程宇

（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，浙江 杭州 310008）

0 引言

乳腺癌是一種較為常見的乳腺疾病，據(jù)相關(guān)研究表明：乳腺癌的發(fā)病率約占女性惡性腫瘤總數(shù)的10 %，該疾病的發(fā)病因與遺傳、年齡有關(guān)，好發(fā)于婦女絕經(jīng)期前后，該疾病也會發(fā)于男性患者，但數(shù)量較少，約占乳腺癌總數(shù)的1 %。該疾病不僅嚴(yán)重影響患者的心理健康，更威脅了患者的生命健康安全[1]。乳腺癌腋窩淋巴轉(zhuǎn)移是乳腺癌中較為重要的獨(dú)立預(yù)后因素，該因素決定了治療方案的最終選擇[2]。特別是在乳腺外科手術(shù)范圍不斷精準(zhǔn)及縮小的形式下，對腋窩淋巴結(jié)的處理成為了當(dāng)前的主要問題[3]。前哨淋巴結(jié)主要是指收納器官或某區(qū)域組織淋巴結(jié)液的第一站淋巴結(jié)，如前哨淋巴結(jié)未發(fā)生轉(zhuǎn)移，就不需要對腋窩淋巴結(jié)進(jìn)行清掃[4-5]。因此，如何準(zhǔn)確、迅速地對其進(jìn)行診斷，成為了臨床所需要思考的問題[6-7]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院病理科2018 年7 月至2019 年7 月收治的680 例乳腺癌患者，隨機(jī)分為對照組及觀察組，每組各340 例。對照組患者均為女性，年齡24～68歲，平均（38.84±4.53）歲，病程時長3 個月至6年，平均（2.43±0.23）年；觀察組患者均為女性，年齡22～69 歲，平均（38.87±4.52）歲，病程時長4 個月至6 年，平均（2.42±0.25）年。兩組患者一般資料無明顯差異，P<0.05，具有可比性。

1.2 方法

對照組使用術(shù)后石蠟切片進(jìn)行診斷：選取個人綜合素質(zhì)較高的醫(yī)生進(jìn)行操作，需要使用的相關(guān)儀器包括：醫(yī)用鑷子、手術(shù)刀、紗布、組織脫水機(jī)（Therom）、切片機(jī)。需要使用的試劑：蘇木精染色液、水溶性伊紅、梯度酒精、二甲苯、石蠟溶液以及10 %福爾馬林溶液。在術(shù)后選取患者新鮮前哨淋巴結(jié)，放入10 %福爾馬林溶液中臨時固定，后再將組織放入組織脫水機(jī)中固定、脫水、浸臘，制成組織蠟塊，切片經(jīng)HE 染色待用。觀察組則使用冷凍切片進(jìn)行病理診斷：選取個人綜合素質(zhì)較高的醫(yī)生進(jìn)行操作，術(shù)前對相關(guān)儀器進(jìn)行消毒，需要使用的相關(guān)儀器及試劑包括：OCT 包埋劑、1 %鹽酸乙醇分化液、蘇木精染色液、水溶性伊紅及梯度乙醇、恒溫冰凍切片機(jī)、玻璃立缸。在術(shù)后選取患者新鮮病變組織，大小一般為1.5 cm×1.5 cm×0.4 cm，將其放置于倒有少量OCT 包埋劑的金屬標(biāo)本托盤上，將其冷凍，冷凍時間分為2 min、5 min、10 min，并切為2 μm、4 μm、6 μm、8 μm 的切片樣本，采用100 mL 95 %乙醇溶液作為固定液，將切好的冰凍切片浸入玻璃立缸，常溫下固定時間為2 min。隨后將固定的切片進(jìn)行清洗，再加入蘇木精染液染色，染色后用1 %鹽酸乙醇分化液分化并用清水藍(lán)化25 s，再加入伊紅染液染色。完成后放入梯度乙醇內(nèi)脫水，再浸入二甲苯使切片透明，以中性樹膠封片。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察以對照組為標(biāo)準(zhǔn)，觀察不同冷凍時間、不同質(zhì)量的冷凍切片的診斷準(zhǔn)確率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 18.0 處理患者資料，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計數(shù)資料用率（%）表示，采用t和χ2檢驗，以P<0.05 為準(zhǔn)，說明差異較大，具有臨床對比價值。

2 結(jié)果

2.1 不同冷凍時間下切片診斷正確率對比

以石蠟切片診斷為標(biāo)準(zhǔn)，觀察不同冷凍時間下冷凍切片的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明：冷凍時間為2 min的切片診斷的準(zhǔn)確率最高，明顯優(yōu)于其他兩組，詳情見表1。

表1 不同冷凍時間下切片診斷正確率的對比[n(%)]

2.2 不同質(zhì)量下切片診斷正確率對比

以石蠟切片診斷為標(biāo)準(zhǔn)，觀察不同質(zhì)量下冷凍切片的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明：切片厚度為4 μm 時，診斷準(zhǔn)確率最高，明顯優(yōu)于其他兩組，詳情見表2。

表2 不同質(zhì)量下切片診斷正確率對比[n(%)]

3 討論

冷凍切片在制作過程中對于切片的固定具有較為重要的作用[8]。因此，在選擇切片固定、染色時，需要保持玻片和切片的溫差[9]。如發(fā)生切片脫落，應(yīng)當(dāng)仔細(xì)對情況進(jìn)行分析，一般情況下，切片脫落主要由以下原因所致：（1）載玻片存在異物；（2）固定液濃度不足；（3）組織壞死細(xì)胞過多[10]。對于上述問題，可采取以下處理方式：（1）加強(qiáng)載玻片的清潔工作，避免載玻片被污染；（2）定時更換固定液，如實驗取樣較多時，應(yīng)當(dāng)及時更換固定液；（3）在條件允許的情況下多取幾組樣品，或延長切片固定的時間。

通過此次研究發(fā)現(xiàn)：不同的冷凍時間以及不同厚度的切片質(zhì)量均會對前哨淋巴組織冷凍切片的準(zhǔn)確率產(chǎn)生影響，因此，我們應(yīng)當(dāng)及時探索其規(guī)律，選取最為合理的切片質(zhì)量及冷凍時間，從而增加冷凍切片的診斷確診率。此外，還值得注意的是：除冷凍切片的質(zhì)量以及冷凍時間，脫片問題以及染色過程及其他問題也需要我們關(guān)注。冷凍切片在染色時需要注意蘇木精染液以及固定液的濃度。在染色工作完成后，應(yīng)對其進(jìn)行觀察，確保切片合格。

綜上所述，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)：在前哨淋巴結(jié)組織冷凍切片的制作過程中，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格制作過程，并精準(zhǔn)控制冷凍切片的各細(xì)節(jié)步驟，并將冷凍時間控制在2 min、切片厚度控制在4 μm，以此來提高前哨淋巴組織冷凍切片的準(zhǔn)確率。