碎成粉末（過(guò)3號(hào)篩），取約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過(guò)夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置分層后，取有機(jī)相移入100 mL裝有適量無(wú)水硫酸鈉的錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，在40 ℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90 ℃）如前反復(fù)操作3次將二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90 ℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸l mL，振搖1 min，離心（3000 rpm）10 minn，精密量取上清液2 mL，置具刻度的1 mL容量瓶中，用氮?dú)鈱⑷芤簼饪s至適量，并精密稀釋至l mL，即得。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1專屬性實(shí)驗(yàn)分別精密吸取各對(duì)照品貯備溶液1 μL，進(jìn)行分析得到9種有機(jī)氯保留時(shí)間如下表1所示，色譜圖如圖1、2所示。

2.4.2精密度試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)色譜條件，精密吸取混合對(duì)照品溶液1?μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各有機(jī)氯峰面積，并記錄結(jié)果。通過(guò)統(tǒng)計(jì)顯示9種有機(jī)氯的RSD為2.26%～4.52% ，表明儀器精密度良好，符合要求。

2.4.3重復(fù)性試驗(yàn)參照“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法，平行制備6份樣品溶液，將樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)并計(jì)算其 RSD在6.45%～7.82%，表明該方法重復(fù)性良好，符合要求。

2.4.4線性考察吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，制成濃度為0、1、5、10、50、100?μg/L的溶液，進(jìn)樣1μL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，得到9種有機(jī)氯的線性R2均大于0.995，符合要求。最低檢測(cè)限在0.00012～0.00057。線性關(guān)系方程見(jiàn)表2。

2.4.5空白加樣回收實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)中藥中有機(jī)氯含量均低，且有些農(nóng)殘成分未被檢出，通過(guò)精密度實(shí)驗(yàn)得知實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性良好。因此本實(shí)驗(yàn)采用空白溶劑加標(biāo)準(zhǔn)品后，按“2.2”項(xiàng)制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1?μL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，得到實(shí)驗(yàn)的回收率：總六六六為94.35%～105.09%;總滴滴涕為93.18%～101.44%;五氯硝基苯為77.90%～117.83%;表明該方法合理，可用于有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5樣品的測(cè)定按“2.2”項(xiàng)制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1?μL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，結(jié)果顯示三七中農(nóng)殘含量最高是p，p′-DDT為0.775?μg/g，野菊花中農(nóng)殘含量最高是p，p′-DDE為0.2?μg/g，茯苓中農(nóng)殘含量最高是β-BHC為0.057?μg/g，其中不同產(chǎn)地的太子參中只含o，p′-DDT農(nóng)殘最高為0.325?μg/g，魚(yú)腥草中農(nóng)殘含量最高是δ-BHC為0.264?μg/g，詳見(jiàn)表4。

2.6箱型圖統(tǒng)計(jì)分析由于測(cè)定樣品數(shù)量較大，數(shù)據(jù)結(jié)果較為分散，為更好地統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)結(jié)果，采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，可看出5種藥材的不同有機(jī)氯農(nóng)殘數(shù)據(jù)分布較集中，少數(shù)出現(xiàn)異常值，其中有8個(gè)極端異常值大于0.1?μg/g，為農(nóng)藥殘留超標(biāo)。不同中藥品種同種農(nóng)殘的箱型圖，如圖3所示。

2.7樣品各元素超標(biāo)現(xiàn)象現(xiàn)行《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》和《中國(guó)藥典》2015版限量指標(biāo)綜合為：總六六不得超過(guò)0.1?μg/g;總滴滴涕不得超過(guò)0.1?μg/g;五氯硝基苯不得超過(guò)0.1?μg/g。對(duì)9種中藥材中總六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、總滴滴涕（p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT）和五氯硝基苯（PCNB）的9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，從藥材品種分析，其中全草類藥材魚(yú)腥草3批，花類藥材野菊花有2批，根莖類藥材三七、太子參共2批超標(biāo);所有樣品超標(biāo)情況及對(duì)相應(yīng)樣品種類見(jiàn)表5。

3討論

中藥農(nóng)藥殘留具有普遍性，其中農(nóng)藥有機(jī)氯在中藥材中超標(biāo)率和檢出率較高[10]。本研究采用氣相色譜法對(duì)9 種有機(jī)氯農(nóng)殘進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示：5種藥材都不同程度的存在有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，參考《中國(guó)藥典》和《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》收載的品種項(xiàng)下“農(nóng)藥殘留量”部分檢查限度，50批中藥材有機(jī)氯農(nóng)藥檢出率為50%，但普遍含量低，其中總六六和總滴滴涕超標(biāo)率分別為10%和6%，50批中藥材整體合格率達(dá)84%。從藥材品種上分析，花類藥材如野菊花，全草類藥材如魚(yú)腥草，多年生根和根莖類藥材如三七農(nóng)藥殘留污染比較其他藥材嚴(yán)重。其中茯苓農(nóng)藥殘留只有痕量檢出，并無(wú)超標(biāo);野菊花有批2超標(biāo)，魚(yú)腥草有3批超標(biāo)，可能在種植過(guò)程中，農(nóng)藥直接噴灑于植株的花，葉上造成污染，且花類和全草類中藥炮制簡(jiǎn)單、貯藏期短，使農(nóng)藥殘留沒(méi)有得到代謝;太子參只有1批藥材檢出農(nóng)殘，由農(nóng)戶幫忙于野生太子參采收，再按2015版藥典標(biāo)準(zhǔn)炮制成符合要求飲片，采收加工無(wú)明顯接觸農(nóng)殘過(guò)程，因此農(nóng)藥殘留幾乎沒(méi)有;三七1批超標(biāo)，農(nóng)殘含量最高是p，p′-DDT為0.775μg/g，在不同藥用部位的農(nóng)藥污染程度不同，三七由于栽培年限長(zhǎng)（2～3年），且又生長(zhǎng)于蔭蔽高濕的栽培環(huán)境下，三七病害較多且蔓延迅速，因此農(nóng)殘污染相對(duì)嚴(yán)重。綜上所述，發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在藥用植物體內(nèi)的分布隨藥材種類、產(chǎn)地和藥用部位不同而各異。由于中藥材使用前多經(jīng)復(fù)雜炮制、貯藏，很多農(nóng)藥已大部分代謝，因此殘留水平并不高。在中藥種植和生產(chǎn)過(guò)程中，如土壤、水源、大氣等污染，在中藥材采收、加工、保存、運(yùn)輸過(guò)程中也會(huì)造成的農(nóng)藥污染。

對(duì)中藥材農(nóng)藥殘留量進(jìn)行監(jiān)測(cè)是較復(fù)雜的技術(shù)，因此制訂科學(xué)、有效的檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)是控制中藥外源性有害殘留物首要措施。研究對(duì)有關(guān)中藥農(nóng)殘控制中的應(yīng)用進(jìn)行了簡(jiǎn)要概述，對(duì)中藥農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用做了有益的探討，從而為構(gòu)建中藥質(zhì)量體系提供參考，并提升中藥材的國(guó)際形象。

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