陳蕊君，滿 目

(中國人民解放軍食品檢測試驗中心，北京 101301)

L-8900高速全自動氨基酸分析儀由日立(HITACHI)公司生產(chǎn)，是目前國內(nèi)使用最多的氨基酸自動分析儀之一[1]. 當分析儀使用過久、維護不當時，其分析柱會發(fā)生堵塞或污染，從而導致系統(tǒng)壓力升高，直接影響系統(tǒng)穩(wěn)定性，同時引起保留時間的偏差. 當分析柱樹脂老化，就會導致離子交換能力下降，柱效降低，相鄰峰的分離度會變差，峰形也會改變，從而嚴重影響測試結(jié)果.

1 故障表現(xiàn)

分析儀開機后電腦進入設(shè)置界面，主機與軟件連接正常. 初始化完畢，手動排出泵1和泵2流路中的氣泡后，設(shè)置泵1流速(PH-1緩沖液B1為0.3 mL/min)和泵2流速(5%乙醇R3為0.2 mL/min)，執(zhí)行后待流速逐漸升高，此時出現(xiàn)提示“PERSSURE MAX LIMIT ERROR” occurred on Pump 1(泵1壓強過高)，主機停止運行.

2 故障排除

首先，根據(jù)使用說明書(主機)中故障診斷，首先檢查線性過濾器是否被樣品中的雜質(zhì)堵塞. 卸下各部位的前推螺絲，卸下過濾器壓板，取出過濾器，發(fā)現(xiàn)不僅被雜質(zhì)污垢覆蓋，并且已被腐蝕斷裂. 更換新的過濾器并運行泵1，仍然彈出“泵1壓強過高”的提示.

第二步，確認分析柱是否發(fā)生堵塞. 采用逆洗方法，拆下分析柱并反向安裝，不連接柱出口特氟隆管. 用RH-RG緩沖液B6沖洗10 min進行再生，再用緩沖液B1沖洗30 min，完成后將分析柱恢復正常流向，然后運行泵1，仍然彈出“泵1壓強過高”的提示.

最后，通過重新填充分析柱解決了問題. 因樹脂價格昂貴，為避免造成損失，此操作需要小心謹慎，詳見以下步驟.

2.1 裝柱工具

玻璃棒、離心管、離心機等. 裝柱工具一定要提前使用超純水超聲清洗，并用注射器清洗.

2.2 試劑

2 mol/L的HCl：將市售濃鹽酸用蒸餾水稀釋6倍. 2 mol/L 的NaOH：用燒杯稱取氫氧化鈉8 g，加水稀釋，等溶液涼至室溫后，轉(zhuǎn)移定容至100 mL，存于聚乙烯試劑瓶中備用.

丙酮和乙醇級別越高越好，如無色譜純試劑，也可用國藥的分析純替代.

2.3 樹脂收集及清洗

在柱溫低于50 ℃時拆卸分離柱，拆下一端端帽后發(fā)現(xiàn)樹脂明顯變臟，用裁紙刀輕輕的去掉一層，重新連接分離柱，通過泵壓把樹脂沖洗出來(泵1流速設(shè)置為B1 0.999 mL/min)，收集至一空離心管中(如圖1所示)，將分離柱金屬外殼及兩端端帽超聲清洗.

圖1 樹脂收集Fig. 1 Collection of resin

把沖洗到離心管中的樹脂進行離心，轉(zhuǎn)速 5 000 r/min，離心5 min，棄去上清液(和樹脂一同沖洗出的B1緩沖液). 向離心管中添加4～5倍量的丙酮(約10 mL)，用玻璃棒攪拌后離心(同時用丙酮沖洗玻璃棒)，轉(zhuǎn)速5 000 r/min，離心5 min，棄去上清液，加入約10 mL超純水攪拌，離心棄上清液，并重復2～3次. 向離心管中添加4～5倍量2 mol/L 的HCl，用玻璃棒攪拌后離心，轉(zhuǎn)速5 000 r/min，離心5 min，棄去上清液，加入約10 mL超純水攪拌，離心棄上清液，直到用普通pH試紙測試其pH值接近中性為止(或在5～6附近)，一般2-3次即可達到.

向離心管中添加4～5倍量2 mol/L 的NaOH，用玻璃棒攪拌后離心，轉(zhuǎn)速5 000 r/min，離心5 min，棄去上清液，加入約10 mL超純水攪拌，離心棄上清液，直到用普通pH試紙測試pH值接近8～9左右即可，一般洗2～3次即可達到.

如清洗完成后無法立即重填柱子，可將清洗過的樹脂加入少量B1緩沖液保存于冰箱中.

2.4 填充分析柱

拆開泵1 的出口，連接裝柱工具. 因清洗過程中樹脂會有損失，所以需要向清洗好的樹脂中再添加少許新樹脂. 將清洗好的舊樹脂轉(zhuǎn)移到裝柱工具中(裝柱工具總?cè)萘?2.5 mL，樹脂填充液添加至白色密封圈前約5 mm的位置)，轉(zhuǎn)移完畢后重新連接裝柱工具到泵1. 點擊EZChrom 控制軟件中的全自動裝柱程序，設(shè)置壓力為13 MPa. 把裝柱工具和分離柱(如圖2所示)斜向上，以排除柱中可能存在的氣泡. 當沒有氣泡冒出后(約20 min)，放置如圖3所示，開始填充分析柱. 當泵壓上升至12.8 MPa時，等待60 min，即可拆開裝柱工具及分離柱.

圖2 排除裝柱工具中氣泡Fig. 2 Remove air bubbles in packing tool

圖3 填充分析柱Fig. 3 Filling of analytical column

拆下裝柱工具后，用濾紙吸取分析柱另一端多余的水分，擰上端帽，安裝至主機，泵1不再提示壓強過高，實測氨基酸標準溶液，結(jié)果如圖4所示. 由圖4可見，設(shè)備運行正常.

3 分析柱維護

儀器一周以上不使用時，需要將分析柱的樹脂用泵排出，并使用緩沖液B1浸泡，在4 ℃冰箱中保存，同時用蒸餾水清洗各個管路. 或每周使用手動清洗的方法：B6和R3緩沖液沖洗30 min，B1和R3緩沖液沖洗30 min. 需注意，沖洗后應將管路中的氣泡排出干凈，再將緩沖液泵接入分析柱. 由于樣品中固形物、脂肪和蛋白質(zhì)等污染物質(zhì)的含量不同，分析柱使用壽命標準也不相同，當出現(xiàn)泵1壓強過高、柱效降低等現(xiàn)象時，可考慮是否需要重填分析柱.

圖4 分析柱充填后標準溶液圖譜Fig. 4 Standard solution map after refilling analytical column

4 結(jié)語

分析柱充填后，不僅解決了設(shè)備故障問題，分離度和重復性也有很大提高. 雖然重填分析柱可以恢復柱效，但是儀器的定期維護可降低重填的頻率，維持較為穩(wěn)定的儀器狀態(tài). 由于樹脂價格昂貴，在充填樹脂的過程中尤其要注意回收，避免浪費. 儀器維修雖然可以利用說明書逐步推斷故障原因，但在設(shè)備檢查維修過程中，因元件較小，線路復雜，安裝和拆卸錯誤會引起極大損失，因此操作時需格外小心謹慎. 在沒有經(jīng)驗和技術(shù)支持的情況下，重填分離柱會有一定困難，為此將操作步驟進行記錄與總結(jié)，以期為將來的工作和同行提供借鑒.