嚴(yán)斯剛 李 芳 黃小武* 韋玉慶 余 波 蘇益瓊 梁麗娟 覃周嵐 羅 生 覃萬福

1.廣西壯族自治區(qū)柳州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西柳州 545006；2.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西鹿寨 545600；3.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣平山鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西鹿寨 545612；4.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣鹿寨鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西鹿寨 545600

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）是由副黏病毒科麻疹病毒屬中的小反芻獸疫病毒引起的急性接觸傳染病，山羊最易感，臨床表現(xiàn)為精神沉郁、高熱、眼鼻分泌物增多、呼吸困難、壞死性口炎、腸炎和鼻炎等癥狀，死亡率高達(dá)70%～80%[1]。我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。2013年11月底，PPR再次傳入我國(guó)并不斷蔓延，截至2015年8月，共有22個(gè)省（市、自治區(qū)）發(fā)生271起PPR疫情，累計(jì)3.7萬只羊發(fā)病、1.7萬只羊死亡，對(duì)養(yǎng)羊業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[2]。對(duì)羊群接種疫苗是預(yù)防該病發(fā)生和流行最為有效的方法之一。筆者以不同年齡大小的山羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象，采用不同方式和不同劑量接種小反芻獸疫弱毒疫苗，以阻斷酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)山羊抗體水平，考察不同方式和不同劑量接種PPR疫苗的免疫效果，為生產(chǎn)中PPR免疫程序的合理制定提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)疫苗

小反芻獸疫弱毒疫苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格為50頭份/瓶，批號(hào)為2016044-2，每頭份疫苗含有的小反芻獸疫弱毒病毒至少為1×103TCID50。按瓶簽注明頭份，用滅菌生理鹽水將疫苗稀釋至每毫升含有1頭份，充分混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆?，稀釋后的疫苗? h內(nèi)用完。

1.2 診斷試劑

小反芻獸疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京勤邦生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為20170802。

1.3 血清樣品

1）不同免疫劑量試驗(yàn)組。選取1.5～3月齡、未接種過小反芻獸疫疫苗、臨床檢查健康、在同一養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的本地山羊20只，隨機(jī)分為A、B 2個(gè)組，每組10只，分別頸部皮下注射疫苗1.0 mL/只和2.0 mL/只，做好標(biāo)識(shí)，在未改變?cè)袟l件下飼養(yǎng)。分別于接種疫苗后第28、120天采集血樣，分離血清不少于1 mL/只，-20℃以下保存?zhèn)錂z。

2）不同接種方式試驗(yàn)組。選取2～4月齡、未接種過小反芻獸疫疫苗、臨床檢查健康、在同一養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的本地山羊20只，隨機(jī)分為C、D 2個(gè)組，每組10只，C組皮下注射疫苗1 mL/只，B組肌肉注射疫苗1 mL/只，做好標(biāo)識(shí)，在未改變?cè)袟l件下飼養(yǎng)。分別于接種疫苗后第28、120、180天采集血樣，分離血清不少于1 mL/只，-20℃以下保存?zhèn)錂z。

1.4 抗體檢測(cè)

具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。以D450nm值為判定標(biāo)準(zhǔn)。正常試驗(yàn)情況下，陰性對(duì)照吸光值≥1.0，陽(yáng)性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。按照公式計(jì)算阻斷率（PI）：PI=（1-樣本值/陰性對(duì)照孔均值）×100%。根據(jù)PI進(jìn)行結(jié)果判定：PI≥50%為陽(yáng)性；PI＜50%為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同接種劑量的免疫抗體水平

由表1和表2可知，山羊在接種小反芻獸疫弱毒疫苗后的第28天時(shí)，A、B 2組均產(chǎn)生了較高水平的免疫抗體，陽(yáng)性率達(dá)90%，從第28天到第120天，A、B 2組的山羊免疫抗體陽(yáng)性率和PI平均值呈上升態(tài)勢(shì)，PI離散度呈下降趨勢(shì)，2組間山羊免疫結(jié)果差異不明顯（P＞0.05）。

2.2 不同接種方式的免疫抗體檢測(cè)情況

由表3、表4和表5可知，山羊在接種小反芻獸疫弱毒疫苗后的第28天，無論是皮下注射還是肌肉注射均產(chǎn)生了較高水平的免疫抗體，陽(yáng)性率均達(dá)80%。從第28天到第120天C、D 2組的山羊免疫抗體陽(yáng)性率和PI平均值呈上升態(tài)勢(shì)，PI離散度呈下降趨勢(shì)，C、D 2組間免疫效果差異不明顯（P＞0.05）。第180天時(shí)，皮下注射組免疫抗體陽(yáng)性率和PI平均值仍維持在較高水平，PI離散度上升了4.75個(gè)百分點(diǎn)；肌肉注射組免疫抗體陽(yáng)性率和PI平均值呈明顯下降趨勢(shì)，陽(yáng)性率下降了40個(gè)百分點(diǎn)，PI離散度上升了15.42個(gè)百分點(diǎn)，C、D 2組間免疫效果存在極顯著差異（P＜0.01）。

表1 不同接種劑量第28天免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 不同接種劑量第120天免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 不同接種方式第28天免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 不同接種方式第120天免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 不同接種方式第180天免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

PPR嚴(yán)重威脅我國(guó)的動(dòng)物衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)發(fā)展，以疫苗接種為主的綜合技術(shù)應(yīng)用是防控該病的有效措施，而免疫方案的完善是當(dāng)前防控PPR的重要工作內(nèi)容。我國(guó)各地防疫條件存在差異，制定適宜當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實(shí)際的免疫程序是保障當(dāng)?shù)匮蝠B(yǎng)殖生產(chǎn)安全的必要措施。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年柳州市全年山羊存欄18.96萬只，出欄25.05萬只，以小規(guī)模自繁自養(yǎng)本地黑山羊?yàn)橹?。山羊養(yǎng)殖成為柳州當(dāng)?shù)剞r(nóng)民脫貧致富的重要途徑之一。因此，本研究對(duì)切實(shí)提高免疫質(zhì)量以及有效預(yù)防控制疫情發(fā)生有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

不同免疫劑量試驗(yàn)結(jié)構(gòu)表明，皮下注射1個(gè)或2個(gè)免疫劑量疫苗均獲得良好的免疫效果，2組間免疫效果差異不明顯（P＞0.05），但后者劑量增加了1倍，這與郝玉清等[3]的研究結(jié)果基本一致。柳州地處中亞熱帶向南亞帶過渡的季風(fēng)氣候帶，夏季炎熱，雖然小反芻獸疫弱毒疫苗對(duì)熱敏感，但本次試驗(yàn)說明，疫苗經(jīng)過省、市、縣三級(jí)冷鏈環(huán)節(jié)儲(chǔ)存和配送到基層后，其單位病毒含量沒有明顯下降，仍然可以刺激機(jī)體產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)免疫力，按照1個(gè)免疫劑量接種疫苗完全可以達(dá)到預(yù)期的免疫效力水平，無需加大劑量。

郝玉清等[3]研究報(bào)道，山羊頸部皮下注射和肌肉注射1倍量PPR疫苗后7 d和14 d分別進(jìn)行檢測(cè)，2組山羊免疫后7 d的免疫抗體陽(yáng)性率分別為90%、80%，免疫后14 d免疫抗體陽(yáng)性率均為100%。本試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，皮下注射和肌肉注射PPR疫苗后，在第28天和第120天這2個(gè)監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)的免疫抗體陽(yáng)性率完全一致，分別為80%和100%，第28天和第120天時(shí)，2組間免疫效果差異不明顯（P＞0.05）；第180天時(shí)兩者免疫抗體陽(yáng)性率分別為60%和100%，PI離散度分別為19.29%和31.50%，2組間免疫效果存在極顯著差異（P＜0.01）。本試驗(yàn)結(jié)果說明，山羊采用皮下注射和肌肉注射2種方式接種小反芻獸疫弱毒疫苗后均能獲得一定水平的免疫效力，前者高免疫抗體水平持續(xù)期更長(zhǎng)、免疫效果優(yōu)于后者?？梢?，在給動(dòng)物接種疫苗時(shí)，嚴(yán)格按照說明書規(guī)定的途經(jīng)接種是很重要的。不同疫苗具有不同的免疫學(xué)特性，隨意改變其接種方式容易出現(xiàn)免疫效果差或免疫失敗現(xiàn)象。