梁耀文，舒會(huì)友，黃新全， 陳 玲，劉 燊，張輝華

（1.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 佛山 528225；2.廣州市廣力萊生物技術(shù)有限公司，廣東 廣州 510080；3.全南縣龍?jiān)磯捂?zhèn)動(dòng)物防檢站，江西 全南 341800；4.全南縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，江西 全南 341800）

【研究意義】 仔豬機(jī)體免疫系統(tǒng)與消化系統(tǒng)發(fā)育還不完善，早期斷奶仔豬因受到生理、心理、飼糧、環(huán)境等眾多應(yīng)激因素的影響，極易引發(fā)消化道功能紊亂、腹瀉、生長(zhǎng)不良等癥狀[1]。如何減少仔豬斷奶應(yīng)激綜合癥的發(fā)生在生產(chǎn)上是一個(gè)比較棘手的問題。乳鐵蛋白是一種非血紅素鐵結(jié)合多功能糖蛋白，能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)能、刺激腸道雙歧桿菌生長(zhǎng)、促進(jìn)腸道鐵離子吸收、促骨細(xì)胞生長(zhǎng)分化，具有抗病毒、抗氧化、抗菌、抗腫瘤等生物學(xué)功效[2-3]，有望成為一種用于預(yù)防斷奶仔豬腹瀉及促生長(zhǎng)的新型安全綠色飼料添加劑?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】 研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬日糧中添加牛乳鐵蛋白可以促進(jìn)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的提高，增強(qiáng)斷奶仔豬機(jī)體非特異性免疫力，緩解斷奶應(yīng)激[4-5]。日糧中添加牛乳鐵蛋白被認(rèn)為是預(yù)防斷奶仔豬感染和斷奶應(yīng)激的好方法[6]。豬乳鐵蛋白源肽LFP-20可以通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的平衡來預(yù)防脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）引發(fā)的小鼠全身炎癥反應(yīng)[7]，減輕LPS介導(dǎo)的回腸免疫紊亂。在嬰幼兒奶粉營(yíng)養(yǎng)配方中添加人乳鐵蛋白，可保護(hù)新生兒健康，促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育[8-9]。采食含重組人乳鐵蛋白的母乳，顯著增加年青仔豬十二指腸、回腸絨毛的長(zhǎng)度及隱窩深度，減少固有層厚度[10]；同時(shí)可使血液循環(huán)白細(xì)胞種類發(fā)生有益變化，即中性粒細(xì)胞顯著減少，淋巴細(xì)胞顯著增加，中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值降低，減少腸道炎癥[10-11]。在畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域，目前研究應(yīng)用比較多的主要是牛乳鐵蛋白，對(duì)人乳鐵蛋白的應(yīng)用研究還是比較少。人乳鐵蛋白與牛乳鐵蛋白分子質(zhì)量相近，氨基酸序列同源性高達(dá)77%，具有相似的三維結(jié)構(gòu)與生物學(xué)活性[12]。但不同動(dòng)物乳鐵蛋白具有自身特性，如糖基化方式、數(shù)量與位點(diǎn)的差異[12-14]。糖基化位點(diǎn)的不同可使它們?cè)隗w內(nèi)表現(xiàn)出不同的特性與功能[3]。如人乳鐵蛋白比牛乳鐵蛋白具有更強(qiáng)的抗胰蛋白酶消化的能力[12],不同物種的乳鐵蛋白抗菌能力也有差異[15]。【本研究切入點(diǎn)】 人乳鐵蛋白是一種新型功能性添加劑，其對(duì)斷奶仔豬促生長(zhǎng)作用值得研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】 本試驗(yàn)旨在研究重組人乳鐵蛋白對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及血清生化指標(biāo)的影響，為期為重組人乳鐵蛋白在仔豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試的重組人乳鐵蛋白（純度為90%）購自無錫康可萊醫(yī)藥有限公司。血液生化檢測(cè)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在江西全南高山牧業(yè)有限公司進(jìn)行。選擇生長(zhǎng)健康、體重均勻的杜洛克×長(zhǎng)白×大約克（DLY）三元斷奶仔豬180頭，試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭仔豬（公母各半）。A處理飼喂基礎(chǔ)日糧，作為對(duì)照；B處理添加抗生素，在基礎(chǔ)日糧中添加1 000 mg/kg 10%桿菌肽鋅+200 mg/kg 10%抗敵素；C、D、E、F處理在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上分別添加160、320、480、640 mg/kg重組人乳鐵蛋白。試驗(yàn)期為4周。仔豬日糧參照NRC《豬的營(yíng)養(yǎng)需要》配制[16]?；A(chǔ)日糧組成為：玉米58%、豆粕16%、膨化黃豆粉16%、秘魯魚粉3%、面粉3%、預(yù)混料4%,營(yíng)養(yǎng)含量為：粗蛋白19.5%、賴氨酸1.25%、蛋+胱氨酸0.72%，豬消化能為13.88 MJ/kg。

豬場(chǎng)欄舍為封閉豬欄，地面為水泥地板。試驗(yàn)前豬場(chǎng)區(qū)用生石灰進(jìn)行環(huán)境消毒。試驗(yàn)期間每天清掃豬舍2次，每隔5 d進(jìn)行1次消毒；仔豬自由采食、自由飲水；按豬場(chǎng)免疫程序進(jìn)行免疫。

1.3 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 分別于試驗(yàn)開始當(dāng)天及試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早上8：00空腹稱重。以欄為單位，統(tǒng)計(jì)初始重、末重和采食量，最后計(jì)算每頭豬日均增重、日均采食量和料重比。

1.3.2 腹瀉率 試驗(yàn)期間每天觀察仔豬排糞情況，記錄腹瀉個(gè)體和腹瀉持續(xù)時(shí)間，計(jì)算各處理腹瀉率：

1.3.3 血液生化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天仔豬空腹稱重后，從各重復(fù)選取4頭健康仔豬（公母各2頭）于前腔靜脈采血10 mL，3 000 r/min離心10 min分離血清，保存于-80 ℃冰箱中，用于后續(xù)血液生化指標(biāo)測(cè)定。血液生化指標(biāo)包括白蛋白、總膽固醇、堿性磷酸酶、總蛋白、甘油三酯、葡萄糖、總抗氧化能力、谷胱甘肽過氧化物酶、總超氧化物歧化酶。參照黃俊文等[17]的方法進(jìn)行，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016進(jìn)行整理，用SPSS 22.00進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），Duncan法進(jìn)行多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

各試驗(yàn)處理仔豬生長(zhǎng)性能測(cè)定與統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。試驗(yàn)?zāi)┲兀珺、C、D、E、F處理比A處理分別高9.34%、5.78%、6.98%、9.92%、7.71%，差異均顯著；其余各處理均無顯著性差異。日均增重，B、C、D、E、F處理比A處理分別高17.05%、9.49%、12.65%、19.67%、15.17%， 差異均顯著；E處理比C處理高9.30%，差異顯著；其余各處理無顯著差異。日均采食量，B處理、E處理比A處理分別高5.45%、6.66%，差異均顯著；其余各處理間均無顯著差異。料重比，B、D、E、F處理比A處理分別低10.11%、8.43%、10.67%、9.55%，差異均顯著；B處理、E處理比C處理分別低4.19%、4.79%，差異均顯著；其余各處理間差異不顯著。腹瀉指數(shù)，B、D、E、F處理比A處理分別低63.38%、76.15%、65.26%、67.98%，差異均顯著；B、D、E、F處理比C處理分別低56.91%、71.93%、59.12%、62.32%，差異均顯著；其余各處理無顯著差異。結(jié)果表明，日糧中添加重組人乳鐵蛋白，對(duì)斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能具有提高作用。

表1 重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能影響Table 1 Effects of rHL on production performance of weaned piglets

2.2 重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表2可知，E處理血清白蛋白、總蛋白含量比A處理分別高33.72%、20.40%，差異均顯著；其余添加重組人乳鐵蛋白處理，數(shù)值均比空白對(duì)照高，但無顯著差異。血清尿素氮含量，B處理、E處理比A處理分別低22.73%、27.27%，差異均顯著；其余添加重組人乳鐵蛋白處理，數(shù)值均比空白對(duì)照低，但無顯著差異。堿性磷酸酶，B處理、E處理比A處理分別高31.81%、47.93%，差異均顯著；其余各處理均無顯著性差異。結(jié)果表明，日糧中添加480 mg/kg重組人乳鐵蛋白，對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)具有良好的促進(jìn)作用。

表2 重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響Table 2 Effects of rHL on serum biochemical indexes of weaned piglets

2.3 重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表3可知，血清總抗氧化能力，C、D、E、F處理比A處理分別高34.05%、43.58%、64.40%、39.88%，差異均顯著；其余各處理均無顯著差異。谷胱甘肽過氧化物酶活性，D、F處理比A處理分別高12.60%、14.33%，差異均顯著；其余各處理均無顯著差異?？偝趸锲缁富钚裕珽處理比A處理、B處理分別高100%、66.67%，差異均顯著；其余各處理均無顯著差異。MDA濃度，A處理比C、D、E、F處理分別高15.33%、19.88%、20.83%、18.50%，差異均顯著；其余各處理均無顯著差異。結(jié)果表明，斷奶仔豬日糧中添加重組人乳鐵蛋白能提高斷奶仔豬血液抗氧化能力。

表3 重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)影響Table 3 Effect of rHL on serum antioxidant indexes of weaned piglets

3 討論

3.1 乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加重組人乳鐵蛋白，可以提高斷奶仔豬日增重，具有劑量效應(yīng)，添加量從160 mg/kg增加到480 mg/kg，日增重達(dá)到最高；但增加到640 mg/kg，日增重不再上升，反而略有下降。日均采食量，也是隨著添加量的增加而上升，添加量480 mg/kg時(shí)采食量最大。料重比，隨著添加量的增加而下降，添加量480 mg/kg時(shí)料重比最低。腹瀉率，也隨著添加量的增加而下降，添加量240 mg/kg時(shí)腹瀉率最低。可見，重組人乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)有益，其效果與添加1 g/kg 10%的桿菌肽鋅+200 mg/kg 10%的抗敵素組相當(dāng)，可以用來替代飼用促生長(zhǎng)抗生素進(jìn)行無抗日糧生產(chǎn)。

有不少動(dòng)物試驗(yàn)表明，乳鐵蛋白對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)有利。安清聰?shù)萚4]研究牛乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響，發(fā)現(xiàn)添加150 mg/kg牛乳鐵蛋就能顯著降低料重比；250 mg/kg添加量就可以顯著提高日均增重與采食量，并顯著降低仔豬的腹瀉率；并認(rèn)為牛乳鐵蛋白可以代替部分抗生素用于斷奶仔豬生產(chǎn)。Wang等[5]研究發(fā)現(xiàn)，1.0 g/kg的乳鐵蛋白可以促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)性能，極顯著提高日均增重，顯著提高日均采食量、降低料重比與降低腹瀉；其效果與添加 20 mg/kg 黃霉素和110 mg/kg 金霉素相當(dāng)。陳吉紅等[18]研究表明，250、500 mg/kg添加量可以顯著提高仔豬日均增重，250 mg/kg添加量可以顯著降低料重比，但對(duì)采食量沒有產(chǎn)生顯著影響。李美君等[19]研究表明，250、500 mg/kg添加量可以顯著提高仔豬日均增重，但對(duì)采食量與料重比沒有產(chǎn)生顯著的影響。

仔豬斷奶后，由于斷奶應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)受阻。添加乳鐵蛋白促斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的提高，可能與其具有多功能作用相關(guān)。比如乳鐵蛋白促腸道上皮細(xì)胞增殖、分化和隱窩裂隙增加，促進(jìn)腸道絨毛生長(zhǎng)發(fā)育[20]；乳鐵蛋白提高免疫球蛋白 IgG、IgA 與 IgM的濃度[21]；增加PR-39與protegrin-1基因mRNA的表達(dá)[6]，促使機(jī)體非特異性免疫力提高；乳鐵蛋白改善仔豬腸道微生態(tài)，促進(jìn)腸道乳酸菌與雙歧桿菌生長(zhǎng)，抑制大腸桿菌生長(zhǎng)[5]。

3.2 乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物血清中總蛋白濃度越高說明蛋白質(zhì)在機(jī)體內(nèi)的合成與代謝速度越快，當(dāng)血清總蛋白、白蛋白含量升高時(shí)，表明豬的消化吸收、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝加強(qiáng)[22]；而血清尿素氮的含量可以較好地反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況，氨基酸平衡良好，血清尿素氮含量下降[17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，480 mg/kg乳鐵蛋白可以顯著提高斷奶仔豬血液中血清白蛋白、總蛋白的含量，提高血清堿性磷酸酶活性，降低血清尿素氮含量。說明乳鐵蛋白能夠促進(jìn)斷奶仔豬對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收增加，改善仔豬體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況。陳吉紅等[18]研究發(fā)現(xiàn)，添加牛乳鐵蛋白可以降低斷奶仔豬血清尿素氮含量，血清總蛋白含量。

3.3 乳鐵蛋白對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化能力的影響

許多研究表明，牛乳鐵蛋白可以顯著提高斷奶仔豬血清T-SOD、GSH-Px及T-AOC活性，降低血清MDA含量[4,23-24]。本研究結(jié)果表明，所有添加重組乳鐵蛋白組血清T-AOC均顯著高于對(duì)照組，隨著添加量從160 mg/kg增加到480 mg/kg，總抗氧化能力也不斷上升；往上增加到640 mg/kg，總抗氧化能力不再增加略有下降。血清谷胱甘肽過氧化物酶活性也是隨著添加量增加而上升，添加量達(dá)到320 mg/kg時(shí)達(dá)到顯著性差異水平，添加量增加到480 mg/kg時(shí)達(dá)到最高水平，往上增加到640 mg/kg時(shí)酶活不再增加略有下降，這與安清聰?shù)萚4]的研究結(jié)果比較相似。他們發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白添加量從125 mg/kg上升到250 mg/kg，T-SOD、GSH-Px及T-AOC活性也隨之升高；但當(dāng)添加量增加到500 mg/kg，這些酶的活性反而下降。血清T-SOD活性，在重組人乳鐵蛋白組添加量為480 mg/kg時(shí)達(dá)到顯著性增加效果，其余添加量無顯著性提高。所有添加處理的血清MDA濃度均顯著低于對(duì)照。Hu等[25]認(rèn)為乳鐵蛋白是鐵吸收和氧化應(yīng)激的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，添加乳鐵蛋白提高血清T-AOC 活性、十二指腸SOD活性。Donovan等[26]發(fā)現(xiàn)，牛乳鐵蛋白能調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子的分泌，增加抗炎細(xì)胞因子（IL-10）及減少促炎細(xì)胞因子（TNF-α與IL-1β）。體外試驗(yàn)也表明，重組人乳鐵蛋白對(duì)DPPH、ABTS和羥自由基具有一定的清除能力[27]，重組人乳鐵蛋白的濃度與抑制DPPH自由基能力、抑制超氧陰離子自由基能力、抑制羥基自由基能力、還原能力之間呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，重組人乳鐵蛋白可以作為天然抗氧化劑[2]。機(jī)體的抗氧化能力水平能與機(jī)體抵抗疾病以及健康程度有著非常密切的關(guān)系，血清中MDA的含量和T-AOC的活性可有效反映機(jī)體的抗氧化能力與抗病能力[28]。這些結(jié)果表明，重組人乳鐵蛋白能提高斷奶仔豬血液抗氧化能力，提高機(jī)體抗病能力，對(duì)仔豬生長(zhǎng)有利。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，重組人乳鐵蛋白可以提高斷奶仔豬的日均增重、采食量，降低料重比、腹瀉率，提高血清白蛋白與總蛋白含量，降低尿素氮含量，以及提高血清總抗氧化能力、谷胱甘肽過氧化物酶活性及降低MDA水平。綜合本試驗(yàn)結(jié)果，添加量480 mg/kg重組人乳鐵蛋白的效果最好。