郭 娟，贠建民*，鄧展瑞，艾對元，張紊瑋，趙風(fēng)云

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

粉紅單端孢（Trichothecium roseum）是一種引起果蔬采后病害的致病微生物[1]，它不但會導(dǎo)致果蔬紅粉病，還會產(chǎn)生對人和動物有害的單端孢霉烯族毒素，造成食品安全問題，引起食品源頭的污染[2-4]。目前對紅粉病病害的控制方法以化學(xué)藥物控制為主，但化學(xué)藥物控制容易引起微生物抗藥性，且化學(xué)藥物對環(huán)境也存在危害或潛在危害[5]，因此，尋找化學(xué)藥物替代品也成為目前研究的一大熱點(diǎn)。

抗菌肽是一種具有生物活性的蛋白類物質(zhì)，其對微生物的抑制具有廣譜性，對真菌、細(xì)菌甚至病毒都具有抑制作用[6]，且不易產(chǎn)生耐藥性，因此有望成為化學(xué)藥物替代品，應(yīng)用潛力和價值巨大。我國對抗菌肽的研究起步較晚，而且抗菌肽生產(chǎn)成本較高，對其抑菌機(jī)理研究尚不夠深入，其在農(nóng)業(yè)生防方面應(yīng)用較少[7]。目前主要從胞內(nèi)及胞外作用兩大方面研究抗菌肽的抑菌機(jī)理[8]；例如Li Lirong等發(fā)現(xiàn)了一種能夠抑制白色念珠菌的抗菌肽，其能夠?qū)е录?xì)胞膜去極化，破壞細(xì)胞膜，然后進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，將細(xì)胞阻滯在S期，造成細(xì)胞死亡[6]；Han Jinzhi等研究了AMP-jsa9對白色念珠菌的抑菌機(jī)理，發(fā)現(xiàn)AMP-jsa9能夠破壞白色念珠菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加，跨膜運(yùn)輸受到抑制，應(yīng)激反應(yīng)下降，影響菌體新陳代謝，從而抑制菌體的生長[9]。有些抗菌肽還能夠通過抑制酶活性來達(dá)到抑菌目的；兩棲動物抗菌肽Carein1.8能夠抑制大腸桿菌的ATP酶合成達(dá)到抑菌作用[10]；副干酪乳桿菌FX-6產(chǎn)生的抗菌肽F1能夠抑制金黃色葡萄球菌的β-半乳糖苷酶的表達(dá)，同時抑制核酸的合成，從幾個方面造成細(xì)菌的死亡[11]。

本實(shí)驗(yàn)所用抗菌肽P-1是一種新型陽離子抗菌肽，由本研究組分離純化于短小芽孢桿菌HN-10（Bacillus pumilus HN-10），其氨基酸序列為GGSGGGSSGGSIGGR，分子質(zhì)量為1 149.14 Da，對粉紅單端孢具有很強(qiáng)的抑菌活性，最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）為1 μg/mL，但其抑菌機(jī)理尚不明確[12-13]。本實(shí)驗(yàn)以粉紅單端孢為靶標(biāo)菌，研究抗菌肽P-1對其細(xì)胞膜通透性、蛋白合成和核酸合成3 個方面的影響，以期闡明抗菌肽P-1對粉紅單端孢的抑菌機(jī)理，為抗菌肽P-1的應(yīng)用提供科學(xué)指導(dǎo)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

抗菌肽P-1分離純化于短小芽孢桿菌HN-10。粉紅單端孢購于中國微生物菌株保藏中心，于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基上生長及保存。

真菌蛋白提取試劑盒 上海貝博生物有限公司；Ezup柱式真菌基因組提取試劑盒 上海生工生物工程有限公司；溴化乙錠（ethidium bromide，EB）、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（4’,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）染色液 北京索萊寶科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠；SW-CJ-1FD潔凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；LRH生化培養(yǎng)箱、THZ-98A恒溫振蕩器 上海一恒科技有限公司；GelDoc XR凝膠成像系統(tǒng)照明、小型垂直電泳槽 美國Bio-Rad公司；DDS-307A電導(dǎo)率儀上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；TGL-16臺式高速冷凍離心機(jī) 湖南湘儀儀器有限公司；Nanodrop ND-2000超微量核酸蛋白測定儀 美國Thermo Scientific公司；RF-5301熒光分光光度計 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 抗菌肽P-1對粉紅單端孢細(xì)胞膜通透性的影響

1.3.1.1 大分子釋放量的測定

參照Paul等[14]的方法并稍作修改，將粉紅單端孢培養(yǎng)至對數(shù)期（24 h），用PDA液體培養(yǎng)基重懸后，在150 mL菌懸液中加入500 μL 0.9 mg/mL抗菌肽P-1，使其終質(zhì)量濃度為3 MIC（處理組），對照組加入等體積的無菌蒸餾水，于28 ℃ 120 r/min搖床培養(yǎng)，每隔2 h取10 mL菌懸液，6 000 r/min離心10 min后棄沉淀，分別測定上清液在260 nm和280 nm波長處的吸光度，每組3 次重復(fù)，數(shù)據(jù)取平均值。

1.3.1.2 電導(dǎo)率的測定

參照劉夢茵等[15]的方法，將培養(yǎng)至對數(shù)期的粉紅單端孢用新鮮PDA液體培養(yǎng)基重懸后，加入抗菌肽P-1使其質(zhì)量濃度為MIC，對照組加入等體積的無菌蒸餾水；每隔2 h取培養(yǎng)液10 mL，6 000 r/min離心10 min，棄沉淀，取上清液用電導(dǎo)率儀進(jìn)行測定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，數(shù)據(jù)取平均值。

1.3.2 抗菌肽P-1對粉紅單端孢胞內(nèi)蛋白合成的影響

1.3.2.1 對胞內(nèi)蛋白含量的影響

參照郝剛等[16]的方法并稍作修改，將粉紅單端孢培養(yǎng)至對數(shù)期后，6 000 r/min離心10 min，收集菌體并用液體PDA培養(yǎng)基重懸為1×108CFU/mL菌懸液，在150 mL菌懸液中加入500 μL 0.9 mg/mL抗菌肽P-1，使其終質(zhì)量濃度為3 MIC，對照組加入等體積無菌蒸餾水，于28 ℃培養(yǎng)，分別取培養(yǎng)2、4、6、8、10、12 h的菌懸液10 mL離心，取菌體沉淀用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗2 次。將沉淀轉(zhuǎn)移至研缽，用液氮將菌體研磨為粉末后加入500 μL預(yù)冷的20%三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）和400 μL純水，冰浴10 min后離心取沉淀。用10% TCA再次重懸取沉淀，將菌體轉(zhuǎn)移至無菌試管中，加入100 μL生理鹽水重懸，再加入5 mL考馬斯亮藍(lán)染色液，室溫放置30 min后在595 nm波長處測定吸光度，實(shí)驗(yàn)設(shè)置3 個平行，取平均值。

1.3.2.2 SDS-PAGE分析胞內(nèi)蛋白

參考陳飛龍等[11]的方法并稍作修改，將培養(yǎng)至對數(shù)期的粉紅單端孢用新鮮PDA液體培養(yǎng)基重懸后，加入抗菌肽P-1使其質(zhì)量濃度為MIC，對照組加入等體積的無菌蒸餾水，6 h后提取胞內(nèi)蛋白。粉紅單端孢胞內(nèi)蛋白的提取參照真菌蛋白提取試劑盒說明書的步驟進(jìn)行，對提取的蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分析。分離膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%，濃縮膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%；每16 μL蛋白溶液中加入4 μL蛋白上樣緩沖液（5×），沸水浴5 min，至蛋白充分變性后冷卻至室溫，吸取15 μL上樣，電壓80 V，至樣品到達(dá)分離膠邊緣時加壓至120 V，直至樣品移動至距膠底端1 cm結(jié)束，將膠板取下染色后置于凝膠成像系統(tǒng)觀察。

1.3.3 抗菌肽P-1對粉紅單端孢核酸的影響

1.3.3.1 凝膠阻滯作用分析

粉紅單端孢基因組用Ezup柱式真菌基因組提取試劑盒按照說明書操作步驟進(jìn)行提取。凝膠阻滯作用的分析參照Miao Jianyin等[17]的方法并稍作修改，基因組質(zhì)量濃度用微型分光光度計測定，使OD260nm/OD280nm≥1.9，然后進(jìn)行質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%瓊脂糖凝膠電泳分析。取5 μL粉紅單端孢基因組，分別加入5 μL不同質(zhì)量濃度（MIC、2 MIC、3 MIC、4 MIC、5 MIC）的抗菌肽P-1溶液，對照組加入5 μL無菌水，室溫放置30 min后加入2 μL上樣緩沖液，吸取10 μL上樣，電壓90 V，待樣品移動至距膠板1 cm左右時停止電泳，取下膠板置于凝膠成像系統(tǒng)觀察。

1.3.3.2 與EB競爭性結(jié)合DNA分析

參照陳旋等[18]的方法并進(jìn)行一定修改，用蒸餾水將粉紅單端孢DNA稀釋為50 μg/mL，每1 mL DNA溶液加入15 μL 100 μg/mL EB溶液。反應(yīng)液混勻后于28 ℃避光孵育10 min。加入1 mL不同質(zhì)量濃度（MIC、2 MIC、3 MIC、4 MIC）的抗菌肽P-1溶液，對照組加入等體積的無菌蒸餾水。反應(yīng)液混勻后置于生化培養(yǎng)箱中28 ℃避光孵育30 min。用熒光分光光度計掃描反應(yīng)液在550～750 nm波長范圍的熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長535 nm、發(fā)射波長550 nm）。

1.3.3.3 對粉紅單端孢體內(nèi)DNA和RNA合成的影響

參照Li Lirong等[19]的方法并稍作修改，收集對數(shù)期粉紅單端孢細(xì)胞，用PBS清洗2 遍后重懸為1.0×106CFU/mL的菌懸液。加入抗菌肽P-1溶液使其終質(zhì)量濃度為MIC，混勻后于28 ℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)，每隔2 h取樣9.85 mL，加入150 μL DAPI染色液（終質(zhì)量濃度15 μg/mL），避光振蕩10 min后用熒光分光光度計分別測定真菌DNA熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長364 nm、發(fā)射波長460 nm）和RNA熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長400 nm、發(fā)射波長460 nm）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

用Excel 2007軟件進(jìn)行平均值及標(biāo)準(zhǔn)差計算，所有數(shù)據(jù)均為3 次重復(fù)所得，用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；采用Origin 8.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽P-1對粉紅單端孢細(xì)胞膜通透性的影響

2.1.1 大分子釋放量分析

圖1 抗菌肽P-1對粉紅單端孢的大分子釋放量影響Fig. 1 Effect of antimicrobial peptide P-1 on macromolecular release from T. roseum

如圖1所示，處理組粉紅單端孢的蛋白和核酸釋放量都明顯高于對照組。其中，處理組粉紅單端孢上清液的蛋白含量在0 h時較對照組高，但二者差異不顯著（P＞0.05），這可能是抗菌肽P-1的存在所致。隨著處理時間的延長，尤其在4 h之后，二者差距逐漸增大，處理組蛋白的釋放量遠(yuǎn)高于對照組（圖1A）。處理組核酸釋放量也較對照組出現(xiàn)明顯的差異（圖1B），在4 h后上清液中的核酸含量急劇上升，并且與對照組相比差異顯著（P＜0.05）。因此可以推測，抗菌肽P-1能夠?qū)е路奂t單端孢的細(xì)胞膜損傷，使大分子物質(zhì)外泄。但關(guān)于膜損傷的原因是由抗菌肽P-1直接導(dǎo)致還是由抗菌肽P-1通過其他方式殺死細(xì)菌后膜自然裂解造成，還需進(jìn)一步探討。

2.1.2 電導(dǎo)率分析

圖2 抗菌肽P-1對粉紅單端孢電導(dǎo)率的影響Fig. 2 Effect of antimicrobial peptide P-1 on electrical conductivity of T. roseum

如圖2所示，經(jīng)過抗菌肽處理的粉紅單端孢上清液的電導(dǎo)率明顯高于對照組，并且在2 h時就已有顯著差異（P＜0.05），因此可以推斷抗菌肽P-1首先導(dǎo)致了粉紅單端孢胞內(nèi)電解質(zhì)釋放，再隨著處理時間的延長引起大分子物質(zhì)的釋放。

2.2 抗菌肽P-1對粉紅單端孢胞內(nèi)蛋白的影響

2.2.1 胞內(nèi)蛋白相對含量分析

圖3 抗菌肽P-1對粉紅單端孢胞內(nèi)蛋白相對含量的影響Fig. 3 Effect of antimicrobial peptide P-1 on intracellular protein content of T. roseum

從圖3可以看出，未加抗菌肽的對照組粉紅單端孢菌胞內(nèi)蛋白相對含量呈現(xiàn)穩(wěn)定的增長趨勢，而添加了抗菌肽P-1的粉紅單端孢胞內(nèi)蛋白相對含量在前4 h內(nèi)呈現(xiàn)增長趨勢，這可能是由于此時抗菌肽P-1進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，導(dǎo)致膜受損但尚未破裂，胞內(nèi)蛋白相對含量暫時積累所致；但是從4 h開始，處理組的胞內(nèi)蛋白相對含量急劇降低。這一方面可能是由于膜損傷導(dǎo)致蛋白外流；另一方面可能是由于菌體的蛋白合成受到了抑制。

2.2.2 胞內(nèi)蛋白的SDS-PAGE分析

如圖4所示，SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)對照組的胞內(nèi)蛋白條帶完整、清晰，而處理組的胞內(nèi)蛋白出現(xiàn)缺失，并且缺失的部分為分子質(zhì)量在43.0～97.4 kDa之間的蛋白。因此可以判斷，抗菌肽P-1抑制了粉紅單端孢的胞內(nèi)蛋白合成，使菌體生長受阻，進(jìn)而導(dǎo)致菌體死亡。

圖4 SDS-PAGE分析抗菌肽P-1對粉紅單端孢胞內(nèi)蛋白的影響Fig. 4 SDS-PAGE analysis of the effect of antimicrobial peptide P-1 on intracellular proteins of T. roseum

2.3 抗菌肽P-1對粉紅單端孢核酸的影響

2.3.1 凝膠阻滯作用分析

圖5 不同質(zhì)量濃度抗菌肽P-1對粉紅單端孢的DNA凝膠阻滯作用Fig. 5 DNA gel retardation of T. roseum did not occur in the presence of antimicrobial peptide P-1 at different concentrations

從圖5可以看出，不同質(zhì)量濃度抗菌肽P-1對粉紅單端孢DNA都沒有明顯的阻滯作用，但對照組和處理組DNA條帶的灰度出現(xiàn)明顯差異。對照組的粉紅單端孢DNA條帶清晰，而處理組的DNA條帶明顯變淡，并且這種作用在MIC時就已經(jīng)出現(xiàn)。這可能是由于抗菌肽P-1與粉紅單端孢DNA存在某種相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明抗菌肽P-1雖對粉紅單端孢DNA沒有凝膠阻滯作用，但其也對DNA造成一定的影響，進(jìn)而會影響到蛋白的表達(dá)。

2.3.2 抗菌肽P-1與EB競爭性結(jié)合DNA分析

圖6 抗菌肽P-1與EB競爭性結(jié)合粉紅單端孢DNAFig. 6 Competitive binding of antimicrobial peptide P-1 with EB to DNA of T. roseum

EB是一種可以和DNA結(jié)合的熒光染料，其單獨(dú)存在時熒光強(qiáng)度很弱，當(dāng)其與DNA鑲嵌結(jié)合時熒光強(qiáng)度增強(qiáng)[19]；當(dāng)有抗菌肽和DNA結(jié)合時，與DNA結(jié)合的EB會被競爭下來，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低。圖6結(jié)果顯示，未加抗菌肽的粉紅單端孢DNA的熒光強(qiáng)度明顯高于處理組，并且熒光強(qiáng)度隨著抗菌肽質(zhì)量濃度的增加而下降，說明抗菌肽P-1能夠和EB競爭性結(jié)合粉紅單端孢DNA，使粉紅單端孢的基因功能受到影響，從而抑制粉紅單端孢的生長。

2.3.3 抗菌肽P-1對粉紅單端孢體內(nèi)DNA和RNA合成的影響

圖7 抗菌肽P-1對粉紅單端孢胞內(nèi)DNA（A）和RNA（B）相對含量的影響Fig. 7 Effect of antimicrobial peptide P-1 on DNA (A) and RNA (B)contents of T. roseum

從圖7中可以觀察出，粉紅單端孢體內(nèi)DNA和RNA相對含量都是對照組明顯高于處理組，隨著時間延長，差異越來越明顯。經(jīng)抗菌肽P-1處理10 h后，與對照組相比，處理組DNA相對含量降低46%，RNA相對含量降低43%。由于DNA與RNA相對含量下降幅度接近，因此推測抗菌肽P-1可能只影響DNA的合成，由于DNA的減少，RNA相對含量才降低；但也可能是抗菌肽P-1對DNA和RNA都有抑制作用，這還需進(jìn)一步探討?？偟貋碚f，抗菌肽P-1能夠抑制粉紅單端孢核酸的合成。

3 討 論

抗菌肽種類繁多、來源廣泛、毒性低且不易產(chǎn)生耐藥性，但其抑菌機(jī)理還不夠明確[20]。目前對抗菌肽抑菌機(jī)理的研究主要集中在其對細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的作用機(jī)理以及對蛋白和核酸合成的影響方面，但仍未形成統(tǒng)一的結(jié)論，僅在作用靶點(diǎn)是細(xì)胞膜這方面有較多的研究。申玲[21]發(fā)現(xiàn)抗菌肽MAP28可以破壞白色念珠菌的細(xì)胞膜，使之形成孔洞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物外流，從而發(fā)揮抑菌作用。這是由于抗菌肽具有陽離子性，它能夠和細(xì)胞膜靜電結(jié)合而破壞膜結(jié)構(gòu)，造成微生物的死亡。陳剛等[22]研究了由蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生的環(huán)狀抗菌肽APS對多種真菌的抑菌機(jī)理，通過構(gòu)建脂質(zhì)體模型，發(fā)現(xiàn)它破壞了膜完整性，在膜上形成電流通道，使膜出現(xiàn)孔洞，因而造成內(nèi)容物外泄而致使細(xì)胞死亡。

抗菌肽最先接觸到的是菌體細(xì)胞壁，細(xì)胞壁能維持菌體形狀，是菌體的第1道屏障，細(xì)胞壁一旦受到破壞，菌體也就受到了抑制，有些抗菌肽就是通過這種機(jī)制來發(fā)揮抑菌作用的[23]。當(dāng)抗菌肽透過細(xì)胞壁這道屏障后接觸到細(xì)胞膜，氨基酸殘基能夠在靜電作用下與磷脂雙分子層結(jié)合，使得抗菌肽的疏水端插入膜上的疏水區(qū)而改變膜的結(jié)構(gòu)，形成離子孔道，從而造成內(nèi)容物外泄，導(dǎo)致細(xì)胞受損，達(dá)到抑菌目的[24]。還有的抗菌肽能夠抑制菌體菌絲的萌發(fā)而造成菌體死亡。彭兵等[25]研究了枯草芽孢桿菌分泌的抗真菌肽FV對玉米小班病菌的抑菌機(jī)理，發(fā)現(xiàn)它抑制了菌體的孢子萌發(fā)，使菌絲變形，菌體表面變粗糙并出現(xiàn)褶皺，從而抑制了菌體的生長。

壁膜作用機(jī)制是抗菌肽最基礎(chǔ)的抑菌機(jī)理，其還可侵入細(xì)胞內(nèi)部發(fā)揮抑菌作用，關(guān)于抗菌肽對核酸作用機(jī)制的研究也較多。Sharma等發(fā)現(xiàn)人中性粒細(xì)胞肽HNP-1對結(jié)核分枝桿菌的抑菌作用除了破壞細(xì)胞膜外，還可以抑制DNA的生物合成，其能夠和DNA結(jié)合，將DNA作為其二級靶點(diǎn)來發(fā)揮作用[26]。

基于以上研究，本實(shí)驗(yàn)通過測定菌懸液的電導(dǎo)率和大分子釋放量來確定細(xì)胞膜通透性的變化，在抗菌肽P-1處理粉紅單端孢2 h后電解質(zhì)已經(jīng)開始釋放，蛋白和核酸外泄，證明P-1破壞了菌體細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致膜破裂，電解質(zhì)物質(zhì)和大分子物質(zhì)外流，這可能是抗菌肽P-1對粉紅單端孢的抑菌機(jī)制之一。本研究進(jìn)一步通過測定經(jīng)抗菌肽P-1作用后粉紅單端孢菌體胞內(nèi)蛋白的含量以分析抗菌肽P-1是否抑制了蛋白的合成。結(jié)果表明，在抗菌肽P-1處理4 h之后，菌體內(nèi)蛋白含量明顯下降，到6 h時差異顯著，因此選擇作用6 h后的菌體進(jìn)行蛋白的提取，并進(jìn)行SDS-PAGE分析，結(jié)果顯示粉紅單端孢在被抗菌肽P-1處理后部分蛋白條帶出現(xiàn)缺失，說明蛋白的合成受到了抑制。

本研究從凝膠阻滯作用、競爭性結(jié)合及核酸相對含量變化3 個方面闡述抗菌肽P-1對粉紅單端孢核酸的抑菌機(jī)理。結(jié)果表明，抗菌肽P-1雖未對粉紅單端孢DNA有明顯的凝膠阻滯作用，但能夠影響粉紅單端孢的體外DNA，造成DNA活性降低甚至降解DNA，使DNA在瓊脂糖凝膠上的條帶模糊；競爭性實(shí)驗(yàn)說明抗菌肽P-1和EB競爭性結(jié)合DNA，但熒光強(qiáng)度下降較緩慢，這可能是由于抗菌肽P-1只是部分和EB競爭性結(jié)合粉紅單端孢DNA來發(fā)揮抑菌作用。綜上所述，抗菌肽P-1對粉紅單端孢的抑菌機(jī)理應(yīng)該是多方面的，其對核酸的影響也只是其中之一。

目前已報道的抗菌肽大多是抗細(xì)菌肽，抗真菌肽還較少，對于抗細(xì)菌肽抑菌機(jī)理的研究也較抗真菌肽更為全面。由于不同細(xì)菌和真菌的細(xì)胞壁膜組成和結(jié)構(gòu)存在差異，抗菌肽對真菌和細(xì)菌的抑菌作用機(jī)理也不可能完全相同[27]，因而研究抗真菌肽的抑菌機(jī)理更顯迫切。

4 結(jié) 論

本研究從Bacillus pumilus HN-10抗菌肽P-1對粉紅單端孢的壁膜通透性、蛋白合成及對核酸合成的影響3 個方面著手，研究了其抑菌機(jī)理。結(jié)果表明，抗菌肽P-1增加了粉紅單端孢的細(xì)胞膜通透性，可引起細(xì)胞壁膜的損傷及胞內(nèi)電解質(zhì)和大分子物質(zhì)的釋放；抗菌肽P-1抑制了粉紅單端孢的蛋白合成，尤其對分子質(zhì)量在43.0～97.4 kDa之間的蛋白抑制作用明顯；而且抗菌肽P-1對粉紅單端孢DNA存在一定的影響，可以和EB競爭性結(jié)合DNA，抑制了粉紅單端孢的DNA和RNA合成。基于本研究結(jié)果，可以得出抗菌肽P-1對粉紅單端孢的抑菌作用是影響其壁膜通透性、抑制蛋白和核酸的合成共同作用的結(jié)果。