王亞茹　熊小婷　夏澤敏　黃日林　譚焯針　佘文勛

【摘 要】建立了一種牙膏中蒙花苷的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）檢測方法。樣品經(jīng)純水充分分散后，經(jīng)乙腈超聲提取，采用HPLC-MS/MS多反應監(jiān)測模式定性定量分析。對液相色譜條件及質(zhì)譜條件進行優(yōu)化，結(jié)果表明，在優(yōu)化的條件下，蒙花苷在5.0～200.0μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9987;檢出限和定量限分別為0.015μg/g和0.05μg/g;選取低、中、高三個濃度5.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L進行加標回收實驗，平均回收率為91.4～95.0%，相對標準偏差<3.70%。本方法簡單易行、靈敏可靠，可應用于實際牙膏樣品中蒙花苷的測定。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜;蒙花苷;牙膏;檢測

中圖分類號： O657.63;TS264.2 文獻標識碼： A文章編號： 2095-2457（2019）31-0187-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.31.090

野菊花為多年生草本植物野菊的頭狀花序，外形近似菊花，具有治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、風火赤眼、頭暈目眩等癥狀，同時可以作為降血壓和血糖的輔助療法，在牙膏中添加野菊花提取物具有抑菌消炎、抗不良刺激的作用。蒙花苷是野菊花的主要藥效成分，也是我國2010和2015版藥典中明確規(guī)定的野菊花藥材的質(zhì)控指標[1]。近年來，一些植物提取物被商家以功效成分添加到牙膏中，以此對外宣稱為功效型牙膏，野菊花提取物蒙花苷便是其中的典型代表。行業(yè)標準QB/T 2966-2014《功效型牙膏》中規(guī)定，功效性牙膏中的功效成分應進行定性定量檢測[2]，然而，目前尚無針對功效型牙膏中蒙花苷含量檢測的方法標準。因此，開展對牙膏中功效成分蒙花苷的檢測研究，對于幫助生產(chǎn)企業(yè)實現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控、保護消費者權(quán)益具有重要意義。

目前蒙花苷的檢測研究報道多針對藥材及中藥制劑[3-7]，報道的檢測方法主要有高效液相色譜法（HPLC）和超高效液相色譜法（UPLC）。對于牙膏中蒙花苷的檢測研究，劉廣源等[8]曾報道了一種采用HPLC測定牙膏中蒙花苷含量的方法。然而，在實際檢測中發(fā)現(xiàn)，由于牙膏基質(zhì)成分復雜，采用HPLC分析時會存在雜質(zhì)干擾嚴重或容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果的情況。牙膏中蒙花苷添加含量一般為數(shù)μg/g，采用HPLC分析時需更大樣品量，同時雜質(zhì)干擾嚴重，為解決HPLC的不足，本文采用HPLC-MS/MS法建立了牙膏中蒙花苷含量檢測方法。HPLC-MS/MS法集HPLC和MS/MS的優(yōu)點于一體，既能實現(xiàn)快速分析，又能準確定性，同時具有更高的靈敏度。本文所建方法，樣品經(jīng)水和乙腈提取后，上機分析僅需8min，大大提高工作效率，且有著較高的靈敏度，目標物在樣品中的檢出濃度可達0.015μg/g。

1 試驗

1.1 主要儀器與試劑

主要儀器：Agilent 1290Ⅱ-6495B高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國安捷倫有限公司;色譜柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18（2.1×100mm，2.7μm），美國安捷倫有限公司;超聲波清洗儀，上海科導超聲儀器有限公司;高速離心機，曦瑪離心機（揚州）有限公司;萬分之一分析天平、十萬分之一分析天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司;純水儀，美國Merck millipore公司。

主要試劑：蒙花苷標準品，純度99.2%，上海安譜科學儀器有限公司;乙腈、甲醇，色譜純，美國默克公司;甲酸、乙酸銨，優(yōu)級純，上海安譜科學儀器有限公司;超純水，由純水儀制備。

1.2 標準儲備溶液的配制

精密稱取0.0100g的蒙花苷標準品于10mL棕色容量瓶中，用二甲基亞砜溶解并定容至刻度，配置成1000mg/L標準儲備液，4℃避光保存。

1.3 標準工作溶液的配制

準確移取適量體積的蒙花苷標準儲備溶液（1.2）于10mL棕色容量瓶中，用乙腈配制成濃度為10.0mg/L的標準中間溶液，臨用前用乙腈稀釋成濃度為5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、150.0、200.0μg/L標準工作溶液。

1.4 樣品前處理

準確稱取牙膏樣品1.0g（精確至0.001g）于10mL具塞棕色比色管中，加入2mL超純水，渦旋30S，再加乙腈定容至刻度，渦旋30s，超聲20min，渦旋混勻，靜置10min，取上清液過0.22μm有機濾膜，待測。

1.5 儀器條件

色譜條件：色譜柱：Proshell 120 SB-C18（2.1*100mm，2.7μm）;流速：0.3mL/min;流動相：A：0.1%甲酸水溶液，B：乙腈;洗脫程序：梯度洗脫，0～2min，流動相A比例為90%，2～3min，流動相A由90%變?yōu)?0%，3～6min，流動相A 30%保持不變，6.1～8min，流動相A比例為90%;進樣體積：3μL。

質(zhì)譜條件：離子源：ESI源;檢測模式：多反應監(jiān)測（MRM）模式;掃描模式：正離子模式;干燥氣溫度： 325℃，流速：6.0 L/min;鞘氣溫度：300℃，流速：11.0L/min，定量離子對：593.3→285.3，碰撞能量：29eV;定性離子對：593.3→447.4，碰撞能量：17 eV;碎裂電壓380 V。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

對濃度為500.0μg/L的蒙花苷標準溶液在電噴霧離子源下分別進行正離子和負離子全掃描分析，結(jié)果顯示，正離子模式下獲得分子離子峰的響應較佳，因此選擇正離子模式下進行分析。采用子離子掃描方式進行二級質(zhì)譜分析，選取豐度較強、干擾較小的兩個特征碎片離子分別作為定量離子和定性離子。針對所選定量離子和定性離子對碰撞能量、干燥氣溫度和流速等條件進行進一步優(yōu)化，確定最終的質(zhì)譜分析條件。

2.2 流動相的選擇

牙膏樣品基質(zhì)較為復雜，為了更好地降低基質(zhì)對分析結(jié)果的影響，色譜分離采用了梯度洗脫的方式進行。對比考察了0.1%甲酸水溶液+甲醇、0.1%甲酸水溶液+乙腈、0.1%甲酸水溶液+0.1%甲酸乙腈溶液三組流動相的分析效果，結(jié)果顯示，三組流動相都能實現(xiàn)良好分離，但采用乙腈作為流動相時，蒙花苷的響應較好。因此，最終選取0.1%甲酸水溶液+乙腈作為流動相。優(yōu)化后的的總離子流色譜圖和提取離子流色譜圖如圖1所示。

圖1 蒙花苷總離子流色譜圖和提取離子流色譜圖

2.3 線性、檢出限和定量限

將系列標準工作溶液（1.3）按照1.5的分析條件進行測定，以定量離子對色譜峰面積（Y）為縱坐標，待測組分蒙花苷的質(zhì)量濃度X（μg/L）為橫坐標，繪制校準工作曲線。結(jié)果表明，蒙花苷在5.0～200.0μg/L范圍內(nèi)呈良好的線性相關(guān)性，線性回歸方程為Y=500.66X+174.70，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9987。方法檢出限（S/N=3）為0.015μg/g，方法定量限（S/N=10）為0.05μg/g。

2.4 方法的回收率和精密度

選擇未檢出蒙花苷的牙膏樣品作為加標基質(zhì)，分別加入一定體積的標準溶液，得到加標濃度分別為5.0、50.0、100.0μg/L的低、中、高3個加標濃度水平，每個濃度水平進行6次平行測定，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，三個濃度水平的平均回收率在91.4～95.0%之間，相對標準偏差（RSD）均小于3.70%。結(jié)果說明本方法準確性高、重現(xiàn)性好，可以滿足日常牙膏中蒙花苷的測定要求。

表1 不同濃度蒙花苷在牙膏樣品中加標回收率及RSD

2.5 實際樣品的檢測

從超市隨機購買5批外包裝標識含有野菊花提取成分的牙膏樣品，采用本文所建方法進行測定。結(jié)果顯示5批樣品均未檢出蒙花苷。

3 結(jié)論

本文建立了一種牙膏中野菊提取成分蒙花苷的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。方法簡單易行、靈敏可靠，可應用于實際牙膏樣品中蒙花苷的測定。對5批標識含有野菊花提取成分的牙膏樣品進行測定，結(jié)果均未檢出蒙花苷。

【參考文獻】

[1]王維娜，余琦.高速逆流色譜分離純化野菊花中蒙花苷和木犀草素[J].科技創(chuàng)新導報，2016，13（1）：159-160.

[2]QB/T 2966-2014，功效型牙膏[S].

[3]張旭，胡曉梅，羅霄，等.HPLC測定甘松中的蒙花苷[J].華西藥學雜志，2007，22（6）：690-692.

[4]朱露，雷鵬，劉海濤，等.HPLC同時測定密蒙花中毛蕊花苷、蒙花苷的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（13）：76-79.

[5]韓永成，龔海燕，劉偉，等.UPLC同時測定野菊花中蒙花苷和綠原酸含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（20）：88-90.

[6]黃蘭芷，劉毅，蔡艷華.RP-HPLC對野菊花藥材中蒙花苷和木犀草素的含量測定[J].中成藥，2009（8）.

[7]唐維宏，韋建華，馬云婷.HPLC測定密蒙花配方顆粒中蒙花苷含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013（20）.

[8]劉廣源，張琥，費振玉.高效液相色譜法測定牙膏中蒙花苷的含量[C].中國口腔護理用品工業(yè)學術(shù)研討會，2014.