田文超　馬洪　劉賢賢　鄭步峰　傅廷亮

[摘要]目的 探討新生鼠腎積水病腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）、內(nèi)皮素-1（ET-1）蛋白水平表達(dá)變化的意義。方法 選取新生48 h內(nèi)的Wistar鼠72只，隨機(jī)分為6組，每組12只，隨機(jī)選擇1組作為對(duì)照組，其余5組均制作成輸尿管左側(cè)部分梗阻的動(dòng)物模型。通過(guò)HE染色法觀察病腎組織的病理結(jié)構(gòu)變化并對(duì)病腎組織做出相應(yīng)的病理學(xué)分級(jí);通過(guò)免疫組化SP法檢測(cè)新生鼠的腎臟組織中TGF-β1、MCP-1、IGF-1、ET-1的蛋白水平表達(dá)情況。結(jié)果 在梗阻解除后12周，模型組中TGF-β1的蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;模型組的ET-1、MCP-l蛋白表達(dá)量（6.20±1.16，3.34±0.06）高于對(duì)照組（2.27±0.73，0.71±0.25），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型組的IGF-1蛋白表達(dá)量（18.12±1.08）低于對(duì)照組（28.38±4.82），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組各病理學(xué)分級(jí)（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)）新生鼠的TGF-β1蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組Ⅱ級(jí)新生鼠的ET-1、MCP-1蛋白表達(dá)量與Ⅰ級(jí)的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Ⅲ、Ⅳ級(jí)的ET-1、MCP-1蛋白表達(dá)量高于Ⅱ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量低于Ⅰ級(jí)，模型組Ⅳ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量低于Ⅲ級(jí)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），模型組Ⅱ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量與Ⅲ級(jí)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1的蛋白表達(dá)量在梗阻解除后的不同時(shí)間點(diǎn)比較：梗阻解除后6、8、12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達(dá)量均低于梗阻解除后2周，IGF-1蛋白表達(dá)量高于梗阻解除后2周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組中梗阻解除后2周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達(dá)量與梗阻解除后0周比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。模型組中梗阻解除后8周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達(dá)量與梗阻解除后6周比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。梗阻解除后12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達(dá)量均低于梗阻解除后8周，IGF-1蛋白表達(dá)量高于梗阻解除后8周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。TGF-β1的蛋白表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)均成正相關(guān)關(guān)系（r=0.873，P<0.01）;ET-1、MCP-1的蛋白表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)均成正相關(guān)關(guān)系（r=0.579、0.637，P<0.05）;IGF-1的蛋白表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)無(wú)明顯的相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 病腎組織的組織病理學(xué)改變隨梗阻解除時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸恢復(fù)。TGF-β1的蛋白水平表達(dá)隨梗阻病理學(xué)分級(jí)的增加而增加，隨梗阻解除的時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸下降。TGF-β1可作為新生鼠腎積水病腎的損害程度及恢復(fù)情況判定的可靠指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]新生鼠;腎積水;蛋白水平

[中圖分類號(hào)] R693 ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）9（b）-0015-06

Significance of expression changes of transforming growth factor β1， monocyte chemoattractant protein-1， insulin-like growth factor-1， endothelin-1 proteins in renal tissues of neonatal rats with hydronephrosis

TIAN Wen-chao1? ?MA Hong2? ?LIU Xian-xian3? ?ZHENG Bu-feng1? ?FU Ting-liang1

1. Department of Pediatric Surgery， Affiliated Hospital of Binzhou Medical College， Shandong Province， Binzhou? ?256603， China; 2. Department of Pediatric Surgery， Affiliated Hospital of Zunyi Medical College， Guizhou Province， Zunyi? ?563003， China; 3. Department of Infectious Diseases， Affiliated Hospital of Binzhou Medical College， Shandong Province，? Binzhou? ?256603， China

[Abstract] Objective To investigate the significance of changes in the expression of transforming growth factor β1 （TGF-β1）， monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1）， insulin-like growth factor-1 （IGF-1） and endothelin-1 （ET-1） proteins in renal tissue of neonatal rat hydronephrosis. Methods A total of 72 Wistar rats within 48 h of newborn were selected and randomly divided into 6 groups with 12 rats in each group. One group was randomly selected as the control group， the other 5 groups were all made into animal models of partial obstruction of the left ureter. The structural changes of the diseased kidney tissues were observed by HE staining and the pathological grades of the diseased kidney tissues were made accordingly. The expression of TGF-β1， MCP-1， IGF-1 and ET-1 in kidney tissue of Wistar rats were detected by immunohistochemical SP method. Results At 12 weeks after the obstruction was relieved， the protein expression of TGF-β1 in the model group was not significantly different from that in the control group （P>0.05）. The expression of ET-1 and MCP-l protein in the model group （6.20±1.16， 3.34±0.06） were higher than those in the control group （2.27±0.73， 0.71±0.25）， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of IGF-1 protein in model group （18.12±1.08） was lower than that in control group （28.38±4.82）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Compared with the expression of TGF-β1 protein in all pathological grades （grade Ⅰ， Ⅱ， Ⅲ， Ⅳ） in the model group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of ET-1 and MCP-1 protein in model group Ⅱ newborn mices were not significantly different from those in model group Ⅰ （P>0.05）. The expression of ET-1 and MCP-1 protein in model group Ⅲ and Ⅳ were significantly higher than those in model group Ⅱ， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of IGF-1 protein in model group Ⅱ， Ⅲ and Ⅳ newborn mices were lower than those in grade Ⅰ， while the expression of IGF-1 protein in model group Ⅳ newborn mices were lower than that in grade Ⅲ， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of IGF-1 protein in model group Ⅱ newborn mices had no significant difference compared with grade Ⅲ （P>0.05）. Comparison of protein expressions about TGF-β1， MCP-l， ET-1 and IGF-1 at different time points after obstruction were relieved. The expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1 protein in the model group were lower than 2 weeks after the obstruction were relieved， and the expression of IGF-1 protein was higher than 2 weeks after the obstruction were relieved， the differences were statistically significant （P<0.05）. In the model group， the expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1， IGF-1 protein at 2 weeks after obstruction were relieved were not significantly different from that at 0 weeks after obstruction were relieved （P>0.05）. The expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1， IGF-1 protein in the model group at 8 weeks after obstruction were relieved were not significantly different from those at 6 weeks after obstruction were relieved （P>0.05）. The expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1 protein in model group were lower than those in 8 weeks after obstruction were relieved， and the expression of IGF-1 protein was higher than that in 8 weeks after obstruction were relieved， the differences were statistically significant （P<0.05）. The protein expression of TGF-β1 was positively correlated with pathological grade （r=0.873， P<0.01）. The protein expressions of ET-1 and MCP-1 were positively correlated with pathological grade （r=0.579， 0.637， P<0.05）. There was no significant correlation between IGF-1 protein expression and pathological grade （P>0.05）. Conclusion Histopathological changes of diseased kidney tissue gradually recover with the extension of obstruction relieving time. The expression of TGF-β1 protein level increases with the increase of pathological grade of obstruction， and gradually decreases with the extension of time to relieve obstruction. TGF-β1 can be used as a reliable index to judge the degree of renal damage and recovery of hydronephrosis in newborn rats.

[Key words] Newborn rat; Hydronephrosis; Protein level

先天性腎積水是小兒泌尿外科的常見(jiàn)疾患，新生兒的發(fā)病率為1%～2%，最常見(jiàn)的病因是腎盂輸尿管連接部梗阻，可導(dǎo)致患腎發(fā)生復(fù)雜的病理生理變化[1]。腎盂與輸尿管上段連接處呈漏斗狀，腎盂收縮時(shí)輸尿管上段擴(kuò)張，尿液從腎盂排向輸尿管。如果腎盂輸尿管連接處存在梗阻，妨礙了尿液順利地排入輸尿管，導(dǎo)致集合系統(tǒng)張力增加，從而引發(fā)腎積水。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)先天性腎積水做了大量的實(shí)驗(yàn)研究，但先天性腎積水的具體發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，尤其是對(duì)如何確定積水腎臟的功能是否存在進(jìn)行性損害仍缺乏簡(jiǎn)單有效的方法[2]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床及實(shí)驗(yàn)研究，已發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）以及血管活性多肽如內(nèi)皮素-1（ET-1）等不同程度地參與了先天性腎積水的發(fā)生機(jī)制，但它們能否用于檢測(cè)病腎的損害程度，鮮有報(bào)導(dǎo)。因此，本研究選取新生48 h內(nèi)的Wistar鼠制成輸尿管左側(cè)部分梗阻的動(dòng)物模型，通過(guò)HE染色法觀察病腎組織的結(jié)構(gòu)變化，以及通過(guò)免疫組化SP法分別檢測(cè)在梗阻期間及梗阻解除后的病腎組織中TGF-β1、MCP-1、IGF-1、ET-1的蛋白水平表達(dá)情況，旨在探尋一種評(píng)定先天性腎積水病腎損害程度的理想指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器

SPF級(jí)的Wistar孕鼠10只[重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，許可證號(hào)：SCXK（渝）20070006]，體重（300±50）g，采用上述孕鼠所產(chǎn)48 h內(nèi)新生鼠，建立動(dòng)物模型[3];SP-9001免疫組化染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）;TGF-β1-Rabbit Anti、IGF-1-Rabbit Anti（Santa Cruz Biotechnology，Inc）;MCP-1兔抗大鼠多克隆抗體、ET-1兔抗大鼠多克隆抗體（武漢博士德生物有限公司）;RM2135型石蠟切片機(jī)、光學(xué)顯微鏡、Leica Qwin V3型細(xì)胞圖像分析儀（均產(chǎn)自德國(guó)Leica公司）。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組及標(biāo)本制備? 選取72只新生48 h內(nèi)的Wistar鼠，將其隨機(jī)分為6組，每組12只。隨機(jī)選擇1組作為對(duì)照組，對(duì)照組僅行假手術(shù)（切開(kāi)腹腔，顯露左側(cè)輸尿管后關(guān)閉切口）;其余5組均用腰大肌壓迫法制成輸尿管左側(cè)部分梗阻模型，然后再隨機(jī)分為5組作為模型組。隨機(jī)選取1組于造模后3周采集病腎組織并處死;其余4組再次行手術(shù)解除梗阻，分別于梗阻解除后2、6、8、12周隨機(jī)選取1組采集病腎組織并處死。將切取的腎臟組織進(jìn)行處理分別行病理學(xué)及免疫組織化學(xué)分析。其中，模型組術(shù)中死亡5例，術(shù)后死亡4例，存活51例，對(duì)照組全部存活。

病腎的組織學(xué)改變按Elder[4]法分級(jí)。腎臟Elder病理學(xué)分級(jí)，具體包括，Ⅰ級(jí)：正常腎臟;Ⅱ級(jí)：輕度梗阻性腎病，病變僅限于腎小囊腔輕度擴(kuò)張、集合管輕度間質(zhì)纖維化和腎皮質(zhì)慢性炎癥;Ⅲ級(jí)：中度梗阻性腎病，病變?cè)冖蚣?jí)基礎(chǔ)上加上腎小球改變，包括球樣硬化，異常腎小球達(dá)25%，腎皮質(zhì)變薄，腎小球數(shù)量減少，中度間質(zhì)性纖維化和炎癥反應(yīng);Ⅳ級(jí)：重度梗阻性腎病，在Ⅲ級(jí)基礎(chǔ)上合并顯著的區(qū)域性腎小球表面硬化，異常腎小球超過(guò)25%，腎小囊消失;Ⅴ級(jí)：重度梗阻性腎病伴囊下微小囊生成，腎小管、腎小球顯著病變，間質(zhì)纖維化嚴(yán)重，并出現(xiàn)慢性間質(zhì)性炎癥。

1.2.2免疫組化SP法檢測(cè)蛋白水平? 將石臘塊經(jīng)切片、脫蠟、水化和抗原修復(fù)，按免疫組織化學(xué)染色SP法步驟操作，分別進(jìn)行TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1的蛋白檢測(cè)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片處理。陽(yáng)性對(duì)照片為試劑公司提供，陰性對(duì)照片為以PBS代替一抗所制成的片。顯微鏡下觀察，以胞漿或細(xì)胞間質(zhì)點(diǎn)狀或片狀棕黃色顆粒為陽(yáng)性結(jié)果，在每張切片隨機(jī)選取10個(gè)互不交叉重疊的高倍鏡視野（400×），經(jīng)Leica Qwin V3型細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)計(jì)算陽(yáng)性信號(hào)的光密度值作為其表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分析，最后計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);不符合正態(tài)分布者經(jīng)過(guò)變量轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布后行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;病理學(xué)分級(jí)與病腎組織TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1的光密度值采用Spearman秩相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果

Wistar鼠積水腎臟可見(jiàn)腎小球和腎小管數(shù)目減少，腎小管管腔擴(kuò)張明顯，上皮細(xì)胞萎縮（圖1，見(jiàn)封三）。

2.2免疫組化檢測(cè)結(jié)果

對(duì)照組Wistar鼠的腎臟組織中，TGF-β1、MCP-l、ET-1的蛋白呈弱陽(yáng)性表達(dá)，棕色顆粒彌散大多分布于近曲小管的細(xì)胞胞漿內(nèi)，在腎小球內(nèi)呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)（圖2A、B、C，見(jiàn)封三）。對(duì)照組腎小管內(nèi)的IGF-1蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，棕色顆粒彌散大多分布于近曲小管、極少數(shù)分布于遠(yuǎn)曲小管的細(xì)胞胞漿內(nèi)、在腎小球內(nèi)未見(jiàn)表達(dá)（圖2D，見(jiàn)封三）。模型組腎小管TGF-β1、MCP-l、ET-1的蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖3A、B、C見(jiàn)封四）。模型組腎小管內(nèi)的IGF-1蛋白呈弱陽(yáng)性表達(dá)（圖3D，見(jiàn)封四）。

隨著梗阻解除時(shí)間的延長(zhǎng)，TGF-β1、MCP-l、ET-1、ET-1的蛋白表達(dá)逐漸減弱，其中，TGF-β1在梗阻解除后12周的蛋白表達(dá)趨于正常水平，而MCP-1及ET-1的蛋白表達(dá)仍稍強(qiáng)于對(duì)照組，IGF-1蛋白在對(duì)照組中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，棕色顆粒大多分布于近曲小管以及少數(shù)的遠(yuǎn)曲小管的細(xì)胞胞漿內(nèi)，IGF-1蛋白在模型組中則呈弱陽(yáng)性表達(dá)，且隨梗阻解除的時(shí)間延長(zhǎng)，IGF-1蛋白的表達(dá)逐漸增強(qiáng)（圖4 A、B、C、D，見(jiàn)封四）。

梗阻解除后0、2、6、8周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達(dá)量均高于對(duì)照組，IGF-1蛋白表達(dá)量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;在梗阻解除后12周，模型組中的TGF-β1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;在梗阻解除后12周，模型組中的MCP-l、ET-1蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;在梗阻解除后12周，模型組中的IGF-1蛋白表達(dá)量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。TGF-β1、MCP-1、ET-1的蛋白表達(dá)水平隨梗阻解除時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，IGF-1的蛋白表達(dá)水平隨梗阻解除時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高。TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1的蛋白表達(dá)量在模型組梗阻解除后的不同時(shí)間點(diǎn)比較：梗阻解除后6、8、12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達(dá)量均低于梗阻解除后2周，IGF-1蛋白表達(dá)量高于梗阻解除后2周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組中梗阻解除后2周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達(dá)量與梗阻解除后0周比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。模型組中梗阻解除后8周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達(dá)量與梗阻解除后6周比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。梗阻解除后12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達(dá)量均低于梗阻解除后8周，IGF-1蛋白表達(dá)量高于梗阻解除后8周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

模型組新生鼠TGF-β1、MCP-1、ET-1的蛋白表達(dá)量隨病理學(xué)分級(jí)的增加而逐漸升高，IGF-1的蛋白表達(dá)量隨病理學(xué)分級(jí)的增加而逐漸降低。模型組各病理學(xué)分級(jí)（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)）新生鼠的TGF-β1蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組Ⅱ級(jí)新生鼠的ET-1、MCP-1蛋白表達(dá)量與Ⅰ級(jí)的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Ⅲ、Ⅳ級(jí)的ET-1、MCP-1蛋白表達(dá)量高于Ⅱ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量低于Ⅰ級(jí)，模型組Ⅳ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量低于Ⅲ級(jí)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型組Ⅱ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量與Ⅲ級(jí)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

2.3病腎組織TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1蛋白表達(dá)量與病理學(xué)檢測(cè)的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果提示，TGF-β1的蛋白表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)均成正相關(guān)關(guān)系（r=0.873，P<0.01）;ET-1、MCP-1的蛋白表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)均成正相關(guān)關(guān)系（r=0.579、0.637，P<0.05）;IGF-1的蛋白表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)無(wú)明顯的相關(guān)性（P>0.05）。

3討論

腎盂輸尿管交界處狹窄是先天性腎積水的主要病因。輸尿管梗阻后尿液排出受阻，腎盂腎盞被動(dòng)擴(kuò)張，腎間質(zhì)水腫，從而引發(fā)局灶性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎間質(zhì)纖維化，最終可導(dǎo)致腎臟萎縮、喪失功能。目前，彩超、病理學(xué)分級(jí)、ECT等是評(píng)估小兒腎積水病腎損害情況的常見(jiàn)方法，但各有其局限性。因此，探尋出一種能準(zhǔn)確反映積水腎臟功能的標(biāo)志物顯得尤為重要。分子生物學(xué)技術(shù)在腎積水發(fā)生機(jī)制研究領(lǐng)域的應(yīng)用日益增多，為該標(biāo)志物的探尋提供了條件。

TGF-β1是TGF-β超家族的創(chuàng)始成員，包括活性成分、可生長(zhǎng)因子、可分化因子等，能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的生成和聚集。哺乳動(dòng)物中普遍存在TGF-β1-3，不同種屬來(lái)源的TGF-β1具有高度同源性，但具有生物活性的僅有二聚體形式的TGF-β1。TGF-β1的免疫調(diào)節(jié)與促纖維化作用是近些年來(lái)的研究熱點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已有大量報(bào)導(dǎo)。TGF-β1可促使腎臟蛋白酶抑制因子的生成，從而促進(jìn)腎小球的硬化、腎間質(zhì)的纖維化[5]。另有研究發(fā)現(xiàn)[6]，在腎積水病腎間質(zhì)中的TGF-β1 mRNA表達(dá)明顯增高，而在正常對(duì)照組的腎臟組織中則為低表達(dá)或陰性。眾所周知，病理學(xué)檢測(cè)是反應(yīng)腎臟損害程度的客觀依據(jù)。因此，本研究以形態(tài)學(xué)分級(jí)為基礎(chǔ)，對(duì)新生鼠腎積水病腎組織中的TGF-β1蛋白表達(dá)量進(jìn)行研究，以便證明TGF-β1蛋白表達(dá)量能夠反映病腎的損害程度。有學(xué)者報(bào)導(dǎo)[7]，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，可檢測(cè)到正常人腎臟的系膜、腎小管及腎小球基底膜的TGF-β1蛋白陽(yáng)性表達(dá)。而另有研究表明[8]，在正常人腎小管中未檢測(cè)到TGF-β1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)，在腎小球球囊、系膜及內(nèi)皮細(xì)胞可發(fā)現(xiàn)TGF-β1蛋白的弱陽(yáng)性表達(dá)。本研究結(jié)果提示，在新生鼠積水腎臟內(nèi)，TGF-β1的陽(yáng)性表達(dá)主要位于近曲小管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，而在腎小球及腎間質(zhì)內(nèi)未發(fā)現(xiàn)。TGF-β1的蛋白表達(dá)量隨輸尿管梗阻解除時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，梗阻解除后12周，其表達(dá)量已降至正常。同時(shí)，病腎組織中的TGF-β1蛋白表達(dá)量與病理檢查分級(jí)成正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=0.873，P<0.01），提示病腎組織中TGF-β1的蛋白表達(dá)可用于病腎恢復(fù)情況的判定。

MCP-1是一種在腎損傷和炎癥部位表達(dá)的特異性區(qū)化因子，在腎小球腎炎、腎小管間質(zhì)性病變的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用，并能夠通過(guò)多種途徑導(dǎo)致病腎不同程度的損害[9]。有研究表明[10]，腎積水病腎組織內(nèi)充滿了大量具有免疫活性的單核-巨噬細(xì)胞，通過(guò)特異性趨化因子MCP-1而被激活，腎小管上皮細(xì)胞可大量分泌MCP-1，成為其主要來(lái)源的細(xì)胞之一[11]。腎臟疾病中MCP-1的蛋白表達(dá)量的升高能增強(qiáng)多種細(xì)胞因子和黏附分子的表達(dá)與合成，誘導(dǎo)炎性介質(zhì)釋放（如NF-α、IL-1等）導(dǎo)致腎間質(zhì)損傷。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，MCP-1可作為一種重要的炎癥介質(zhì)參與腎積水的發(fā)生機(jī)制，MCP-1及其受體可能通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞而起到關(guān)鍵性作用，且與病腎損害程度明顯相關(guān)[12]。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)新生鼠積水腎臟組織中MCP-1的蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，病腎組織MCP-1的蛋白表達(dá)僅能部分反映病腎的損害及恢復(fù)程度，提示MCP-1可能參與了腎積水的發(fā)病。目前，關(guān)于MCP-1是如何參與先天性腎積水病腎損害的機(jī)制尚不十分清楚，但以此為依據(jù)，將為腎積水的發(fā)病機(jī)制研究提供新的思路。

ET主要有A型（ETA）和B型（ETB）兩種受體。ET-1主要由心血管組織合成，腦和腎臟也可產(chǎn)生ET-1，其中，腎小球毛細(xì)血管叢集合系統(tǒng)是腎臟合成ET-1的主要部位。因此，ET-1與腎臟疾病的發(fā)生有密切關(guān)系[13]。腎臟的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞均能合成內(nèi)皮素，內(nèi)皮素是目前已知的體內(nèi)收縮血管作用最強(qiáng)和最持久的縮血管物質(zhì)[14]。ET-1可使腎動(dòng)脈收縮，減少腎小球?yàn)V過(guò)面積，使腎小球?yàn)V過(guò)率及腎血流量降低。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，ET-1在許多腎臟疾病中呈高表達(dá)，大鼠一側(cè)輸尿管完全梗阻后，隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，梗阻側(cè)腎盂尿中ET-1的蛋白含量較對(duì)側(cè)增加1/2至數(shù)倍，而梗阻側(cè)腎臟組織ET-1的含量較對(duì)照組亦顯著增加[15]。梗阻性腎積水動(dòng)物模型證實(shí)，ET-1在腎靜脈血流中的表達(dá)較腎動(dòng)脈血流中高，而生理狀態(tài)下ET-1的濃度極低，提示升高的ET-1是由腎臟產(chǎn)生的[16]。由此可見(jiàn)，腎臟本身就存在ET系統(tǒng)，很多腎臟病的病理生理過(guò)程是由腎臟局部的ET介導(dǎo)。馬洪等[17]研究證明了腎積水患兒的病腎尿ET-1蛋白水平升高，提示腎盂尿ET-1可反映病腎的損害。因此，本研究應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)了腎積水病腎組織的ET-1蛋白表達(dá)情況。研究結(jié)果提示，病腎組織中ET-1的蛋白表達(dá)隨病理學(xué)分級(jí)的增加而升高，但Ⅰ、Ⅱ級(jí)的ET-1蛋白表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Ⅲ、Ⅳ級(jí)的ET-1蛋白表達(dá)量高于Ⅱ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示ET-l的蛋白表達(dá)情況僅能反映部分病腎的損害程度。該研究結(jié)果與Grosjean等[18]的研究結(jié)果相一致。

IGF是一種與胰島素結(jié)構(gòu)類似的廣譜促生長(zhǎng)因子，包括IGF-1和IGF-2。IGF-1是由70個(gè)氨基酸構(gòu)成的單鏈多肽，主要由肝臟合成，幾乎存在于哺乳動(dòng)物的所有組織中，是人體重要的生長(zhǎng)因子和促有絲分裂原，對(duì)正常新陳代謝的維持起著非常重要的作用。腎小管及腎小球中均有IGF-1的蛋白受體表達(dá)，IGF-1的蛋白表達(dá)與功能紊亂、腎間質(zhì)纖維化關(guān)系密切[19]。研究[20]發(fā)現(xiàn)，IGF-1參與了腎單位損傷的康復(fù)過(guò)程，在慢性腎衰竭的治療中可加快腎臟的功能恢復(fù)。另有學(xué)者研究[21]發(fā)現(xiàn)，IGF-1通過(guò)提高腎血流量和腎小球?yàn)V過(guò)率來(lái)上調(diào)腎單位的血流動(dòng)力學(xué)，從而減輕積水腎臟的腎小管囊性變及腎盞擴(kuò)張，最終緩解腎臟纖維化。本研究結(jié)果提示，模型組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量低于Ⅰ級(jí)，模型組Ⅳ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量低于Ⅲ級(jí)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型組Ⅱ級(jí)新生鼠的IGF-1蛋白表達(dá)量與Ⅲ級(jí)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。腎積水病腎組織中IGF-1的蛋白表達(dá)量較假手術(shù)組降低，且隨病理學(xué)分級(jí)的增加而降低，提示IGF-1可能參與了腎積水的發(fā)病機(jī)制，病腎組織IGF-1的蛋白表達(dá)情況不能完全反映病腎的損害程度，IGF-1尚不能作為病腎功能檢測(cè)的理想指標(biāo)。

綜上所述，本研究通過(guò)建立新生鼠腎積水動(dòng)物模型，檢測(cè)不同時(shí)期病腎組織各指標(biāo)的蛋白表達(dá)情況，并與病理學(xué)分級(jí)做相關(guān)性分析。提示，TGF-β1的蛋白表達(dá)情況可用于判定新生鼠腎積水病腎的損害程度以及恢復(fù)情況。但是，盡管本實(shí)驗(yàn)成功地采用新生鼠建立了梗阻性腎積水動(dòng)物模型，在一定程度上模擬了人類腎積水的發(fā)病過(guò)程，但是，人的腎積水發(fā)病是一個(gè)極為復(fù)雜、漫長(zhǎng)的慢性腎功能損害過(guò)程，上述指標(biāo)檢測(cè)能否應(yīng)用于臨床，還需要深入的研究。

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（收稿日期：2019-02-12? ?本文編輯：孟慶卿）