吳德標(biāo) （江蘇省鹽城市鹽都區(qū)家畜改良站 224056）

在現(xiàn)代豬的人工授精操作過(guò)程中，造成精子死亡的主要原因除了精子本身先天性的脆弱和衰老而外，稀釋液的優(yōu)劣是關(guān)系到精液體外存活時(shí)間長(zhǎng)短的一個(gè)非常重要的因素，精液的稀釋不僅是增加精液的容量，還在于能使精液經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的保存和較長(zhǎng)距離的運(yùn)輸后仍能繼續(xù)使用。因此，養(yǎng)豬場(chǎng)如何進(jìn)行豬精液稀釋液的配制、消毒及檢測(cè)工作，顯得十分重要，實(shí)際操作務(wù)必做到嚴(yán)肅認(rèn)真，一絲不茍。筆者結(jié)合自身工作實(shí)踐，在具體操作過(guò)程中，應(yīng)切實(shí)注意以下四個(gè)方面。

1 配方與藥品

稀釋液配方種類很多，總的來(lái)說(shuō)，稀釋液的配方是由簡(jiǎn)單到復(fù)雜，然后又從復(fù)雜回歸到簡(jiǎn)單，使用的配方(葡萄糖—檸檬酸鈉液)就是一種比較簡(jiǎn)單的配方，具有取材容易、配置方便、價(jià)格較低、效果較好等優(yōu)點(diǎn)。配置稀釋液的各類藥物原料品質(zhì)要純凈，盡可能選用化學(xué)純和分析純制劑，以盡量減少藥品原料中的雜質(zhì)對(duì)于精液保存的影響。

1.1 葡萄糖

用來(lái)補(bǔ)充精子代謝過(guò)程中消耗的能量，由于精子代謝只是單純的分解作用，而不能通過(guò)同化作用把外界物質(zhì)變成自身的成分，所以只能使用最簡(jiǎn)單的能量物質(zhì),葡萄糖即是其中之一，由實(shí)踐得知，用注射用的葡萄糖為好，比例占5%～6%。

1.2 檸檬酸鈉

檸檬酸鈉是一種緩沖物質(zhì)，用于維持經(jīng)驗(yàn)相對(duì)恒定的pH值，避免精子代謝產(chǎn)物對(duì)于精液品質(zhì)的影響，市售品為檸檬酸三鈉或枸橡酸鈉，由于本品用量較小，故意使用分析純的為好。比例占0.3%～0.5%。

1.3 乙二胺四乙酸二鈉

本品具有保護(hù)精子抗冷休克的作用，又能改變精子細(xì)胞膜的通透力來(lái)降低精子的果糖分解，抑制精子的活動(dòng)，從而延長(zhǎng)精子的壽命，同時(shí)也是一種螯合劑，可以使精液稀釋液中所含不利于精子存活的一些金屬離子變成穩(wěn)定的絡(luò)合物，以減少對(duì)精子的傷害。生產(chǎn)上常用乙二胺四乙酸二鈉，本品以用分析純?yōu)楹茫壤?.1%。

1.4 水

宜用純凈新鮮的蒸餾水。水質(zhì)的好壞也是稀釋液質(zhì)量?jī)?yōu)劣的決定性因素之一，所用蒸餾水最好是自制的，要符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 抗生素

采取的精液難免要被一些細(xì)菌和有害微生物污染，因此必須在稀釋時(shí)加入一定的抗菌物質(zhì)，來(lái)抑制細(xì)菌及有害微生物的生長(zhǎng)繁殖。多年的實(shí)踐證明用慶大霉素能有效地抑制細(xì)菌，并對(duì)精子無(wú)傷害作用。用量為1萬(wàn)IU/100ml。

2 藥物的稱量和溶解

一般配置稀釋液時(shí)都用天平來(lái)稱取藥品，用量杯來(lái)量取水，需要注意的是，稱、量一定要準(zhǔn)確無(wú)誤。所有藥品必須充分溶解，特別是乙二氨四乙酸二鈉和檸檬酸鈉這些比較難溶解的藥品，配制時(shí)可以分兩步進(jìn)行，第一步是把所稱的藥品放入錐形瓶?jī)?nèi)，加入適量蒸餾水加熱使之充分溶解；第二步再加入蒸餾水定容到所需要的量，并且充分?jǐn)嚢杈鶆颉Ｅ渲煤玫南♂屢罕仨氝M(jìn)行過(guò)濾，保證能把所有的雜質(zhì)完全過(guò)濾掉，嚴(yán)格防止過(guò)濾過(guò)程中蚊、蠅、螞蟻等昆蟲(chóng)的污染。

3 稀釋液的消毒

（1）稀釋液本身是一種培養(yǎng)基，如被細(xì)菌污染，造成的后果是可想而知的，因此，配置好的稀釋液必須進(jìn)行嚴(yán)格的消毒滅菌。以高溫高壓滅菌效果為最好，采用高壓消毒鍋來(lái)進(jìn)行稀釋液的消毒滅菌工作。（2）使用時(shí)可將稀釋液裝入500ml潔凈的鹽水瓶里，塞上瓶塞并用紗布?jí)K包裹扎好扎緊，依次放入內(nèi)膽中，蓋上鍋蓋，擰緊環(huán)狀壓蓋螺帽，關(guān)閉放氣閥，接通電源進(jìn)行加熱。當(dāng)壓力升到0.3kg/cm2(約合4.2磅)時(shí)打開(kāi)放氣閥，放出高壓鍋內(nèi)冷氣，使指針回落到0位，然后再關(guān)閉放氣閥，繼續(xù)加熱。當(dāng)壓力重新上升達(dá)到0.7kg/cm2(10磅)時(shí)，此時(shí)鍋內(nèi)溫度已經(jīng)達(dá)到115℃，可通過(guò)控制電源的開(kāi)關(guān)來(lái)維持鍋內(nèi)的壓力和溫度，使之恒溫恒壓維持0.5h，然后打開(kāi)放氣閥慢慢放氣，使指針再冷回落到零位時(shí)打開(kāi)鍋蓋，取出稀釋液瓶冷卻備用。

4 稀釋液的檢測(cè)

消毒好的稀釋液必須經(jīng)過(guò)檢測(cè)合格后方能交付使用，檢測(cè)主要使用二種方法：

4.1 pH測(cè)定

（1）pH的變化，對(duì)精子的活動(dòng)力和代謝的影響都很大，在18～20℃室溫條件下，當(dāng)pH為6.4精子處于可逆性的“休眠”狀態(tài)，所以稀釋液的pH宜在6.4～6.5之間。（2）測(cè)定稀釋液應(yīng)在消毒后待溫度降至室溫時(shí)測(cè)定，可用pH6～8精密試紙進(jìn)行測(cè)定，以稀釋液滴在試紙上半秒鐘內(nèi)與標(biāo)準(zhǔn)比色板比較，得出pH，有條件時(shí)也可用酸度計(jì)測(cè)定，用酸度計(jì)測(cè)定時(shí)要注意校正溫度并正確進(jìn)行酸度計(jì)的標(biāo)定，以免誤差。

4.2 滲透壓測(cè)定

（1）滲透壓對(duì)于精子來(lái)說(shuō)有著與pH相同的重要性，通常要求稀釋液與精液保持等滲，滲透壓出現(xiàn)異常時(shí)會(huì)損害精子的代謝和活力，一般來(lái)說(shuō)低滲比高滲有更大的危害性。（2）測(cè)定滲透壓用貝克曼溫度計(jì)(示差溫度計(jì))來(lái)測(cè)定稀釋液的冰點(diǎn)下降度(△t)，然后再除以一個(gè)常數(shù)1.86來(lái)計(jì)算出克分子濃度(即滲透壓)。純水在0℃開(kāi)始結(jié)冰，0℃是純水的冰點(diǎn)，但當(dāng)水中溶解有其它物質(zhì)時(shí)就不會(huì)在0℃時(shí)開(kāi)始結(jié)冰而在0℃以下的某一個(gè)溫度點(diǎn)時(shí)開(kāi)始結(jié)冰，而且隨著這種溶質(zhì)的濃度升高而開(kāi)始結(jié)冰的溫度點(diǎn)(這種溶液的冰點(diǎn))也就逐步降低，這種溶液的冰點(diǎn)與純水之間叫冰點(diǎn)下降度，常用△“ t”來(lái)表示。（3）用貝克曼溫度計(jì)測(cè)定公豬精液，稀釋液時(shí)的具體操作步驟如下：

4.2.1 器材的準(zhǔn)備 需要準(zhǔn)備的器材有，貝克曼溫度計(jì)一支，滴定臺(tái)一架，1000ml量杯一只，冰若干，粗鹽若干，鐵絲圈一個(gè)，20×15試管若干支。將冰塊置于1000ml量杯中上面撒些粗鹽，洗凈的試管加入蒸餾水，插入冰塊中降溫后備用。

4.2.2 溫度計(jì)的調(diào)整 （1）貝克曼溫度計(jì)是一只長(zhǎng)56cm的玻璃管制成的，玻璃內(nèi)部上下各有一個(gè)水銀泡，中間有從0～5的刻度，每一刻度間又分成100等份，上端水銀泡為—U狀細(xì)管，內(nèi)有貯備水銀，通過(guò)球狀閥可與下端水銀泡相通，以便調(diào)節(jié)下端水銀泡水銀的多少。（2）調(diào)整時(shí)手握溫度計(jì)，使溫度計(jì)傾斜呈倒置狀態(tài)，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)溫度計(jì)使U型管中的水銀與溫度計(jì)頂端的球形閥相接，然后用另一手掌握住下端水銀泡(由于溫度計(jì)處于倒置狀態(tài)，故此時(shí)下端水銀泡在上方)，借助手溫使水銀柱上升并通過(guò)球形閥與U型管中的貯備水銀相接通。水銀的多少調(diào)節(jié)好后，可用左手握溫度計(jì)的上部，并用右手中指輕輕碰擊溫度計(jì)，使U型管中的水銀與球狀閥連接點(diǎn)斷開(kāi)。

4.2.3 溫度計(jì)的安裝 將溫度計(jì)調(diào)整好后固定在滴定架上，溫度計(jì)的下方裝有一個(gè)可以上下移動(dòng)的1000ml量杯，量杯中放置冰塊，冰塊上撒些粗鹽，并將20×15試管置于冰塊中待用。

4.2.4 測(cè)定純水的冰點(diǎn) （1）在試管中加入待測(cè)的蒸餾水，水的多少以浸沒(méi)溫度計(jì)下端水銀泡為度，將鐵絲圈放入試管中，并將溫度計(jì)下端水銀泡插入試管中使被水浸沒(méi)。此時(shí)不停地用鐵絲圈上下攪動(dòng)試管中的蒸餾水，使之溫度均勻下降，觀察溫度計(jì)時(shí)水銀柱會(huì)漸漸降低。（2）由于任何溶液在開(kāi)始結(jié)冰的一瞬間會(huì)釋放出能量來(lái)，因此，當(dāng)試管中的水開(kāi)始結(jié)冰時(shí)，水銀柱會(huì)停止下降而突然上升，此時(shí)必須觀察，直至水銀柱停留在某一刻度上一段時(shí)間不再上升時(shí)，此時(shí)所讀取的數(shù)值即為純水的冰點(diǎn)，由于貝克曼溫度計(jì)上的刻度不是指示實(shí)際溫度，而是所測(cè)溶液冰點(diǎn)的相對(duì)刻度值(即貝克曼溫度計(jì)零點(diǎn))，而其零點(diǎn)與下端水銀泡中的水銀多少有關(guān)，所以每進(jìn)行一批次測(cè)定都要重新調(diào)整溫度計(jì)。在連續(xù)測(cè)定三次純水冰點(diǎn)后，其讀數(shù)值末位之差不超過(guò)3時(shí)，取其平均值，當(dāng)讀數(shù)值超過(guò)3時(shí)，則應(yīng)重做。

4.2.5 測(cè)定精液與稀釋液 在測(cè)得純水冰點(diǎn)后，即可進(jìn)行稀釋液(或精液)的測(cè)定，測(cè)定的方法同上。測(cè)定完畢取出貝克曼溫度計(jì)時(shí)，往往試管中的溶液已結(jié)冰，此時(shí)取出溫度計(jì)要小心，要用手握試管底部，待冰融化后將溫度計(jì)取出，切勿硬拉，以免損壞溫度計(jì)。每測(cè)完一種溶液后，需將溫度計(jì)下端擦拭干凈，所用試管先用被測(cè)溶液沖洗一下，以免影響測(cè)定結(jié)果。使用完畢，應(yīng)及時(shí)將貝克曼溫度計(jì)擦拭干凈，并輕輕將溫度計(jì)倒置，使下端水銀泡中的水銀向U型管中回流一些，然后置盒中保存。

4.2.6 計(jì)算冰點(diǎn)下降度 純水3次冰點(diǎn)平均值t；所測(cè)溶液3次冰點(diǎn)平均值t’；冰點(diǎn)下降度△t=t-t’。