朱美玲 孫玉帥 張雪 張玉苗

摘要：選取斜生柵藻作為研究對(duì)象，將其接種于含有低濃度無(wú)機(jī)鋅（Zn²⁺）（O～16mg/L）、六價(jià)鉻（Cr⁶⁺）（O～2mg/L）、無(wú)機(jī)銅（Cu²⁺）（0～4mg/L）的培養(yǎng)基中，研究了斜生柵藻的對(duì)不同重金屬離子的耐受性。結(jié)果表明：斜生柵藻對(duì)重金屬Zn2的生長(zhǎng)耐受程度不超過(guò)8mg/L，并且O～4mg/L的添加量對(duì)斜生柵藻的生長(zhǎng)沒(méi)有抑制作用，反而有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用;斜生柵藻能耐重金屬Cr⁶⁺的濃度范圍是O～1.5mg/L;斜生柵藻能耐重金屬Cu²⁺的濃度范圍是O～2mg/L。

關(guān)鍵詞：斜生柵藻;重金屬離子;Zn²⁺Cr⁶⁺;CU²⁺;生長(zhǎng)耐受性

中圖分類(lèi)號(hào)：X52 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-9944（2019）18-0120-03

1引言

近年來(lái)，由于部分使用和生產(chǎn)重金屬工廠的違法排放以及農(nóng)民過(guò)量施用含重金屬的化肥和農(nóng)藥等，使大量含重金屬的污染物被排放到自然環(huán)境中，最終進(jìn)入水環(huán)境，使重金屬含量遠(yuǎn)高于環(huán)境容納量而造成污染。重金屬污染物通過(guò)各種途徑進(jìn)入海洋后，最先對(duì)海洋中的微藻造成危害，微藻對(duì)重金屬離子極其敏感，其光合作用尤為敏感。微藻作為水體中食物鏈的初級(jí)生產(chǎn)者，在食物鏈的傳遞過(guò)程中極為重要。重金屬污染物對(duì)微藻的毒害作用可通過(guò)食物鏈進(jìn)而對(duì)魚(yú)、蝦、貝等的健康造成威脅并在體內(nèi)對(duì)重金屬離子進(jìn)一步積累，最終會(huì)影響人類(lèi)的健康。因此研究重金屬離子對(duì)藻類(lèi)生長(zhǎng)代謝的影響可為環(huán)境污染的預(yù)防、控制和治理提供理論依據(jù)。

斜生柵藻隸屬于綠藻門(mén)、綠藻綱、綠球藻目。細(xì)胞扁平，通常由4個(gè)細(xì)胞組成定形群體，也有的為4或8個(gè)組成，群體細(xì)胞排列成直線或略交互排列;細(xì)胞紡錘形，上下兩端逐漸尖細(xì)，群體兩側(cè)細(xì)胞的游離面有時(shí)凹人，有時(shí)突出，細(xì)胞壁平滑，4個(gè)細(xì)胞的群體寬12～34um，細(xì)胞長(zhǎng)10～21um，寬3～9um。廣泛分布于湖泊、池塘、沼澤等靜水生境，以似親抱子繁殖。細(xì)胞內(nèi)含豐富的蛋白質(zhì)，大量培養(yǎng)可作為蛋白質(zhì)的來(lái)源，近年來(lái)被人們廣泛研究。

本研究選取重金屬Zn²⁺、Cr⁶⁺、Cu²⁺作為研究對(duì)象，采用水體培養(yǎng)方式，研究比較3種不同濃度重金屬對(duì)斜生柵藻生長(zhǎng)的影響，為斜生柵藻的重金屬耐受性以及水污染生物監(jiān)測(cè)提供參考。

2材料與方法

2.1試劑與儀器

斜生柵藻藻液;重鉻酸鉀;氯化鋅;氯化銅;氯化銨;二水氯化鈣;七水硫酸鎂;無(wú)水磷酸氫二鉀;無(wú)水磷酸二氫鉀;Tris;冰醋酸;土壤懸液;瓊脂粉;WFJ7200可見(jiàn)分光光度計(jì);恒溫?fù)u床;高壓滅菌鍋;pH計(jì);電子分析天平。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1TAP培養(yǎng)基的配置

本實(shí)驗(yàn)采用TAP培養(yǎng)基，分別量取10mL TAP鹽（稱(chēng)取0.5g CaCI2·2H2O于小燒杯中，加入適量蒸餾水單獨(dú)溶解;稱(chēng)取4g NHCI4、1g MgSO4·7H2O，加適量水溶解;將溶解好的兩種溶液混合后定容至100 mL）、8.33mL磷酸鹽（分別稱(chēng)取1.879g K2HPO4.3H2O、0.726g KH2PO4，加適量水溶解，定容至100 mL）、10mL Tris（稱(chēng)取24.2g Tris，加入適量蒸餾水溶解后，加入10mL冰醋酸，最后用蒸餾水定容至100mL）、5mL土壤懸液置于1000mL容量瓶中，用蒸餾水定容，調(diào)制pH值為7.1，配置為1L液體培養(yǎng)基;固體培養(yǎng)基按上述配置好后，向其中加入1.5%的瓊脂粉，置于高壓滅菌鍋中滅菌（121℃高壓滅菌21min）。

2.2.2重金屬離子母液的配置

稱(chēng)取14.2mg重鉻酸鉀，溶于500mL蒸餾水中，配制成含六價(jià)鉻離子的母液，然后分別配制成鉻離子質(zhì)量濃度為0.5、1.0、1.5、2.0mg/L梯度系列。每種濃度各3瓶，每瓶含培養(yǎng)液100mL、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的藻液10mL，置于恒溫?fù)u床23℃、120r/min、光暗比12h：12h培養(yǎng)，并測(cè)定初始OD540值。

稱(chēng)取350mg硫酸鋅，溶于500mL蒸餾水中，配制成鋅離子的母液，然后分別配制成鋅離子質(zhì)量濃度為2.0、4.0、8.0、16.0mg/L梯度系列。每種濃度各三瓶，每瓶含培養(yǎng)液100mL，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的藻液10mL，置于恒溫?fù)u床23℃、120r/rain、光暗比12h：12h培養(yǎng)。并測(cè)定初始ODs4。值。

稱(chēng)取78.5mg硫酸銅，溶于500mL蒸餾水中，配制成銅離子的母液，然后分別配制成鉻離子質(zhì)量濃度為1.0、2.0、3.0、4.0mg/L梯度系列。每種濃度各三瓶，每瓶含培養(yǎng)液100mL，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的藻液10mL，置于恒溫?fù)u床23℃、120r/min、光暗比12h：12h培養(yǎng)，并測(cè)定初始ODs4。值。

2.2.3斜生柵藻的培養(yǎng)

本次實(shí)驗(yàn)采用TAP培養(yǎng)基，培養(yǎng)容器為250mL三角瓶，平行樣3個(gè)，重復(fù)3次。藻液按照l(shuí)：10于超凈工作臺(tái)接種，置于恒溫?fù)u床23℃、120r/min、光暗比12h：12h培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。所有培養(yǎng)液及培養(yǎng)容器均須在高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min后使用。具體參照陶梅平的方法。

2.2.4斜生柵藻在重金屬Zn²⁺、Cr²⁺、Cu²⁺脅迫下生長(zhǎng)十

通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)將此次實(shí)驗(yàn)周期定為8d，用光密度OD540值來(lái)反映重金屬Zn²⁺、Cr²⁺、Cu²⁺對(duì)斜生柵藻生長(zhǎng)的影響。分別在0、2、4、6、8d對(duì)不同濃度的重金屬zn²⁺、Cr²⁺、Cu²⁺濃度脅迫下斜生柵藻的OD540值進(jìn)行測(cè)定，具體參照代雅楠的方法。

3結(jié)果與討論

3.1斜生柵藻在重金屬Zn²⁺脅迫下的生長(zhǎng)情況

如圖1所示，與對(duì)照組相比，重金屬Zn²⁺濃度在O～4mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)與對(duì)照同步增長(zhǎng)，甚至培養(yǎng)8d后，光密度值超過(guò)對(duì)照;重金屬Zn²⁺濃度在4～8mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增長(zhǎng)較為緩慢;重金屬Zn²⁺濃度在16mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而變小;說(shuō)明當(dāng)重金屬Zn²⁺濃度在4mg/L以?xún)?nèi)時(shí)，一定程度的重金屬Zn²⁺對(duì)斜生柵藻的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用;當(dāng)重金屬Zn²⁺濃度4～8mg/L范圍內(nèi)時(shí)，斜生柵藻仍有生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)速率有一定程度的抑制;當(dāng)重金屬Zn²⁺濃度8～16mg/L范圍內(nèi)，斜生柵藻的生長(zhǎng)遭到明顯抑制。說(shuō)明斜生柵藻對(duì)重金屬Zn²⁺的生長(zhǎng)耐受程度不超過(guò)8mg/L，并且0～4mg/L的添加量對(duì)斜生柵藻的生長(zhǎng)沒(méi)有抑制作用，反而有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。

3.2 斜生柵藻在重金屬Cr⁶⁺脅迫下的生長(zhǎng)情況分析

如圖2所示，與對(duì)照組相比，重金屬Cr⁶⁺濃度在0～1.5mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢增大;重金屬Cr⁶⁺濃度在2mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而減小;說(shuō)明斜生柵藻在重金屬Cr⁶⁺濃度為O～1.5mg/L的脅迫下能正常生長(zhǎng)，重金屬對(duì)其抑制作用不明顯，而Cr⁶⁺濃度為1.5～2mg/L的脅迫下，斜生柵藻的生長(zhǎng)受到明顯抑制;因此斜生柵藻能耐重金屬Cr⁶⁺的濃度范圍是O～1.5mg/L。

3.3斜生柵藻在重金屬Cu²⁺脅迫下的生生長(zhǎng)情況分析

如圖3所示，與對(duì)照組相比，重金屬Cu²⁺濃度在O～2mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增長(zhǎng)，重金屬Cu²⁺濃度在2～4mg/L時(shí)，光密度值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而減小;說(shuō)明說(shuō)明斜生柵藻在重金屬Cu²⁺濃度為O～2mg/L的脅迫下能正常生長(zhǎng)，重金屬對(duì)其抑制作用不明顯，而Cu²⁺濃度為2～4mg/L的脅迫下，斜生柵藻的生長(zhǎng)受到明顯抑制;因此斜生柵藻能耐重金屬Cu²⁺的濃度范圍是O～2mg/L。