程素平 董飛 王秋生 林發(fā)根 柳麗

摘要：于2019年4月份采取雙隨機(jī)的抽樣方法對(duì)海安市10個(gè)鎮(zhèn)5個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)、50個(gè)散養(yǎng)戶采集血樣共400份進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明，海安市豬瘟疫苗免疫抗體陽(yáng)性率平均為91.25%，平均阻斷率為74.89%;區(qū)鎮(zhèn)的抗體陽(yáng)性率平均為97.00%，平均阻斷率為79.81%;而規(guī)模豬場(chǎng)的抗體平均陽(yáng)性率74.00%，平均阻斷率65.07%?？贵w檢測(cè)對(duì)豬瘟免疫效果評(píng)價(jià)及免疫程序的制定有重要指導(dǎo)意義，對(duì)調(diào)整優(yōu)化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關(guān)重要。此次檢測(cè)結(jié)果表明，海安市除2個(gè)“先打后補(bǔ)”的場(chǎng)免疫效果略差外，其他場(chǎng)和由村防員統(tǒng)一組織防疫的豬場(chǎng)免疫抗體陽(yáng)性率均較高，良好的防疫質(zhì)量在重大動(dòng)物疫病防控中有不可替代的作用。

關(guān)鍵詞：豬瘟;阻斷率;免疫程序;海安市

中圖分類號(hào)：S858.28? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1007-273X（2019）10-0010-03

豬瘟是由豬瘟病毒引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。以發(fā)病急、高熱稽留和毛細(xì)血管壁變性引起廣泛出血、壞死等變化為特征，是一種傳染性強(qiáng)、病死率高的烈性傳染病，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。雖采取了免疫等防疫措施，降低了豬瘟的感染率和發(fā)病率;但因疫苗接種量大、面廣，防疫密度越來(lái)越高，在免疫劑量加大和免疫次數(shù)增加的情況下，并沒有使豬瘟得到徹底控制。江蘇省海安市目前雖無(wú)豬瘟大面積流行，但散發(fā)、慢性、非典型豬瘟?xí)r有發(fā)生，為及時(shí)掌握全市部分規(guī)模豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶的重大動(dòng)物疫病免疫情況，同時(shí)對(duì)各個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和村防員免疫效果進(jìn)行考核，于2019年4月采取雙隨機(jī)的抽樣方法對(duì)全市10個(gè)鎮(zhèn)5個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)、50個(gè)散養(yǎng)戶采集血樣共400份，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別進(jìn)行了豬瘟、豬口蹄疫、豬藍(lán)耳病的抗體檢測(cè)?，F(xiàn)將豬瘟檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 被檢血清樣品? 從2018年12月20日到2019年2月10日免疫記錄中抽取2名監(jiān)管員，每人抽4戶。如果抽樣的養(yǎng)殖戶該批生豬已出售或緩防的，順延到下一個(gè)農(nóng)戶;在做好生物安全的前提下，每頭豬前腔靜脈采血3～5 mL，每鎮(zhèn)30份樣品，全市共采集10個(gè)鎮(zhèn)50個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)（戶）和5個(gè)“先打后補(bǔ)”的規(guī)模豬場(chǎng)，因當(dāng)前為防控非洲豬瘟的關(guān)鍵時(shí)期，為避免因采樣等因素導(dǎo)致豬群發(fā)病，規(guī)模場(chǎng)的采樣均由豬場(chǎng)內(nèi)技術(shù)人員自己采樣并送至市獸醫(yī)站化驗(yàn)室。詳細(xì)記錄每份血液樣品的來(lái)源、免疫程序、疫苗生產(chǎn)廠家、批號(hào)、接種劑量等有關(guān)信息，其中規(guī)模豬場(chǎng)血樣100份、散養(yǎng)戶血樣300份，常規(guī)分離血清并編號(hào)，-20 ℃冷凍保存。

1.1.2? 檢測(cè)試劑和主要儀器? 豬瘟抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒（IDEXX，批號(hào)：M301）購(gòu)自上海賽嘉生物科技有限公司，酶標(biāo)儀RT-6000、Eppendorf移液器等其他儀器和耗材為本實(shí)驗(yàn)室自備。

1.2? 檢測(cè)方法

1.2.1? 檢測(cè)原理及方法? 利用阻斷ELISA原理檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒抗體，如果被檢樣品中存在豬瘟病毒抗體，就會(huì)阻斷辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬瘟病毒的單克隆抗體。單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的結(jié)合通過辣根過氧化物酶與底物的顯色程度進(jìn)行判定，用酶標(biāo)儀在單波長(zhǎng)450 nm或雙波長(zhǎng)450 nm 與650 nm測(cè)定該反應(yīng)體系的吸光度。當(dāng)被檢樣品中含有豬瘟病毒抗體（陽(yáng)性結(jié)果）時(shí)，顯色就會(huì)變淺，當(dāng)被檢樣品中不含有豬瘟病毒抗體（陰性結(jié)果）時(shí)，顯色就會(huì)變深。樣本的阻斷率可以通過450 nm波長(zhǎng)樣本吸光度與陰性對(duì)照吸光度的比值來(lái)確定。試驗(yàn)嚴(yán)格按照豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作。

1.2.2? 判定標(biāo)準(zhǔn)? 在陰性對(duì)照的OD450>0.5，陽(yáng)性對(duì)照血清的阻斷率>50%，試驗(yàn)結(jié)果成立的前提下，被檢樣品的阻斷率≥40%時(shí)判為陽(yáng)性，被檢樣品的阻斷率<40%時(shí)判為陰性。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 海安市各區(qū)鎮(zhèn)和“先打后補(bǔ)”規(guī)模場(chǎng)的豬瘟免疫抗體水平

檢測(cè)結(jié)果（表1）表明，2019年第一季度海安市豬瘟抗體陽(yáng)性率91.25%，平均阻斷率74.89%。5個(gè)“先打后補(bǔ)”的規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體平均陽(yáng)性率為74.00%、平均阻斷率為65.07%，10個(gè)鎮(zhèn)50個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的豬瘟抗體陽(yáng)性率平均為97.00%、平均阻斷率為79.81%，均高于國(guó)家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)，表明海安市豬瘟防疫情況較好，免疫效果達(dá)到較高水平。

2.2? 五個(gè)“先打后補(bǔ)”規(guī)模豬場(chǎng)的豬瘟免疫抗體水平

規(guī)模豬場(chǎng)的豬瘟免疫抗體水平有較大差異，有兩個(gè)場(chǎng)平均陽(yáng)性率低于國(guó)家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)（表2）。

2.3? 海安市10個(gè)鎮(zhèn)的豬瘟免疫抗體水平

海安市10個(gè)鎮(zhèn)的豬瘟免疫抗體水平均較好（表3），僅一個(gè)區(qū)鎮(zhèn)的抗體陽(yáng)性率低于90%，其余均高于90%，且平均阻斷率也達(dá)到79.81%，說(shuō)明海安市的豬瘟免疫水平在全體監(jiān)管員和防疫員的共同努力下取得了較好的效果，為重大動(dòng)物疫病的防控打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

3? 討論

豬瘟是我國(guó)中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）優(yōu)先凈化的12種動(dòng)物疫病之一，海安市通過政府購(gòu)買服務(wù)，防疫員包村包戶，每年進(jìn)行二次重大動(dòng)物疫病普免、夏季集中補(bǔ)免和消毒滅源三大行動(dòng)，同時(shí)監(jiān)督規(guī)模豬場(chǎng)按本場(chǎng)疫苗免疫程序進(jìn)行免疫并逐步完善綜合防控措施，使豬瘟得到一定程度的控制，因此多年來(lái)未曾見疫病大流行。

抗體檢測(cè)是評(píng)估豬瘟疫苗的免疫效果，制定科學(xué)免疫程序的重要手段，本次檢測(cè)采用美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)的豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒，該試劑盒被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)豬瘟抗體，評(píng)估豬場(chǎng)的免疫狀況，該試劑盒把阻斷率≥40%作為豬瘟疫苗抗體陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)，但據(jù)南文金等[1]報(bào)道，該試劑盒檢測(cè)豬瘟疫苗抗體的阻斷率達(dá)到50%時(shí)，豬瘟疫苗抗體水平相當(dāng)于中和抗體滴度1∶32，此水平的中和抗體水平對(duì)豬群具有保護(hù)力，實(shí)際生產(chǎn)中要以阻斷率≥50%且抗體合格率在90%以上才能達(dá)到比較理想的狀態(tài)。阻斷率大于40%小于50%只代表抗體陽(yáng)性，不代表中和抗體能抵抗豬瘟野毒侵襲。

檢測(cè)結(jié)果表明，2019年第一季度海安市豬瘟疫苗免疫抗體陽(yáng)性率平均為91.25%，平均阻斷率為74.89%。區(qū)鎮(zhèn)的抗體陽(yáng)性率平均為97.00%，平均阻斷率為79.81%;而規(guī)模豬場(chǎng)的抗體平均陽(yáng)性率74.00%，平均阻斷率65.07%，海安市重大動(dòng)物疫病的防疫工作是在監(jiān)管員的監(jiān)督下，防疫員領(lǐng)取政府統(tǒng)一招標(biāo)采購(gòu)的疫苗（全程冷鏈運(yùn)輸）上門給養(yǎng)豬戶進(jìn)行防疫并詳細(xì)記錄免疫時(shí)間、疫苗批號(hào)、生產(chǎn)廠家等信息，市重大動(dòng)物疫病指揮部定期或不定期進(jìn)行檢查，經(jīng)過近幾年的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，全市防疫密度和防疫質(zhì)量有了大幅提高，也多次得到省、市表?yè)P(yáng)。此次檢測(cè)結(jié)果也表明海安市豬瘟免疫效果較好，僅一個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)低于90%，并且阻斷率也在70%以上，與段正贏等[2]報(bào)道散養(yǎng)戶的飼養(yǎng)管理水平較低，免疫空白、免疫接種不當(dāng)，導(dǎo)致接種失敗或?qū)σ呙缃臃N工作不重視不一致。

本次采樣的5個(gè)“先打后補(bǔ)”的規(guī)模豬場(chǎng)的樣品均采自商品代群，雖然平均抗體陽(yáng)性率達(dá)到74.00%，稍高于國(guó)家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)，但有二個(gè)場(chǎng)低于70%，一個(gè)場(chǎng)正好是70%。因當(dāng)前為防控非洲豬瘟的關(guān)鍵時(shí)期，為避免因采樣等因素導(dǎo)致豬群發(fā)病，規(guī)模場(chǎng)的采樣均由豬場(chǎng)內(nèi)技術(shù)人員自己采樣并送至市獸醫(yī)站化驗(yàn)室。經(jīng)分析免疫程序等因素，A場(chǎng)保定人員感覺30 kg的豬比較好保定，采樣人員也沒有詳細(xì)詢問免疫時(shí)間，二免與采樣時(shí)間僅間隔20 d，與南文金[1]等報(bào)道二次免疫接種后23 d采集的樣品豬瘟疫苗抗體再次降低是一致的;而B場(chǎng)豬群采樣時(shí)，豬體重在90 kg左右，距離二免的免疫時(shí)間超過3個(gè)月，抗體合格率正好為70.00%，平均阻斷率只有60.73%，說(shuō)明豬瘟抗體在免疫三個(gè)月后開始下降;C場(chǎng)豬瘟抗體陽(yáng)性率和阻斷率均最低，二免時(shí)間距采樣間隔時(shí)間正好為一個(gè)月，按照常規(guī)應(yīng)當(dāng)是陽(yáng)性率最高的時(shí)間，該場(chǎng)不高反低，可能與母源抗體的高低、免疫程序、首免時(shí)間過早、疫苗質(zhì)量和操作程序有關(guān)，建議該豬場(chǎng)仔細(xì)分析原因，采購(gòu)質(zhì)量較好的疫苗，結(jié)合抗體監(jiān)測(cè)的結(jié)果，調(diào)整免疫程序科學(xué)免疫，以減少疫病的發(fā)生，提高豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。規(guī)模化豬場(chǎng)需根據(jù)初生仔豬母源抗體水平及消長(zhǎng)規(guī)律確定首免日齡。不同來(lái)源的仔豬根據(jù)母源抗體的高低來(lái)制定適合本場(chǎng)豬群豬瘟的免疫程序，不能一刀切[3]。

實(shí)驗(yàn)室免疫抗體檢測(cè)僅僅是一種手段，一次檢測(cè)結(jié)果只能說(shuō)明某段時(shí)間內(nèi)豬群的免疫狀況，通過此次免疫監(jiān)測(cè)，尤其是C規(guī)模豬場(chǎng)的首免時(shí)間可能不合適，造成仔豬或保育豬群免疫效果不佳，進(jìn)而出現(xiàn)免疫空檔期，一般而言，母源抗體的被動(dòng)免疫對(duì)新生仔豬十分重要，但與此同時(shí)也可能給疫苗接種帶來(lái)一定的影響，特別是干擾疫苗的首次免疫效果，母源抗體效價(jià)較高時(shí)，體內(nèi)未消失的母源抗體會(huì)中和一部分接種的弱毒疫苗并阻礙疫苗毒的復(fù)制，影響仔豬主動(dòng)免疫的產(chǎn)生，豬場(chǎng)應(yīng)根據(jù)母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律或根據(jù)連續(xù)監(jiān)測(cè)的結(jié)果，確定和調(diào)整最佳首免時(shí)間，通過免疫監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)豬群不同生長(zhǎng)階段是否出現(xiàn)免疫空檔期，及時(shí)加強(qiáng)免疫，并發(fā)現(xiàn)某些疫病的亞臨床癥狀，早期控制疫病，降低傳染病發(fā)生的幾率與風(fēng)險(xiǎn)。

豬瘟免疫是常規(guī)免疫，導(dǎo)致免疫失敗的原因有：①免疫程序不合理。有些豬場(chǎng)也包括部分規(guī)模豬場(chǎng)照搬其他豬場(chǎng)免疫程序，不符合本場(chǎng)實(shí)際情況，導(dǎo)致免疫失敗;仔豬首免日齡每個(gè)場(chǎng)都不一樣，應(yīng)根據(jù)本場(chǎng)母源抗體水平確定首免日齡;②豬場(chǎng)免疫抑制病的干擾，如高致病性豬藍(lán)耳病、偽狂犬、圓環(huán)病毒2型等均會(huì)對(duì)豬體造成免疫抑制，機(jī)體免疫應(yīng)答力下降，影響豬瘟免疫效果;③霉菌毒素也對(duì)豬體的免疫力有影響;④疫苗質(zhì)量問題。養(yǎng)殖場(chǎng)在選擇疫苗時(shí)不能只關(guān)注價(jià)格，也要關(guān)注疫苗的質(zhì)量，如抗原含量，免疫維持的時(shí)間等;⑤規(guī)模豬場(chǎng)在選擇防疫人員時(shí)要注重人員素質(zhì)，防止規(guī)模場(chǎng)因防疫數(shù)量較多，如若待遇達(dá)不到一定的要求可導(dǎo)致防疫員有厭戰(zhàn)情緒而導(dǎo)致防疫質(zhì)量下降，或在規(guī)定的加免時(shí)間內(nèi)不能及時(shí)加免導(dǎo)致免疫失敗。

養(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)同時(shí)注意以下幾個(gè)方面的工作：一是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和豬場(chǎng)環(huán)境控制;二是保證動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)均衡;三是選擇合適、質(zhì)量過關(guān)的疫苗與藥物，制訂合理的免疫和用藥方案，充分發(fā)揮疫苗及藥物的作用，做好新老疫病的控制和預(yù)防工作;四是實(shí)行嚴(yán)格的生物安全措施，特別是當(dāng)前處在防控非洲豬瘟的關(guān)鍵時(shí)刻，加強(qiáng)豬場(chǎng)衛(wèi)生消毒，嚴(yán)格把關(guān)豬場(chǎng)引種和病死豬無(wú)害化處理;五是豬場(chǎng)特別是規(guī)?；i場(chǎng)要做好疫病的定期診斷與監(jiān)測(cè)，有針對(duì)性采取防控措施。

抗體檢測(cè)對(duì)豬瘟免疫效果評(píng)價(jià)及免疫程序的制定有重要指導(dǎo)意義，對(duì)調(diào)整優(yōu)化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關(guān)重要。此次檢測(cè)結(jié)果表明，海安市除2個(gè)“先打后補(bǔ)”的場(chǎng)免疫效果略差外，其他場(chǎng)和由村防員統(tǒng)一組織防疫的豬場(chǎng)免疫抗體陽(yáng)性率均較高，良好的防疫質(zhì)量在重大動(dòng)物疫病防控中有不可替代的作用。海安市每年組織4次集中監(jiān)測(cè)，既是對(duì)村防員進(jìn)行考核，也對(duì)規(guī)模場(chǎng)的防疫有促進(jìn)作用，及時(shí)掌握豬瘟群體免疫力，對(duì)豬瘟的預(yù)防、控制和凈化具有積極的推動(dòng)作用，同時(shí)對(duì)抗體不合格的豬場(chǎng)分析原因，適時(shí)補(bǔ)免，結(jié)合非洲豬瘟防控，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶宣傳生物安全的重要性，督促養(yǎng)殖戶加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，搞好綜合防控工作，提高豬群的抵抗力，保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] 南文金，黃健強(qiáng)，胡鴻惠，等.某規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體水平的監(jiān)測(cè)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，37（3）：120-123.

[2] 段正贏，周志忠，周丹娜，等.豬瘟疫苗免疫抗體檢測(cè)與分析[J].養(yǎng)豬，2018（4）：105-106.

[3] 程素平，丁永龍，張小彬，等.不同來(lái)源的仔豬豬瘟母源抗體檢測(cè)結(jié)果比較[J].畜牧與獸醫(yī)，2015，47（4）：141-142.