李偉，劉冬冬，吳丹，李春輝

（⒈吉林省動物疫病預(yù)防控制中心 長春 130062；⒉永吉縣西陽鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 吉林吉林 132100）

雞傳染性喉氣管炎（ILT）是一種接觸性病毒性傳染病，主要是通過呼吸道和消化道感染，患病雞和帶毒雞是主要的傳染源，雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）感染后有6～12 d 的潛伏期，病程達7～15 d，感染康復(fù)后的雞可以長期帶毒排毒，成為本病的重要傳染源[1]。臨床上雞傳染性喉氣管炎病毒在同群傳播較快，所以，發(fā)病雞一定要早期隔離和診斷，本文成功分離并鑒定了一株雞傳染性喉氣管炎病毒，將分離和鑒定過程介紹如下。

1 發(fā)病情況

某蛋雞場飼養(yǎng)蛋雞2,000 只，2019 年5 月，開始出現(xiàn)蛋雞產(chǎn)蛋下降，病雞出現(xiàn)呼吸困難，流鼻液和眼淚，咳嗽，呼吸道有帶血的黏液，蛋雞采食下降，精神沉郁，產(chǎn)蛋品質(zhì)下降，蛋殼薄，雞蛋形狀不規(guī)則，發(fā)病雞死亡率10%左右。

2 病理剖檢

取病死蛋雞剖檢可見喉頭黏膜有出血點，氣管黏膜充血、出血并有大量黏液，肺充血、出血，肝臟具有出血點，其它臟器病變特征不明顯。

3 實驗室診斷

3.1 PCR 檢測

無菌取病死雞的喉頭和氣管等病變組織，按1:3 比例加入滅菌生理鹽水，用研磨器研磨成組織勻漿，離心機12,000r/min 離心15 min。吸取上清液做PCR 檢測，并保存一部分上清液用于病毒分離。按照參考文獻[2]的方法進行雞傳染性喉氣管炎病毒的PCR檢測，PCR 產(chǎn)物跑核酸電泳觀察，結(jié)果表明PCR 擴增片段大小690 bp 左右，與預(yù)期大小一致，說明雞傳染性喉氣管炎病毒核酸陽性。

3.2 病毒分離

將上面保存的組織上清液用0.45 μm 濾膜過濾除菌，尿囊膜途徑接種10 日齡SPF 雞胚10 枚，0.2 mL/胚，同時選擇10 枚SPF雞胚接種滅菌生理鹽水作為空白對照，接種后的雞胚放置在37 ℃溫箱培養(yǎng)，每天照蛋觀察雞胚存活情況，死胚隨時取出，剖檢死胚的病變情況，接種后144 h 收集接種病毒雞胚的尿囊膜和尿囊液，作為第1 代分離毒，按照同樣的方法連續(xù)接種SPF 雞胚并傳至第3 代分離毒。每一代雞胚分離毒經(jīng)PCR 檢測均雞傳染性喉氣管炎病毒核酸陽性，每一代雞胚分離毒在雞胚尿囊膜上均呈現(xiàn)出痘斑病變，尿囊膜增厚明顯，胚體表面有出血點，氣管粘膜有出血和充血，而接種生理鹽水的對照組雞胚沒有死亡和病變。

4 討論

雞傳染性喉氣管炎病毒在自然情況下主要感染雞，各種雞都易感，根據(jù)臨床表現(xiàn)分為喉氣管炎型和結(jié)膜型。喉氣管炎型的主要臨床表現(xiàn)為呼吸困難，咳嗽帶血，血痰，喉頭出血。結(jié)膜型的主要臨床表現(xiàn)為眼結(jié)膜紅腫，發(fā)炎，流淚，眼部有膿性分泌物，蛋雞產(chǎn)蛋下降[3]。發(fā)生雞傳染性喉氣管炎病毒感染后應(yīng)該及時隔離病雞，應(yīng)用抗生素治療防止發(fā)生繼發(fā)感染，健康雞群及時接種雞傳染性喉氣管炎病毒疫苗，養(yǎng)雞場內(nèi)外徹底消毒，防止病毒擴散傳播。雞傳染性喉氣管炎病毒疫苗一般采用滴鼻、點眼的方式進行疫苗免疫接種，在進行疫苗免疫接種時防止發(fā)生遺漏，在沒有發(fā)生過雞傳染性喉氣管炎病毒感染的養(yǎng)雞場可以不進行疫苗免疫接種，在雞傳染性喉氣管炎病毒高發(fā)地區(qū)應(yīng)該做好疫苗的免疫接種工作，疫苗免疫接種應(yīng)該嚴格按照操作說明進行，確保免疫劑量，以免發(fā)生免疫失敗[4]。雞傳染性喉氣管炎病毒在一年四季都可以發(fā)生，成年雞感染后癥狀較重，雛雞感染后臨床表現(xiàn)輕，為了預(yù)防雞傳染性喉氣管炎病毒感染，一定要加強雞群的飼養(yǎng)管理，采取全進全出的養(yǎng)殖模式，早期診斷對于防控雞傳染性喉氣管炎病毒十分重要，所以要定期觀察雞群的臨床表現(xiàn)，出現(xiàn)呼吸困難的病雞要立即隔離，并采集病雞的喉頭氣管分泌物送實驗室進行PCR 診斷，PCR 檢測方法是進行早期診斷的最好方法，可以對潛伏感染期的病毒進行檢測，有助于雞傳染性喉氣管炎病毒的早期診斷。雞傳染性喉氣管炎病毒的發(fā)生與雞舍的養(yǎng)殖環(huán)境密切相關(guān)，雞舍要定期通風(fēng)換氣，降低飼養(yǎng)密度，降低舍內(nèi)粉塵和氨氣濃度[5]。由于康復(fù)雞可以帶毒排毒，所以康復(fù)雞不能與易感雞群混合飼養(yǎng)，康復(fù)后也應(yīng)該淘汰處理?？傊?，雞傳染性喉氣管炎病毒是一種嚴重的急性呼吸道病毒傳染病，其發(fā)生和流行十分普遍，目前呈世界性分布，在養(yǎng)殖場發(fā)病后會導(dǎo)致雞死亡和蛋雞產(chǎn)蛋下降，嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展，造成巨大經(jīng)濟損失，所以在規(guī)模雞場一定要做好雞傳染性喉氣管炎病毒的防控，嚴防本病的發(fā)生和流行。