陳壯榮，黃偉，陳靈芝，李多善

海南西部中心醫(yī)院綜合內(nèi)科，海南 儋州571700

原發(fā)性肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，具有發(fā)病率高、病情進(jìn)展速度快、病死率高及惡性程度強等特點，即使對患者行根治性切除術(shù)，術(shù)后5年內(nèi)患者仍有可能出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，而一旦發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，患者的生存率極低[1]。早期原發(fā)性肝癌的臨床癥狀不明顯，大部分患者確診時已發(fā)展到了晚期階段，錯過了治療的最佳時機，因此，早期診斷和治療可有效提高原發(fā)性肝癌患者的生存率[2]。臨床上，血清甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）、胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）、Dickkopf相關(guān)蛋白1（dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 1，DKK1）三項指標(biāo)單獨診斷原發(fā)性肝癌具有較低的靈敏度和特異度，且容易出現(xiàn)誤診和漏診的現(xiàn)象，而三項指標(biāo)聯(lián)合檢測可提高原發(fā)性肝癌的臨床檢出率，為原發(fā)性肝癌的診斷提供重要的參考依據(jù)[3]。本研究探討血清AFP、TK1、DKK1單獨及聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌中的診斷價值，旨在為原發(fā)性肝癌的診斷提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2016年8月至2018年4月海南西部中心醫(yī)院收治的120例原發(fā)性肝癌患者作為原發(fā)性肝癌組，90例良性肝病患者作為良性肝病組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合原發(fā)性肝癌或良性肝病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②無精神疾病，依從性佳。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重的糖尿?。虎诤喜⒅夤芟?、肺結(jié)核、肺部腫瘤等疾??；③存在免疫缺陷。另外，選取同期海南西部中心醫(yī)院80例健康體檢者作為健康對照組。原發(fā)性肝癌組中，男68例，女52例；年齡為34～66歲，平均年齡為（49.6±2.3）歲。良性肝病組中，男50例，女40例；年齡為35～66歲，平均年齡為（49.2±2.0）歲。健康對照組中，男45例，女35例；年齡為35～65歲，平均年齡為（48.6±1.9）歲。3組受試者的性別和年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)，所有受試者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

避免用藥后對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和客觀性造成影響，所有患者于治療前均抽取清晨空腹肘部靜脈血4 ml，并將其置于帶有惰性分離膠的真空采血管中，靜置于室溫環(huán)境中約30 min后，以4000 r/min的離心速度分離血清，10 min后，置于-25℃的環(huán)境下保存待測。應(yīng)用DX1800 Access化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測血清AFP水平，檢測試劑盒購自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；應(yīng)用CIS-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀檢測血清TK1水平，檢測試劑盒購自深圳華瑞同康生物技術(shù)深圳有限公司；應(yīng)用DNM-9602G型酶標(biāo)分析儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清DKK1水平，ELISA試劑盒購自上海撫生實業(yè)有限公司。上述操作均嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行[5-6]。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

觀察3組受試者血清中AFP、TK1、DKK1的含量。以檢測指標(biāo)的臨床正常值為臨界參考值，超過該界限即為陽性。AFP、TK1、DKK1陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：AFP＜10.0 ng/ml為正常，≥10.0 ng/ml定義為陽性；TK1＜2.0 pmol/L為正常，≥2.0 pmol/L定義為陽性；DKK1＜2.0 ng/ml為正常，≥2.0 ng/ml定義為陽性。以血清學(xué)檢查結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析AFP、TK1、DKK1單獨及聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值。靈敏度=真陽性例數(shù)（/真陽性+假陰性）例數(shù)×100%，特異度=真陰性例數(shù)（/真陰性+假陽性）例數(shù)×100%，準(zhǔn)確度=（真陰性+真陽性）例數(shù)（/真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）例數(shù)×100%。AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測結(jié)果的判定：任一指標(biāo)檢測結(jié)果為陽性，則判定聯(lián)合檢測結(jié)果為陽性；所有指標(biāo)檢測結(jié)果均為陰性，則判定聯(lián)合檢測結(jié)果為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清AFP、TK1、DKK1水平的比較

3組受試者血清中AFP、TK1、DKK1水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。原發(fā)性肝癌組患者血清中AFP、TK1和DKK1的水平均高于良性肝病組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。良性肝病組患者上述指標(biāo)水平均高于健康對照組患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 3組受試者血清中AFP、TK1、DKK1水平的比較（±s）

表1 3組受試者血清中AFP、TK1、DKK1水平的比較（±s）

注：a與原發(fā)性肝癌組比較，P＜0.05；b與良性肝癌組比較，P＜0.05

組別原發(fā)性肝癌組（n=120）良性肝病組（n=90）健康對照組（n=80）χ2值P值A(chǔ)FP（ng/ml）324.1±91.1 61.2±5.1a 6.2±7.3a b 16.584 0.032 TK1（pmol/L）5.6±1.9 1.5±5.9a 0.8±0.2a b 16.591 0.034 DKK1（ng/ml）3.9±1.5 1.6±0.5a 1.3±0.1a b 16.475 0.036

2.2 血清AFP、TK 1、DKK 1陽性表達(dá)情況的比較

3組受試者血清中AFP、TK1、DKK1的陽性表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。原發(fā)性肝癌組患者血清中AFP、TK1和DKK1的陽性表達(dá)率均高于良性肝病組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。良性肝病組患者上述指標(biāo)的陽性表達(dá)率均高于健康對照組患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 3組受試者血清中AFP、TK1、DKK1陽性表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.3 AFP、TK 1、DKK 1單獨及聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷效能

在單項診斷和聯(lián)合診斷中，AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度均最高，分別為71.7%、84.4%和77.1%。DKK1診斷原發(fā)性肝癌的特異度僅次于AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測，TK1診斷原發(fā)性肝癌的準(zhǔn)確度僅次于AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測，為71.4%。（表3）

表3 AFP、TK1、DKK1單獨及聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷效能[%（n/n）]

3 討論

在中國，原發(fā)性肝癌的發(fā)病率和病死率均較高，2011年，肝癌的發(fā)病率和病死率分別為26.39/10萬和23.93/10萬，在全部腫瘤中，肝癌的發(fā)病率位居第4位，而肝癌的病死率位居第2位[7-8]。原發(fā)性肝癌嚴(yán)重威脅著患者的生存質(zhì)量，患者的主要臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛（持續(xù)性鈍痛、刺痛或脹痛）、全身乏力、食欲減退、惡心嘔吐、腹瀉；其并發(fā)癥較多，常會合并肝性昏迷、上消化道出血和破裂出血等并發(fā)癥，會對患者的生活質(zhì)量造成嚴(yán)重的威脅；顯微鏡下觀察，肝癌細(xì)胞較正常肝細(xì)胞大，且肝癌細(xì)胞的形態(tài)不規(guī)則[9]。此外，原發(fā)性肝癌的病情較為隱匿，且病情發(fā)展迅速，因此，早期診斷、早期治療是延長原發(fā)性肝癌患者生存時間的關(guān)鍵[10]。

目前，臨床上診斷原發(fā)性肝癌的方法較多，但是診斷靈敏度和準(zhǔn)確度不理想，無法為原發(fā)性肝癌的診斷提供科學(xué)、可靠的依據(jù)[11]。腫瘤標(biāo)志物是指特征性存在于惡性腫瘤細(xì)胞，或由惡性腫瘤細(xì)胞異常產(chǎn)生的物質(zhì)，或是宿主對腫瘤的刺激反應(yīng)而產(chǎn)生的物質(zhì)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌中存在著多種腫瘤標(biāo)志物，且認(rèn)為一種腫瘤標(biāo)志物可能存在于多種腫瘤中，并且同一種腫瘤中也可能存在多種腫瘤標(biāo)志物[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌組患者血清中AFP、TK1和DKK1的水平均較高。

AFP是臨床常用的診斷原發(fā)性肝癌的腫瘤標(biāo)志物，其濃度與腫瘤直徑呈正相關(guān)，即AFP的濃度越高，患者的腫瘤直徑越大，且肝癌患者的腫瘤直徑不同，AFP檢測的靈敏度也存在差異。但很多研究認(rèn)為AFP對原發(fā)性肝癌的診斷靈敏度和特異度不高，特別在原發(fā)性肝癌的早期階段[14-16]。本研究中，血清AFP單獨診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度為54.2%，特異度為76.7%，準(zhǔn)確度為63.8%，這與上述的研究結(jié)果相似，說明血清AFP單獨診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度和準(zhǔn)確度均較低，而聯(lián)合應(yīng)用靈敏度較高的腫瘤標(biāo)志物能夠提高對原發(fā)性肝癌的診斷準(zhǔn)確度。

TK1是與腫瘤細(xì)胞的增殖密切相關(guān)的血清標(biāo)志物，也是DNA合成過程的關(guān)鍵酶。腫瘤細(xì)胞的過度增殖是形成腫瘤的第一步，而TK1與腫瘤細(xì)胞的增殖具有一定的關(guān)系，因此，通過檢測TK1的濃度便可以了解惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險[17]。血清TK1水平在健康人群內(nèi)趨近于無或者含量極低，因此，通過檢測TK1的含量診斷原發(fā)性肝癌具有良好的診斷效果。本研究中，原發(fā)性肝癌組患者血清中TK1的水平高于良性肝病組和健康對照組（P＜0.05），說明TK1可能能夠成為原發(fā)性肝癌的腫瘤標(biāo)志物。但是，由于TK1在大多數(shù)惡性腫瘤中的表達(dá)水平均較高，因此，TK1單獨診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度較低，無法作為診斷原發(fā)性肝癌的首選血清標(biāo)志物；另外，TK1存在個體差異，且TK1與腫瘤細(xì)胞的增殖密切相關(guān)，當(dāng)患者腫瘤細(xì)胞的增殖速度較慢時，血清中TK1的濃度較低，因此，臨床易出現(xiàn)漏診的現(xiàn)象[18]。與靈敏度較高的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可解決TK1癌譜廣泛的問題。

DKK1是WNT信號通路的負(fù)調(diào)節(jié)蛋白，其在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程中均發(fā)揮著重要的作用[19]。WNT信號通路與胚胎發(fā)育、生長及調(diào)節(jié)過程緊密聯(lián)系，并且與肺癌、肝癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[20]。DKK1在不同類型惡性腫瘤中的表達(dá)情況不同。本研究中，原發(fā)性肝癌組患者血清中DKK1水平高于良性肝病組和健康對照組，AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度和準(zhǔn)確度均高于AFP、TK1、DKK1單獨檢測的結(jié)果，提示DKK1在原發(fā)性肝癌患者血清中的水平較高，AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測可提高對原發(fā)性肝癌的診斷效能，具有重要的臨床診斷價值。

綜上所述，血清AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度和準(zhǔn)確度、特異度均較高，對于臨床原發(fā)性肝癌的診斷具有重要的參考價值，擁有廣闊的應(yīng)用前景，值得臨床推廣和應(yīng)用。