馬小雙 蔣倩 李文艷

摘要：指出了白及作為一種傳統(tǒng)的中藥材，藥用價值高，用藥廣泛，化學成分復雜，藥理活性多樣，具有良好的開發(fā)價值。利用四氧嘧啶誘導糖尿病小鼠模型，研究了白及多糖的降血糖功效。通過連續(xù)給小鼠灌胃白及多糖18d后，可以在一定程度上改善糖尿病小鼠的狀態(tài)，緩解多飲多食多尿及消瘦等癥狀，降低小鼠血糖。試驗過程中主要測定了糖尿病小鼠的血糖值、體質指數(shù)、負重游泳時間、免疫器官濕重等各項指標。結果表明：白及多糖能夠保護小鼠免疫器官，增加小鼠脾臟和胸腺的濕重，延長小鼠負重游泳的時間，白及多糖具有抗疲勞功效和增強機體免疫力的功效。

關鍵詞：抗疲勞;降血糖;增強免疫力

中圖分類號：TS210 文獻標識碼：A 文章編號：1674-9944（2019）20-0153-03

1引言

白及是蘭科植物白及[BletiUastriata（Thunb.）Reichb.f.]的干燥塊莖，別名良姜、紫蘭，其根白色，連及而生，故日白及，其性味苦、甘、澀，平、微寒，主歸肺經(jīng)、胃經(jīng)、肝經(jīng)。具有補肺、止血、消腫、生肌、斂瘡的功效。主要用于治療肺傷咳血、衄血、金瘡出血、癰疽腫毒、潰瘍疼痛等癥。素有“外科最善”之稱，是我國傳統(tǒng)止血藥，歷史悠久。臨床上廣泛用于治療咳血、瘡瘍腫毒、外傷出血、吐血、皮膚皸裂、肺結核、潰瘍病出血等病癥，療效突出。

現(xiàn)代藥理研究證實，除了上述作用之外，白及還具有抑制腫瘤血管生成、抗感染、抗疲勞、抗氧化、防腐、促進傷口凝血、保護胃黏膜、促進機體傷口愈合的功效。人們研究發(fā)現(xiàn)，白及的假鱗莖含有大量易溶于水的多糖，其主要功能性成分是葡萄甘露聚糖，白及多糖具有十分特殊的黏性。白及多糖由甘露糖和葡萄糖兩種單糖組成，不含有糖醛酸，提純后的白及多糖為白色粉末狀，在熱水和偏堿性溶液中易溶解，在冷水中不易溶解。白及水溶液的粘性很大，且粘度隨其分子量增加而增加。白及的主要化學成分是聯(lián)節(jié)類、菲類及其衍生物，此外還含有少量揮發(fā)油、黏液質、白及甘露聚糖以及淀粉、葡萄糖等。白及多糖具有生物活性、生物相容性，且毒性較低，在醫(yī)藥領域被廣泛應用，隨著研究的深入，白及的功能特效也越來越多地被人們發(fā)現(xiàn)。

近年來不斷研發(fā)白及的新型制劑，其臨床療效十分顯著。糖類是自然界中最多的天然有機化合物，也是重要的生物高分子和重要的信息分子。多糖及糖復合物在自然界分布廣泛，功能多種多樣，它們參與了細胞各種生命活動。有的多糖具有特殊生物活性，能夠顯著降低動物機體的血糖，可作為一種機體免疫調節(jié)劑，沒有毒副作用，被臨床和疫苗廣泛應用。多糖常與其它大分子共同存在于植物細胞中，可利用多糖不溶于有機溶劑的性質在提取液中加入乙醇溶液使白及多糖從提取液中沉淀出來，初步達到分離純化的目的。

2材料與方法

2.1實驗材料

2.1.1原料與試劑

白及購于文山市三七農(nóng)貿(mào)市場、昆明種小白鼠、四氧嘧啶（上海伊卡生物技術有限公司）、鹽酸二甲雙胍片（河北醫(yī)科大學制藥廠）、無水乙醇、蒸餾水、生理鹽水。

2.1.2試驗儀器與設備

干燥箱（上海以恒科學儀器有限公司）、R-1005型旋轉蒸發(fā)儀（鄭州長城科技有限公司）、XL5A離心機（湖南湘立科學儀器有限公司）、KQ-300E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、586型魚躍血糖儀（上海魚躍醫(yī)療設備有限公司）、HH-s2s恒溫水浴鍋（金壇市大地自動化儀器廠）、燒杯、量筒、滴管、電子天平、分析天平、玻棒、抽濾裝置、濾紙、錐形瓶、pH計、小鼠灌胃器、鼠籠。

2.2實驗方法

2.2.1小鼠降血糖實驗

2.2.1.1建模

實驗前將26只雌雄各半的昆明種小鼠放在室溫和相對濕度穩(wěn)定的實驗室內(nèi)適應性喂養(yǎng)4d，小鼠給予營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)以及自由飲水。4d后將其分為對照組和糖尿病模型組。對照組給以營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)及自由飲水，糖尿病模型組禁食12h后腹腔注射藥物四氧嘧啶，劑量為200mg/kg，84h后，小鼠斷尾采血測定糖，當數(shù)值大于11.1mmoL/L時則表明糖尿病小鼠造模成功，可用于接下來的藥理實驗。實驗期間每天稱量小鼠的體重，并密切觀察小鼠的狀態(tài)。

2.2.1.2分組及給藥

選取造模成功的患糖尿病小鼠20只，將小鼠隨機分為5個組，每個小組4只，即糖尿病模型組、鹽酸二甲雙胍組、白及多糖低劑量組、白及多糖中劑量組、白及多糖高劑量組。分組后，在每天的固定時間段8：OO～10：00給小鼠灌胃，實驗周期為18d。實驗期間，小鼠給以正常營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)，每天每只3～5g，自由攝食飲水，室內(nèi)確保通風，溫度和相對濕度保持穩(wěn)定。白及多糖高劑量、中劑量、低劑量組每天分別灌胃白及多糖400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，鹽酸二甲雙胍組每天灌胃劑量為200mg/kg1，用生理鹽水溶解，灌胃量為0.2mL/10g，對照組與模型組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃18d。在未次給藥前小鼠禁食10h（不禁水），給藥2h后斷尾采血用魚躍血糖儀測小鼠血糖。

2.2.2小鼠力竭游泳實驗

取小鼠16只，雌雄各半，放在室溫和相對濕度穩(wěn)定的實驗室內(nèi)適應性喂養(yǎng)4d，小鼠給予正常飼料喂養(yǎng)以及自由飲水，4d后將小鼠隨機分成4個組，每個小組4只，白及多糖高劑量、中劑量、低劑量組每天分別灌胃白及多糖劑量為400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，用生理鹽水溶液溶解，灌胃劑量為0.4mL/20g，對照組小鼠灌胃0.4mL/20g體積生理鹽水，持續(xù)灌胃15d。末次給藥30min后在小鼠尾部束小鼠體重10%的物體，并分別放人水溫25土1℃，水深12cm，長、寬、高為40 cmX 30cmX 20cm的玻璃缸內(nèi)游泳，立即計時并注意觀察，當小鼠頭部沉入水中12s內(nèi)不能浮出水面即視為體力耗竭，應立即停止計時，并記錄小鼠游泳時間，與對照組小鼠比較并進行統(tǒng)計學處理。按下列公式計算存活時間延長率：

延長率=實驗組小鼠力竭游泳時間/對照組小鼠力竭游泳時間-1

2.2.3小鼠臟器指數(shù)測定

采用2.2.2韻實驗小鼠進行后續(xù)藥理實驗，將小鼠處死后立即解剖，取其胸腺和脾臟，用濾紙吸干胸腺和脾臟表面的血液，在分析天平上稱濕重，按下列公式計算臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)=器官重量（mg）/小鼠體重（g）×100%

2.2.4數(shù)據(jù)處理

應用SPSS19.0數(shù)據(jù)分析軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料正態(tài)分布用均數(shù)加減標準差（x±s）來表示，采用單變量方差分析和單因素方差分析方法，當P<0.05為具有顯著差異，有統(tǒng)計學意義。

3結果與分析

3.1糖尿病小鼠血糖水平變化

血糖升高且空腹血糖含量>11.1mmoL/L是糖尿病最顯著的標志。診斷糖尿病的主要依據(jù)是以空腹血糖值升高超過11.1mmoL/L。因此本試驗以試驗前后血糖的高低值作為主要的檢測依據(jù)來探討白及多糖對糖尿病小鼠的降血糖作用。

小鼠血糖水平變化如表1所示，模型組與對照組相比，各糖尿病組小鼠的血糖值顯著升高（P<0.05），且血糖值均高于11.1mmoL/L，表明糖尿病小鼠動物造模成功。灌胃18d后，模型組的血糖值基本上沒有變化，而其它給藥組的血糖均有降低，藥物組與模型組小鼠比較，白及多糖低劑量、中劑量、高劑量各組的小鼠空腹血糖水平顯著降低（p<0.05），結果表明，白及多糖能降低四氧嘧啶誘導的Ⅱ型糖尿病小鼠的血糖。

3.2白及多糖對小鼠游泳時間的影響

如表2白及多糖對小鼠力竭游泳時間的影響所示，各組小鼠力竭游泳時間均比對照組顯著延長（P<0.05）。其中對照組和實驗組相比，白及多糖低劑量、中劑量、高劑量組小鼠游泳時間被延長（P<0.05），高劑量組小鼠游泳時間的延長率為59.83%，中劑量組小鼠游泳時間的延長率為38.63%，低劑量組小鼠游泳時間延長率為18.79%，明顯延長了小鼠的游泳時間，白及多糖具有抗疲勞的作用。

3.3小鼠臟器指數(shù)測定結果

如表3白及多糖對小鼠免疫器官指數(shù)的影響所示，各個實驗組小鼠免疫器官指數(shù)與對照組相比，各個實驗小組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)都不同程度的升高（P<0.05），白及多糖高劑量組的效果最好，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高30.88%、48.58%;中劑量組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高了29.90%、39.0o%;低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)提高了9.57%，表明白及多糖能夠促進糖尿病小鼠胸腺和脾臟的生長發(fā)育，能增強小鼠免疫力。

4結論與討論

灌胃18d后，模型組的血糖值基本上沒有變化，而其它給藥組的血糖均有所下降，與模型組小鼠比較，多糖低劑量組、中劑量組、高劑量組的小鼠空腹血糖水平顯著降低（P<0.05），白及多糖對四氧嘧啶誘導的Ⅱ型糖尿病小鼠具有一定的降血糖做用。白及多糖對實驗糖尿病模型小鼠的影響是廣泛的，都表明白及多糖能有效改善糖尿病模型小鼠的相關各項指標，減輕小鼠的病情，阻止或延緩并發(fā)癥的出現(xiàn)。深人研究白及多糖防治糖尿病及并發(fā)癥的機制，將其作為防治糖尿病及并發(fā)癥的有效制劑開發(fā)，具有重要的現(xiàn)實意義。

常用疲勞的評價方法有兩個：運動耐力實驗和生化指標檢測。提高運動耐力是緩解疲勞能力最有力的表現(xiàn)，小鼠負重游泳實驗常用來測定小鼠的疲勞狀況，可客觀的反映小鼠運動疲勞的程度，負重力竭游泳時間常常被作為反映運動耐力的重要指標，而且運動耐力下降又是機體疲勞最直接的表現(xiàn)，結果表明，白及多糖可以有效延長小鼠的負重游泳時間，高劑量組游泳時間的延長率為59.83%，中劑量組游泳時間的延長率為38.63%，低劑量組游泳時間延長率為18.79%，白及多糖具有一定的抗疲勞的作用。

脾臟、胸腺是動物體內(nèi)主要的免疫器官，免疫器官指數(shù)反應了動物免疫器官的發(fā)育和免疫細胞的功能情況，客觀上體現(xiàn)了機體的非特異性免疫能力。實驗組與正常對照組相比較，各個給藥組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)都有不同程度的升高（P<0.05），白及多糖高劑量組效果最好，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高30.88%、48.58%;中劑量組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高了29.90%、39.00%;低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)為9.57%，白及多糖具有增強機體免疫力的功效。