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不同產(chǎn)地瑪咖中瑪咖酰胺、瑪咖烯和芥子油苷含量測定

2019-10-19 21:29李愛民趙可心黨艷婷劉明曹夢思溫霖李子杰高曉冬
中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2019年28期
關(guān)鍵詞:產(chǎn)地海拔品種

李愛民 趙可心 黨艷婷 劉明 曹夢思 溫霖 李子杰 高曉冬

[摘要] 目的 調(diào)研我國不同產(chǎn)地瑪咖中活性成分含量及主要影響因素。 方法 從云南四川兩省五個地區(qū)采集40個瑪咖鮮果樣品,將瑪咖鮮果切片,烘干、粉碎、過篩得到瑪咖粉。采用高效液相色譜法測定瑪咖中芥子油苷、瑪咖烯胺和瑪咖烯的含量,色譜條件分別為:芥子油苷的測定采用島津C18色譜柱(3.9 mm×150 mm,5 μm),乙腈-水為流動相,梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,檢測波長為229 nm;瑪咖酰胺和瑪咖烯的測定采用Waters XTerra C18色譜柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm),乙腈-水(均含0.005%三氯乙酸)為流動相,梯度洗脫,流速為0.6 mL/min,瑪咖酰胺檢測波長為210 nm,瑪咖烯檢測波長為273 nm。 結(jié)果 瑪咖酰胺、瑪咖烯、芥子油苷的含量分別為49.72~204.36 mg/100 g、10.22~66.73 mg/100 g、256.56~936.65 mg/100 g。相關(guān)性和顯著性分析結(jié)果提示,瑪咖中活性成分的含量與瑪咖顏色無關(guān)(P > 0.05)。四川省和云南省其他地區(qū)瑪咖中活性成分含量高于昆明市(P < 0.05)。 結(jié)論 不同產(chǎn)地瑪咖酰胺和瑪咖烯的含量與海拔呈現(xiàn)一定的正相關(guān)趨勢,而與瑪咖果顏色無關(guān),產(chǎn)地也是影響瑪咖活性成分的重要因素。

[關(guān)鍵詞] 瑪咖烯;瑪咖酰胺;芥子油苷;海拔;產(chǎn)地;品種

[中圖分類號] R33 ? ? ? ? ?[文獻標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210(2019)10(a)-0030-05

Detection of macaamide,macaene and glucosinolate in Maca from different producing areas

[Abstract] Objective To investigate the content of active ingredients and main influencing factors in Maca from different producing areas in China. Methods Samples of 40 Maca fresh fruit were collected from five regions in Yunnan and Sichuan provinces. The fresh Maca fruits was sliced, dried, crushed and sieved to obtain maca powder. The content of glucosinolates, macaenines and macaenes in Maca was determined by high performance liquid chromatography. The determination of glucosinolates was carried out by C18 chromatographic column (3.9 mm×150 mm, 5 microns), acetonitrile-water was used as the mobile phase of the gradient elute, with the detection wavelength of 229 nm and the flow rate of 1.0 mL/min. The determination of macaene and macaamide was carried out by Waters XTerra C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), acetonitrile-water (all containing 0.005% trichloroacetic acid) was as the mobile phase of the gradient elute, macaene with the detection wavelength of 210 nm and macaamide with the detection wavelength 273 nm and the flow rate of 0.6 mL/min. Results The content of macaene, macaamide and glucosinolate were respectively 49.72-204.36 mg/100 g, 10.22-66.73 mg/100 g and 256.56-936.65 mg/100 g. Correlation and significance analysis showed that the content of active ingredients in Maca was not related to color, but the origin. The results of correlation and significance analysis indicated that the content of active ingredients in Maca had nothing to do with the color of Maca(P > 0.05). The content of active ingredients in Maca in Sichuan Province and other areas of Yunnan Province was higher than that in Kunming(P < 0.05). Conclusion The content of macaamide and macaene in different producing areas showed a positive correlation with altitude, but has nothing to do with the color of Maca fruit. The origin is also an important factor affecting the active ingredients of Maca.

[Key words] Macaamide; Macaene; Glucosinolate; Elevation; Producing areas; Variety

瑪咖(Lepidium meyenii)是十字花科(Brassicaceae)獨行菜屬(Lepidium)一年生或兩年生草本植物,原產(chǎn)于秘魯中部基寧及帕斯科附近3500 m以上的安第斯山區(qū),為當(dāng)?shù)爻S檬卟薣1-2]?,斂е泻卸喾N生物活性成分,如生物堿、芥子油苷及其衍生物異硫氰酸酯、瑪咖烯、甾醇和多酚等,其中芥子油苷是其中含量最高的一類,在不同瑪咖中含量為10.97~79.84 mg/g不等[3],其具有提高生育力、抗癌、抗氧化及抗疲勞等作用[4-7]。2002年,瑪咖被正式批準在國內(nèi)試種。由于云南大部分地區(qū)處于高原高寒地帶,非常適合瑪咖生長,瑪咖產(chǎn)業(yè)在云南發(fā)展迅猛,在四川新疆等省份也有種植。大量研究認為瑪咖的質(zhì)量與其品種,產(chǎn)地以及產(chǎn)地的海拔有關(guān)[8-10],但是缺乏相關(guān)第一手的實驗數(shù)據(jù)和相關(guān)研究支持。本課題組前期調(diào)研采集到我國代表性瑪咖產(chǎn)地中5個地區(qū)40個瑪咖樣品并記錄原產(chǎn)地海拔經(jīng)緯度等相關(guān)信息,通過測定瑪咖中活性成分的含量,將瑪咖中活性成分含量與瑪咖品種,產(chǎn)地以及產(chǎn)地海拔進行相關(guān)性分析。為我國瑪咖品質(zhì)提供了第一手數(shù)據(jù)支持,科學(xué)分析了影響瑪咖活性成分的主要因素。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀,日本島津公司;超聲波清洗儀,昆山超聲儀器有限公司;pH計,上海雷磁儀器廠;GL-20G-Ⅱ型高速冷凍離心機,上海安亭科學(xué)儀器廠;DK-8D三溫三控水槽,上海博迅實業(yè)有限公司;DQ-103/104型臺式方形中藥切片機,溫嶺市林大機械有限公司;DHG-9145A型電熱鼓風(fēng)干燥箱,上海一恒科技有限公司;BJ-500A型高速多功能粉碎機,德清拜杰電器有限公司。

1.2 試藥

N-芐基亞麻酰胺標(biāo)品(批號:HB-00002-20170224,純度>98%)、N-芐基亞油酰胺標(biāo)品(批號:HB-00004-20170306,純度>98%)、N-芐基十六烷酰胺標(biāo)品(批號:HB-00007-20170311,純度>98%)、間甲氧基N-芐基亞麻酰胺標(biāo)品(批號:HB-00001-20170227,純度>98%)、間甲氧基N-芐基亞油酰胺標(biāo)品(批號:HB-00003-20170302,純度>98%),購自武漢華士特工業(yè)生物技術(shù)開發(fā)有限公司;芥子油苷標(biāo)品:金蓮葡糖硫苷鉀鹽(批號:TG039701,純度95%),購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司;瑪咖烯標(biāo)品(批號:F-106006,純度99%),購自加拿大TLC標(biāo)品公司;色譜級乙腈和色譜級甲醇,購自美國邁瑞達公司;超純水為實驗室制備;三氯乙酸為國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 瑪咖樣品的采集

筆者深入瑪咖主產(chǎn)地云南四川兩省開展調(diào)研工作,在香格里拉、昆明、麗江等6個地級市采集了40個瑪咖鮮果樣本,同時記錄其產(chǎn)地(經(jīng)緯度)和海拔的數(shù)據(jù)信息。所采集到的樣品經(jīng)國珍健康科技(北京)有限公司執(zhí)業(yè)藥師陳超鑒定為瑪咖(Lepidium meyenii)是十字花科(Brassicaceae)獨行菜屬(Lepidium),有黃瑪咖,紫瑪咖和黑瑪咖三個品種。

2.2 瑪咖樣品預(yù)處理

瑪咖鮮根洗凈并切2 mm薄片,37℃熱風(fēng)干燥至瑪咖中水分含量低于5%,用粉碎機粉碎后過60目篩得到瑪咖粉用于后續(xù)實驗[11]。

2.3 芥子油苷含量測定

參照課題組之前發(fā)表文章中的方法完成測定[12]。

2.4瑪咖烯和瑪咖酰胺含量測定

2.4.1 標(biāo)準曲線的繪制 ?用色譜級乙腈分別配制濃度為1 mg/mL N-芐基亞麻酰胺、N-芐基亞油酰胺、N-芐基十六烷酰胺、間甲氧基-N-芐基亞麻酰胺和間甲氧基-N-芐基亞油酰胺標(biāo)準母液。將5種標(biāo)準溶液按照表4混合稀釋得到5種梯度濃度的混合標(biāo)準品分析測定。

用80%的色譜級乙腈配置1 mg/mL 瑪咖烯標(biāo)準溶液,稀釋至0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、3 μg/mL,繪制標(biāo)準曲線。以間甲氧基-N-芐基亞麻酰胺、N-芐基亞麻酰胺、間甲氧基-N-芐基亞油酰胺、N-芐基亞油酰胺和N-芐基十六烷酰胺濃度為橫坐標(biāo),以峰面積(萬)為縱坐標(biāo),分別繪制標(biāo)準曲線。類似的,以瑪咖烯濃度為橫坐標(biāo),以峰面積(萬)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準曲線。

2.4.2 前處理 ?將瑪咖粉與80%乙腈按照1∶10(W/V)比例混合,100 W超聲30 min,6000 r/min離心10 min后,取上清液1 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后待測[10]。

2.4.3色譜條件 ?色譜柱WATERS C18色譜柱(5 μm,4.6 mm × 250 mm),流動相為水(A)和乙腈(B)均含0.005%三氯乙酸,洗脫梯度見表2,流速為0.6 mL/min,進樣量為10 μL,瑪咖酰胺檢測波長為210 nm,瑪咖烯檢測波長為273 nm。

2.2 統(tǒng)計學(xué)方法

采用IBM SPSS Statistics 23軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準差(x±s)表示。采用Pearson相關(guān)系數(shù)進行分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 結(jié)果

2.3.1 樣品產(chǎn)地信息及瑪咖中芥子油苷、瑪咖酰胺以及瑪咖烯的含量 ?產(chǎn)自云南和四川兩省的40個瑪咖樣品中瑪咖酰胺的含量為49.72~204.36 mg/100 g,瑪咖烯的含量為10.22~66.73 mg/100 g,芥子油苷的含量為256.56~936.65 mg/100 g,含量相差數(shù)倍。見表3。2.3.2 瑪咖品質(zhì)與海拔、品種及產(chǎn)地的相關(guān)性分析 ?Pearson相關(guān)性分析結(jié)果示,瑪咖酰胺、瑪咖烯及芥子油苷與海拔無明顯相關(guān)性(r = 0.302、0.312,P > 0.05),而瑪咖烯的含量與海拔具有一定的相關(guān)性(r = 0.333,P < 0.05)。黑色、黃色、紫色瑪咖中3種(類)主要活性成分含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。見圖1。不同產(chǎn)地瑪咖中活性成分的含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。整體來看,昆明市瑪咖的活性成分含量最低,其他地區(qū)活性成分均高于昆明市,各地瑪咖中瑪咖酰胺含量均高于昆明市,香格里拉和大理市的芥子油苷含量高于昆明市,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);各地瑪咖中瑪咖烯含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。見圖2。提示瑪咖的品質(zhì)主要受產(chǎn)地和海拔的影響,而與瑪咖的品種無關(guān)。

與昆明市瑪咖比較,*P < 0.05

3 討論

本課題組前期研究表明瑪咖鮮果采后的加工干燥方式是影響瑪咖品質(zhì)的關(guān)鍵因素,前期工作已經(jīng)建立了瑪咖中瑪咖烯,瑪咖酰胺以及芥子油苷的含量檢測方法[11-12]?,斂е械幕钚猿煞职ㄉ飰A、芥子油苷及其衍生物異硫氰酸酯、氨基酸、甾醇和多酚等。其中瑪咖酰胺、瑪咖烯以及芥子油苷是判斷瑪咖質(zhì)量的主要指標(biāo)[13-16]。有研究表明,瑪咖中的活性成分瑪咖酰胺、瑪咖烯和芥子油苷等的含量與瑪咖的產(chǎn)地,海拔以及品種有關(guān)[17-18]。可見不同產(chǎn)地的瑪咖品質(zhì)差距明顯。為了進一步明確影響瑪咖活性成分含量的其他因素,本實驗檢測了云南、四川兩省五市40個瑪咖鮮果樣本中瑪咖烯、瑪咖酰胺以及芥子油苷的含量,發(fā)現(xiàn)我國不同產(chǎn)地的瑪咖品質(zhì)差別較大。將瑪咖活性成分含量與海拔進行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn),瑪咖烯的含量與海拔具有一定的相關(guān)性(P < 0.05);對不同產(chǎn)地和品種的瑪咖中活性成分的含量進行顯著性分析,發(fā)現(xiàn)不同顏色瑪咖中活性成分的含量沒有顯著性差異,這一結(jié)果與黑色瑪咖品質(zhì)高的市場上固有觀念不符[18-19],原因考慮為產(chǎn)地與瑪咖活性成分含量有一定關(guān)系,且昆明市瑪咖中活性成分含量最低。

我國的瑪咖活性成分含量千差萬別,質(zhì)量良莠不齊[20-21]。但整體來看,瑪咖的種植海拔越高,瑪咖中活性成分的含量越高,呈現(xiàn)一定的正相關(guān)性。從種植產(chǎn)地來看,四川省和云南省其他地區(qū)瑪咖的質(zhì)量要優(yōu)于昆明市。

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(收稿日期:2019-01-02 ?本文編輯:劉永巧)

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