銀 航，竇雪絨，張?jiān)葡?，?正，文 超，鄭廣學(xué)，張 寧

(1.韓城市花椒管理局,陜西 韓城 715400；2.韓城市花椒研究所,陜西 韓城 715400；3.陜西金稻田農(nóng)資貿(mào)易有限責(zé)任公司,陜西 韓城 715400；4. 韓城市寧寧花椒合作社，陜西 韓城 715400)

花椒(ZanthoxylumbungeanumMaxim.)是蕓香科花椒屬的多年生落葉小喬木[1]，因其果皮作為生活常見的調(diào)味料、中藥而成為百姓喜愛的重要經(jīng)濟(jì)作物。近年來，花椒的栽培面積不斷擴(kuò)大，從而也使得以花椒為食的害蟲逐年擴(kuò)增。危害渭北平原花椒最主要的害蟲之一就是花椒蚜蟲，即棉蚜(AphisgossypiiGlover)，屬同翅目、蚜科昆蟲，它們不僅吸食花椒嫩芽、嫩葉的汁液而導(dǎo)致葉片卷曲，而且其大量的排泄物會導(dǎo)致花椒被真菌感染而患上煤污病(或煙煤病)[2～3]，直接限制了花椒樹的生長和花椒的商品價(jià)值，因此如何控制蚜蟲是廣大椒農(nóng)群眾長期面臨的難題。近年來，化學(xué)農(nóng)藥的使用量逐年遞增，吡蟲啉、毒死蜱、甚至氧化樂果等化學(xué)農(nóng)藥的使用不僅促使蚜蟲進(jìn)化產(chǎn)生了抗藥性，更重要地，它們直接導(dǎo)致了產(chǎn)品花椒中的高農(nóng)殘，從而直接限制了花椒品質(zhì)的提高和可持續(xù)發(fā)展。為此，研究通過生物防治的辦法，逐步控制、減少化學(xué)農(nóng)藥，以至于最后取代它們，是非常有意義的課題。

球孢白僵菌(Beauveriabassiana)子囊菌門、子囊菌綱、肉座菌目、蟲草菌科、白僵菌屬的真菌，從一百八十多年前家蠶上發(fā)現(xiàn)以來，已經(jīng)被證明對700多種昆蟲和蜱螨類有較好的寄生防治作用，同時(shí)對于天敵如瓢蟲等毒性較低，同時(shí)對人體無毒害作用，是一種較理想的生物農(nóng)藥[4～5]。已有研究證明，球孢白僵菌對于棉蚜是有毒殺作用的，而且其毒殺機(jī)理為內(nèi)寄生于棉蚜體內(nèi)大量繁殖，釋放孢子和毒素，從而導(dǎo)致昆蟲死亡[4]。為此，我們推測，球孢白僵菌對于花椒蚜蟲的生物防治應(yīng)當(dāng)是有效的。

此前，王峰等研究指出，球孢白僵菌(B.bassiana)對于蘿卜蚜(Lipaphiserysimi)防治效果有限、作用緩慢的原因，很可能是蚜蟲被侵染后迅速蛻皮擺脫了白僵菌所致[6]。同時(shí)，棉蚜一旦成為成蟲，通過飛行進(jìn)行轉(zhuǎn)移、大量產(chǎn)下蟲卵等行為大大提高了防治的難度。因此為了提高生物防治的效果，抑制棉蚜變態(tài)，從而令其維持幼年?duì)顟B(tài)是有利的。保幼激素(Juvenile Hormone, JH)由昆蟲的咽側(cè)體分泌，是能夠在昆蟲的幼蟲、若蟲(蛹)、成蟲等變態(tài)階段中其決定作用的調(diào)節(jié)物質(zhì)之一，它不僅能夠控制昆蟲維持在幼年?duì)顟B(tài)[7]，同時(shí)還對成蟲的發(fā)育、生殖有重要影響[8]。已有研究表明，雖然低濃度的保幼激素可以促進(jìn)昆蟲生長和延長壽命，但是高達(dá)5 μg·mL-1的可以直接致死昆蟲(如棉鈴蟲Helicoverpaarmigera)[9]。為了驗(yàn)證蚜蟲通過蛻皮擺脫白僵菌的假設(shè)，筆者試驗(yàn)并不打算采用如此高濃度的保幼激素，而是采用較高濃度(1 μg·mL-1)來抑制蚜蟲的生長和變態(tài)，以提高白僵菌的田間試驗(yàn)效果。

試驗(yàn)首次在花椒上進(jìn)行白僵菌生物防治蚜蟲的大田試驗(yàn)，通過篩選不同的孢子濃度，以期優(yōu)選適合生產(chǎn)實(shí)踐所需的濃度水平。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地自然概況

試驗(yàn)地設(shè)在陜西省韓城市龍門鎮(zhèn)謝村雷江濤等居民家的花椒園中(北緯35°34′37°，東經(jīng)110°31′47°，海拔388 m)。該地是渭北黃土臺塬向黃河河谷川道過渡區(qū)域，位于北半球暖溫帶，屬典型的大陸性季風(fēng)氣候，春夏季長，秋冬季短，年平均日照2 273 h左右，多年無霜期209 d，常年平均氣溫13.5 ℃，≥10℃積溫約為4 460 ℃，冬季最低溫在-10 ℃以上(極端情況出現(xiàn)-16 ℃)，年較差27.7 ℃；降雨量適中，年際變化較大，平均值562.7 mm[10]。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)植株是20年生的韓城大紅袍花椒，樹木年齡相似、長勢相似、管理水平相同，樹木密度為55 株·hm-2。供試時(shí)所有花椒樹嫩枝上分布有蚜蟲卵和幼蟲，田間蚜蟲分布密度相似，約為每幼枝300只。試驗(yàn)試劑為150億孢子·g-1的球孢白僵菌孢子粉(購自廣東多宇多生物科技有限公司)、30 mg·mL-1昆蟲保幼激素(購自蘇源科技)。

1.3 試驗(yàn)方法

該試驗(yàn)于花椒蚜蟲的爆發(fā)期(4-5月)對花椒全株噴施球孢白僵菌懸濁液或球孢白僵菌、保幼激素的混合懸濁液。球孢白僵菌孢子粉懸濁液設(shè)置4個濃度梯度，加入1 μg·mL-1保幼激素的試驗(yàn)組濃度梯度和白僵菌試驗(yàn)組的濃度梯度相同，分別以清水、1 μg·μL-1保幼激素溶液作為對照，設(shè)置3個重復(fù)。各試驗(yàn)組濃度設(shè)置如表1。

表1 各試驗(yàn)組處理濃度

用手搖式噴霧器噴施花椒全株(嫩枝、果穗等蚜蟲集中分布區(qū)為主)，以浸潤花椒嫩枝、果穗至藥液不滴下為度。噴施時(shí)間為下午14:00至16:00。

其中，1010個孢子·mL-1的兩組由于懸濁液濃度太大，堵塞噴頭，無法進(jìn)行全株噴施，只對記錄數(shù)據(jù)的小枝進(jìn)行了刷涂處理。

1.4 測定方法

噴施以后每日下午14:00記錄試驗(yàn)組和對照組各標(biāo)記嫩枝上的死亡蟲口數(shù)和存活蟲口數(shù)，連續(xù)記錄7 d。已有研究表明，白僵菌的侵染效率和溫度、濕度等環(huán)境條件有關(guān)系[11]，因此記錄蟲口數(shù)的同時(shí)記錄各組環(huán)境條件。

采用如下的Abbott公式計(jì)算校正死亡率[12]：

式中，T和T0分別是試驗(yàn)組(防區(qū))在測量點(diǎn)的蟲口數(shù)、初始蟲口數(shù)；CK和CK0分別是對照組(未防區(qū))在測量點(diǎn)的蟲口數(shù)、初始蟲口數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度球孢白僵菌對花椒蚜蟲的毒力

從表3的第一行來看，在不同的溫度下，對照組蚜蟲的蟲口數(shù)不一樣，跟溫度變化、風(fēng)力變化是有關(guān)的。大致呈現(xiàn)出溫度上升、相對濕度降低等條件有利于蚜蟲繁殖，這和已有結(jié)論是吻合的[13～14]。

表3中B7～B10分別為孢子數(shù)107～1010個·mL-1的蚜蟲密度變化，7 d以后的致死率分別可以達(dá)到78.7%、90.4%、92.7%、96.6%。由此表明，除了107個孢子·mL-1的濃度對于花椒蚜蟲的防治效果稍微遜色一些，其余較高濃度球孢白僵菌對于花椒蚜蟲防治的最終效果是比較理想的。

2.2 不同濃度球孢白僵菌與保幼激素聯(lián)用的效果

表3中J組數(shù)據(jù)表明單用1 μg·mL-1保幼激素并不能達(dá)到防治蚜蟲的效果。最終死亡率控制在10%左右，表明單用保幼激素可以一定程度地抑制蚜蟲的生長。

從BJ7～BJ10(107～1010孢子數(shù)·mL-1球孢白僵菌+1 μg·mL-1保幼激素)結(jié)果來看，噴施試劑7 d后的致死率分別達(dá)到了90.6%、96.5%、93.4%、98.7%。其中107個孢子·mL-1的一組致死率相比于不用保幼激素的一組(B7)，其效果顯著提高，證明抑制昆蟲變態(tài)從而使其維持在幼年期有助于提高生物防治的效果。從BJ8組來看，聯(lián)用保幼激素對于108個孢子·mL-1的球孢白僵菌而言，也是有利于提高其防治效果的。

對于BJ9組而言，雖然其致死率相比于B9而言有提高，但是其防治效果卻不如BJ8一組。從實(shí)地考察來看(圖2)，由于109個孢子·mL-1白僵菌的濃度已經(jīng)過大，加上蚜蟲蜜露等分泌物的作用，使得懸濁液不能很好地在葉片表明鋪展，形成一個一個“白僵菌島”，而蚜蟲幼蟲則集中趨向于島間區(qū)域分布。對于單用白僵菌的試驗(yàn)組這種劣勢還不是很明顯，而聯(lián)用保幼激素時(shí)，這使得保幼激素對于在島間分布的蚜蟲幼蟲失去了有效的作用，因此造成BJ9的試驗(yàn)效果并不如BJ8的試驗(yàn)效果好。

2.3 各試驗(yàn)組毒力的回歸分析

將各天的累積校正死亡率對時(shí)間作圖，結(jié)果如圖1所示。從圖1結(jié)果來看，中低濃度白僵菌對花椒蚜蟲的作用大致呈現(xiàn)出折線形的趨勢，即1～2 d作用比較緩慢，第3天出現(xiàn)明顯的增加，此后緩慢增加。由此說明，白僵菌侵入棉蚜并在其體內(nèi)大量繁殖的而爆發(fā)導(dǎo)致死亡的高峰在第3天左右。用三次方程擬合數(shù)據(jù)，計(jì)算致死中時(shí)LT50。從計(jì)算結(jié)果來看，隨著白僵菌濃度的提高，LT50不斷減小。聯(lián)用保幼激素以后，LT50出現(xiàn)明顯的下降，108個孢子·mL-1的LT50直接從90.8 h減少到45.8 h，其余各組也有相應(yīng)的減少。說明保幼激素的使用能夠顯著提高白僵菌在早期侵入蚜蟲體內(nèi)的過程，有助于在實(shí)踐上提高白僵菌的使用效果。

表2 試驗(yàn)期間的環(huán)境因子

注：第0天指的是噴施藥劑的時(shí)間點(diǎn)。

表3 各實(shí)驗(yàn)組的累積校正死亡率 (%)

注：表中數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。負(fù)值表示蟲口數(shù)增加而非減少。

表4 各試驗(yàn)組對花椒蚜蟲的毒力方程

注：第0天指的是噴施藥劑的時(shí)間點(diǎn)。

3 結(jié)論

筆者試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在其他作物和蚜科昆蟲上試驗(yàn)的結(jié)果一致，球孢白僵菌對于花椒蚜蟲有較好的防治效果。考慮經(jīng)濟(jì)支出、噴施難易程度等因素，108個孢子·mL-1的濃度已經(jīng)能夠達(dá)到比較好的效果，在試驗(yàn)期間能夠達(dá)到致死率90.4%的好結(jié)果。此外，保幼激素和球孢白僵菌聯(lián)用能夠有效地增加球孢白僵菌的防治效果，108個孢子·mL-1和1 μg·mL-1保幼激素能夠?qū)⒀料x致死率有效提高到96.5%，該結(jié)果是在沒有應(yīng)用任何化學(xué)農(nóng)藥的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的，十分具有推廣價(jià)值。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，雖然1010個孢子·mL-1的球孢白僵菌能夠?qū)崿F(xiàn)快速、高效的防治，在3 d內(nèi)就實(shí)現(xiàn)了75%以上的致死率；但是由于懸濁液濃度十分大，在實(shí)踐上應(yīng)用十分困難。在試驗(yàn)中雖然能夠通過刷涂進(jìn)行大田試驗(yàn)，但是實(shí)際農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中推廣還有難度。從實(shí)踐效果來看，其實(shí)從109個孢子·mL-1開始，其懸濁液濃度之高已經(jīng)導(dǎo)致在花椒葉上的有效鋪展變得困難。

(A) 對照 (B) B8 (C) B9

(A) BJ8 (48 h) (B) B8 (168 h)

實(shí)際上，在第4天時(shí)已經(jīng)明顯地產(chǎn)生作用，但是109個孢子·mL-1噴施葉片上的“白僵菌島”仍然清晰可見，而少量蚜蟲就分布在白僵菌島的間隙。

在實(shí)踐中，白僵菌究竟是通過何種機(jī)理侵染棉蚜是一個很值得關(guān)注的問題。谷祖敏等指出[17]，溫度26℃和相對濕度90%以上是有利于白僵菌侵染的，在筆者試驗(yàn)中(表1)，溫度條件是符合的，而環(huán)境濕度低于實(shí)驗(yàn)室得出的較佳濕度。從試驗(yàn)實(shí)際來看(圖2)，施加保幼激素的各組較早地出現(xiàn)了“僵蟲”，而未聯(lián)用保幼激素的各組直至最后蚜蟲死亡呈現(xiàn)白色蟲狀也沒有觀察到“僵蟲”。

由此可見，聯(lián)用保幼激素有利于白僵菌直接侵染、寄生棉蚜，并且萌發(fā)菌絲而形成“僵蟲”，這是聯(lián)用保幼激素較好的原因之一。而單用白僵菌在后期實(shí)際上也達(dá)到了較好效果，說明在相對濕度較低時(shí)，單獨(dú)存在的白僵菌孢子是通過口腔攝入而為昆蟲所吸收，從而達(dá)到在昆蟲體內(nèi)繁殖而殺滅昆蟲的效果。

綜上所述，球孢白僵菌以及和保幼激素的聯(lián)用可以較好地防治花椒蚜蟲(棉蚜)，具有推廣的意義。從后續(xù)觀察來看，噴施白僵菌的各樹在10 d左右仍然沒有復(fù)發(fā)蚜蟲，證明白僵菌具有一定的持續(xù)性。目前已有研究證明[6]，球孢白僵菌和部分化學(xué)農(nóng)藥的聯(lián)用能夠更好地發(fā)揮作用，且球孢白僵菌和很多化學(xué)農(nóng)藥具有較好的兼容性，能夠減輕化學(xué)農(nóng)藥的用量。為此，進(jìn)一步探討球孢白僵菌和減量化學(xué)農(nóng)藥的應(yīng)用防治花椒的蟲害是十分有意義的。

致謝：

試驗(yàn)的研究得到了韓城市人社局、韓城市市場監(jiān)管局食品藥品檢測中心、韓城市新城二中等單位的大力支持，在此表示感謝！韓城市龍門鎮(zhèn)謝村雷會勛等居民為筆者試驗(yàn)提供了場所和農(nóng)具支持，在此表示感謝！