常建中 韓亞梅 石亞亭
摘 要:本文通過對食用農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留和獸藥殘留快速檢測常用方法酶抑制率法、酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行系統(tǒng)的介紹,突出了農(nóng)產(chǎn)品快速檢測技術(shù)在樣品前處理和檢測儀器操作等方面的優(yōu)勢,指出快速檢測技術(shù)將在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管體系中起到重要的作用,為基層農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管、執(zhí)法、檢測、評估等部門提供重要的技術(shù)支撐。
關(guān)鍵詞:農(nóng)藥殘留; 獸藥殘留; 快速檢測; 酶抑制率法; 酶聯(lián)免疫吸附法
農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全是食品安全的前提和保障,農(nóng)產(chǎn)品安全問題已成為目前社會廣泛關(guān)注的一個熱點問題。建立完善的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全保障體系,加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)檢驗檢測技術(shù)的研究和開發(fā),發(fā)展快速便捷、成本低廉、準(zhǔn)確度高、易于推廣普及的檢測技術(shù),將為各級食品和農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管、殘留監(jiān)控和風(fēng)險評估部門提供技術(shù)支撐。
實驗室檢測具有高選擇性、高準(zhǔn)確度和高精密度等優(yōu)勢,但存在檢測儀器設(shè)備價格昂貴、操作復(fù)雜、所需試劑和耗材特殊、日常維護(hù)和后期管理十分嚴(yán)格等問題,在基層實驗設(shè)備條件差、工作人員
專業(yè)水平普遍較低、檢測樣品任務(wù)量大、需現(xiàn)場檢測并快速出具檢測結(jié)果的實際工作中難以發(fā)揮重要作用。然而,快速檢測技術(shù)作為食用農(nóng)產(chǎn)品檢驗檢測的基礎(chǔ)手段,則從根本上解決了這一難題,目前已成為農(nóng)產(chǎn)品安全檢測領(lǐng)域不可或缺的一部分。本文就農(nóng)產(chǎn)品安全中危害最大、影響最廣的農(nóng)藥殘留和獸藥殘留快速檢測常用技術(shù)進(jìn)行具體介紹,旨在促進(jìn)農(nóng)獸殘快速檢測技術(shù)的推廣,使其成為基層檢驗檢測機(jī)構(gòu)和監(jiān)管部門保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的一種有力手段。
一、農(nóng)藥殘留快速檢測
有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是目前使用量最大的農(nóng)藥品種,在蔬菜中具有較高的檢出率。當(dāng)前,高毒禁用農(nóng)藥,特別是有機(jī)磷類農(nóng)藥仍是蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)的主體,占到農(nóng)藥市場的57%以上,同時也是菜農(nóng)首選的一類殺蟲劑。
酶抑制率法具有較高的專一性、靈敏性、準(zhǔn)確性及低成本等優(yōu)點,是目前市面上應(yīng)用最廣泛、研究最多且相對成熟的農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù),利用此技術(shù)生產(chǎn)的各種速測儀不但使用方便、檢測速度快、靈敏度高,而且檢測范圍廣、價格實惠,在業(yè)內(nèi)普遍得到認(rèn)可,適用于相對集中、具有一定規(guī)模的農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)基地和批發(fā)市場開展農(nóng)藥殘留快速檢測,已成為目前監(jiān)管和控制農(nóng)藥殘留的重要手段之一。因此,該方法目前在歐美等發(fā)達(dá)國家已成為農(nóng)藥殘留普查和田間實地檢測的基本手段,也是我國國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 5009.199-2003)規(guī)定認(rèn)可的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測主流技術(shù)。
1.酶抑制率法的原理
在一定條件下,有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶的正常功能有抑制作用,其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下,酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物乙酰膽堿水解,其水解產(chǎn)物與顯色劑發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生黃色物質(zhì),用農(nóng)藥殘留速測儀在412nm處測定吸光度隨時間的變化,計算出抑制率,通過抑制率來判定樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
2.酶抑制率法的檢測步驟(具體方法根據(jù)所購買試劑盒為準(zhǔn),圖1)
3.酶抑制率法常見問題及注意事項
(1) 試劑從冰箱取出后放置至室溫再使用;
(2)任何試劑使用時,應(yīng)堅持用完一瓶配一瓶的原則,防止試劑變質(zhì);
(3)移液槍槍頭要一一對應(yīng),不能混用,防止交叉污染;
(4)含色素較高的樣品取樣時,果肉不宜取太多,不宜切太細(xì),否則提取液顏色過深,造成干擾,影響檢測結(jié)果;
(5)對于韭菜、蘿卜、蔥、蒜、芹菜等含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽性,可采用整株蔬菜浸提法進(jìn)行處理;
(6)檢測前,將儀器開機(jī)預(yù)熱10min,以穩(wěn)定儀器性能,提高實驗的精確度;
(7)加入底物后,渦旋混勻,立即進(jìn)行檢測,盡量縮短操作時間,并保證操作的穩(wěn)定性。
二、獸藥殘留快速檢測
獸藥殘留是指在動物及其產(chǎn)品中,如肉類、牛奶、雞蛋等樣品中藥物或其代謝物的積累。在獸藥殘留快速檢測技術(shù)中,酶聯(lián)免疫吸附法(簡稱ELISA)由于操作簡便快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析通量大等優(yōu)點,一直作為一種快速分析和篩選方法備受技術(shù)人員的青睞,在檢測領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,以后也必將在基層監(jiān)管領(lǐng)域發(fā)揮重要的作用。
1.酶聯(lián)免疫吸附法的原理
酶聯(lián)免疫吸附法是把抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來的一種檢測技術(shù),它既可測抗原,也可測抗體。在特定固相載體的表面預(yù)包被免疫活性未被破壞的抗原(抗體),加入待測抗體(抗原),與相應(yīng)的酶標(biāo)記抗原(抗體)進(jìn)行抗原抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng),得到抗原或抗體的復(fù)合產(chǎn)物。然后通過洗滌的方式使固相載體上抗原或抗體的復(fù)合物與其他物質(zhì)分離,最后與底物反應(yīng)生成有色物質(zhì)。樣品中待測抗原或抗體的含量與有色產(chǎn)物量成正比,根據(jù)吸光度值計算抗原或抗體的含量。
2.酶聯(lián)免疫吸附法的檢測步驟(以鹽酸克倫特羅獸殘檢測為例,具體步驟根據(jù)所購買試劑盒為準(zhǔn),圖2)
3.酶聯(lián)免疫吸附法常見問題及注意事項
(1)使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫(20-25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低;
(2)在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象,所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作;
(3)混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象;
(4)反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚;
(5)不要使用過期的試劑盒,不要交換使用不同批號的盒中試劑,稀釋或摻雜使用會引起靈敏度、OD值的變化;
(6)不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封;試劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下;
(7)顯色劑若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。
三、結(jié)語
利用酶抑制率法測定的樣品和農(nóng)藥種類有限,目前只用于蔬菜、水果中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留檢測,且一般用于大批量樣品的前期篩選,尚不能給出具體的定量結(jié)果;另外,檢測蔥、姜、蒜、香菜、芹菜等樣品時,易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。而酶聯(lián)免疫吸附法測定獸藥殘留,目前也還停留于單項獸殘檢測,一次性檢測多種獸藥還存在很大的挑戰(zhàn),而這些問題也將成為今后快速檢測技術(shù)領(lǐng)域研究的重中之重。
總而言之,采用酶抑制率法和酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行農(nóng)藥殘留、獸藥殘留快速檢測實驗中,試劑制備、樣品處理、儀器操作都較為簡單,對檢測人員專業(yè)水平要求不高,快速檢測技術(shù)的及時性和準(zhǔn)確性也能夠得以充分體現(xiàn),這些優(yōu)勢都將進(jìn)一步促進(jìn)快速檢測技術(shù)在基層監(jiān)管、執(zhí)法、檢測、評估等部門的推廣和普及,使得食品安全“從農(nóng)田到餐桌”的全程監(jiān)管制度得到更好落實,使黨的十九大報告中提出的“全面實施食品安全戰(zhàn)略,讓人民吃得放心”的目標(biāo)得以具體落實,有效解決人民群眾對食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的迫切需求,使我們的生活更加美好。
參考文獻(xiàn):
[1] 張萍. 食品中農(nóng)藥、獸藥殘留檢測相關(guān)技術(shù)研究[J]. 中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理, 2017(19):6-7.
[2] 趙云峰, 陳達(dá)煒. 食品中農(nóng)藥、獸藥殘留檢測研究進(jìn)展[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報, 2015(5):1644-1645.
[3] 王文豐,王艷樹,馬濤,等.影響酶抑制率法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確性因素的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(12):121-122.
[4] 謝俊平,梁科.舌尖上的保衛(wèi)者 “酶抑制率法”[J].食品安全導(dǎo)刊,2018(22):42-43。
[5] 王柱寬. 酶抑制率法在蔬菜農(nóng)殘檢測中的應(yīng)用[J]. 中國農(nóng)業(yè)信息, 2015(2):64-66.