林 昕，董 強(qiáng)，王 平，姜麗麗，胡嘉麗，汪詩(shī)平,3，紀(jì)寶明

(1 北京林業(yè)大學(xué) 草業(yè)與草原學(xué)院，北京 100083； 2 中國(guó)科學(xué)院 青藏高原研究所/中國(guó)科學(xué)院 高寒生態(tài)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101； 3 中國(guó)科學(xué)院 青藏高原地球科學(xué)卓越創(chuàng)新中心，北京 100101)

叢枝菌根真菌 (Arbuscular mycorrhizal fungi，AMF)是屬于球囊霉門Glomeromycota的專性共生微生物，可以與陸地80%以上的植物根系共生。AMF自身生長(zhǎng)所需的碳源完全依賴宿主植物，作為回饋，它們可以幫助宿主吸收礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，提高宿主植物對(duì)生物及非生物脅迫的抗性[1]。研究發(fā)現(xiàn)AMF對(duì)植物種群、群落甚至是草地生態(tài)系統(tǒng)都有重要的調(diào)控作用[2-4]。

高寒草甸是青藏高原東南部主要的草地類型[5]，其主要建群植物為莎草科嵩草屬的小嵩草Kobresia pygmaea、矮嵩草K. humilis、線葉嵩草K.capillifolia和藏嵩草K. tibetica等[6-7]，因此也稱作高寒嵩草草甸。莎草科植物一直被認(rèn)為是非叢枝菌根植物，但有研究發(fā)現(xiàn)在青藏高原AMF可以與嵩草屬植物共生[8-9]，并對(duì)土壤團(tuán)聚體的形成起重要作用[10]。基于AMF在草地生態(tài)系統(tǒng)中的重要性以及高寒嵩草草甸在青藏高原草地中所占的比例，研究高寒嵩草草甸生態(tài)系統(tǒng)中AMF的群落構(gòu)建及動(dòng)態(tài)對(duì)深入理解青藏高原草地土壤?植被相互作用具有重要意義。

近幾十年來(lái)，受全球氣候變暖和人類活動(dòng)加劇的影響，青藏高原約1/3的草地發(fā)生了不同程度的退化[11]。施肥是退化草地恢復(fù)的有效方式之一，目前關(guān)于養(yǎng)分添加(主要是氮和磷)能否及如何影響高寒草甸AMF群落的研究相對(duì)稀少，并且僅限于海拔不超過(guò) 3 500 m 的區(qū)域[12-14]，不能代表海拔為 3 200～5 200 m的青藏高原高寒嵩草草甸[7]。目前基于傳統(tǒng)形態(tài)鑒別[15]和分子測(cè)序[16]的研究表明，隨海拔提升，AMF侵染率、孢子數(shù)量和物種豐度下降，AMF群落組成也隨之變化。不同海拔高度AMF群落對(duì)施肥的響應(yīng)可能不同，為了更全面地認(rèn)識(shí)高寒草甸，有必要選擇海拔更高的區(qū)域進(jìn)行研究。

本試驗(yàn)選取海拔約4 500 m的高寒嵩草草甸施肥樣地，研究不同氮、磷添加對(duì)青藏高原高寒嵩草草甸AMF群落的影響及潛在驅(qū)動(dòng)因子。本研究的核心科學(xué)問(wèn)題為探究高寒嵩草草甸根系A(chǔ)MF群落對(duì)氮、磷添加的響應(yīng)機(jī)制，及在添加氮、磷條件下主導(dǎo)AMF群落變化的因素。

1 研究區(qū)概況和方法

1.1 研究區(qū)概況

研究樣地位于中國(guó)科學(xué)院青藏高原研究所那曲生態(tài)環(huán)境觀測(cè)站 (E91°12′～93°02′，N30°31′～31°55′)，屬于西藏那曲東南部，海拔 4 480 m，年平均氣溫?2.1 ℃，年平均降水 406.2 mm，高原山地氣候，土壤類型為始成土，主要植物種類有小嵩草、矮嵩草和藏薹草Carex thibetica等。

1.2 樣地設(shè)計(jì)及取樣

2013 年設(shè)置了 48 個(gè) 5 m × 5 m 的小區(qū)，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，3個(gè)施氮梯度，4個(gè)施磷梯度，4次重復(fù)。施用的氮肥為尿素，各處理每年施用量分別為0、7.5、15.0 g·m?2，分別記為 N0、N1 和 N2。施用的磷肥為過(guò)磷酸鈣，有效成分為P2O5，各處理每年P(guān)2O5施用量分別為 0、7.5、15.0、30.0 g·m?2，分別記為 P0、P1、P2和P3。每年7月末施肥1次。

2016年8月18日，在每個(gè)小區(qū)隨機(jī)挑選1個(gè)植被覆蓋度相似的點(diǎn)作為樣點(diǎn)。用土鉆從每個(gè)樣點(diǎn)均取深20 cm、直徑8 cm的土塊。將土塊過(guò)2 mm篩，去除土和石塊，將保留的根系裝入自封袋作為1份樣品，?20 ℃保存。另取部分過(guò)篩的土裝入自封袋，4 ℃保存。共計(jì)取得48份根系樣品和48份土壤樣品，冷藏運(yùn)送至北京林業(yè)大學(xué)草地資源與生態(tài)實(shí)驗(yàn)室。在進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)分析前，將所有根系樣品室溫解凍，然后用清水洗凈。

1.3 土壤化學(xué)成分分析

取適量土壤樣品進(jìn)行土壤化學(xué)成分分析。土壤有機(jī)碳用重鉻酸鉀滴定法[17]測(cè)定；土壤全氮用凱氏定氮法[18]測(cè)定；土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮均用 1 mol·L?1的氯化鉀溶液浸提，然后用紫外分光光度法[19]測(cè)定；土壤全磷和有效磷分別用高氯酸?硫酸和碳酸氫鈉浸提，并用鉬?銻比色法[20-21]測(cè)定；pH在水土質(zhì)量比為2.5∶1的條件下測(cè)量。

1.4 叢枝菌根真菌侵染率測(cè)定

根據(jù)Brundrett等[22-23]的方法，先從每份根系樣品中剪取若干長(zhǎng)1.5 cm的幼嫩根段，用臺(tái)盼藍(lán)染色。染色后在每份樣品中挑出30個(gè)根段，切成1 cm根段，然后將每10個(gè)根段平行地放置在載玻片上，滴加乳酸甘油制片，每份樣品制作3個(gè)玻片。在200×顯微鏡下根據(jù)McGonigle等[24]的方法測(cè)定AMF侵染率。

1.5 叢枝菌根真菌DNA提取、擴(kuò)增及測(cè)序

在每份根系樣品中，剪取40根長(zhǎng)1 cm的幼嫩根段，用CTAB法[25]提取其中的DNA。提取出的DNA用無(wú)菌去離子水稀釋20倍作為DNA原液，然后進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增。2輪PCR的反應(yīng)體系均為 25 μL：2 × Pfu PCR MasterMix (KP201) 12.5 μL，無(wú)菌去離子水 8.5 μL，DNA 模板 2 μL 以及 2個(gè)引物各1 μL。第1輪PCR使用的引物為NS31(5′-TTGGAGGGCAAGTCTGGTGCC-3′)和 AML2(5′-GAACCCAAACACTTTGGTTTCC-3′)，反應(yīng)條件：94 ℃ 預(yù)熱 3 min；94 ℃ 變性 45 s，53 ℃ 退火 45 s，72 ℃ 延伸 45 s，35 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 延伸 10 min。第1輪PCR的產(chǎn)物稀釋至1/10作為第2輪PCR的模板。第2輪PCR使用的引物為AMV4.5NF(5′-AAGC TCGTAGTTGAATTTCG-3′)和 AMDGR(5′-CCCAACTATCCCTATTAATCAT-3′)[26]，其中AMDGR的5′端帶有由12個(gè)堿基組成的barcode。第2輪PCR反應(yīng)條件與第1輪PCR相同，所得的產(chǎn)物用 10 g·L?12 × TAE 的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳(電壓 120 V，時(shí)間 30 min)檢測(cè)。若樣品有目標(biāo)DNA 條帶 (約 280 bp)檢出，取 4 μL 第 2 輪 PCR模板用2倍的反應(yīng)體系進(jìn)行第2輪PCR。若樣品無(wú)目標(biāo)條帶檢出，用該樣品的DNA原液重復(fù)巢式PCR，若2次重復(fù)均無(wú)目標(biāo)條帶，則去除該樣品。根據(jù)此方法N1P1處理中的1個(gè)樣品無(wú)條帶，去除后剩余47個(gè)樣品。切取含目標(biāo)條帶的凝膠，使用DNA膠純化試劑盒(Axygen，美國(guó))進(jìn)行DNA純化。純化后的DNA使用Nanodrop 8000超微量分光光度計(jì)測(cè)定濃度，根據(jù)測(cè)定的濃度用移液槍從每個(gè)樣品中吸取含100 ng DNA的溶液混合至1個(gè)離心管，送至中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所在Illumina Miseq平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序。

1.6 生物信息學(xué)分析

測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)使用QIIME[27]進(jìn)行分析。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量控制，最大錯(cuò)誤期望=0.5，最短序列長(zhǎng)度=200，然后依次去除重復(fù)、chimeras和singletons。使用UPARSE-OTU算法和Silva數(shù)據(jù)庫(kù)，依據(jù)97%的相似度閾值劃分代表OTU并制作OTU表。在Excel中除去不屬于球囊霉門、出現(xiàn)的樣本數(shù)少于3以及序列數(shù)小于總序列量0.01%的OTU，并刪除序列數(shù)小于總序列1%的樣品以降低誤差。對(duì)所有樣品根據(jù)最小的樣本序列量進(jìn)行重新抽樣，以減小樣本量不同造成的差異。此外，將代表OTU序列上傳至NCBI，與GenBank的已有序列進(jìn)行比對(duì)，獲得相近的參考序列。使用代表序列和參考序列在MEGA 7中使用p-distance模型，在bootstrap值為1 000下構(gòu)建鄰接樹(shù)，直觀查看代表OTU的系統(tǒng)發(fā)生情況。本研究獲得的代表OTU序列均上傳至歐洲核苷酸檔案庫(kù)，序列號(hào)為L(zhǎng)R535994～LR536029。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

統(tǒng)計(jì)OTU數(shù)量作為OTU豐度，并計(jì)算AMF各科在各樣品和各處理中的相對(duì)豐度。在R(3.2.2)中使用Vegan包中diversity功能計(jì)算每個(gè)樣品的Shannon多樣性指數(shù)。

進(jìn)行方差分析前，將數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換以符合數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性和方差同質(zhì)性。其中，對(duì)土壤化學(xué)成分、OTU豐度和Shannon多樣性指數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，侵染率和AMF科相對(duì)豐度數(shù)據(jù)作反正弦平方根轉(zhuǎn)換。轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)在JMP 11中進(jìn)行雙因素方差分析，分析氮、磷添加是否顯著影響以上數(shù)據(jù)，具有顯著差異(P＜0.05)的結(jié)果使用Tukey's HSD檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。

在群落分析前，先應(yīng)用R對(duì)OTU?樣品矩陣進(jìn)行Hellinger轉(zhuǎn)換以減少稀有OTU的影響，然后用vegdist功能將矩陣轉(zhuǎn)化為Bray-Curtis矩陣。在R中使用Vegan包中的adonis功能進(jìn)行PerMANOVA分析，研究施氮、磷和其交互作用對(duì)AMF群落組成的影響。將土壤化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)作為環(huán)境變量導(dǎo)入R并轉(zhuǎn)化為Euclidean矩陣，與之前的群落矩陣一起進(jìn)行Mantel分析，以研究土壤化學(xué)成分與AMF群落組成的關(guān)系。

最后，進(jìn)行排序分析以研究不同處理AMF的群落分布情況。首先用原始的OTU?樣品矩陣進(jìn)行去趨勢(shì)對(duì)應(yīng)分析，根據(jù)排序軸長(zhǎng)結(jié)果進(jìn)一步使用典范對(duì)應(yīng)分析，并用envfit功能進(jìn)行Monte Carlo檢驗(yàn)找出與AMF群落分布有顯著相關(guān)的環(huán)境因子。最終使用ggplot包進(jìn)行畫圖，直觀顯示各處理下AMF群落分布及其和環(huán)境因子的關(guān)系。

2 結(jié)果與分析

2.1 土壤化學(xué)成分

方差分析得出，不同施氮處理銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量差異均極顯著(P＜0.001)；不同施磷處理全磷和有效磷含量也有極顯著(P＜0.001)差異；氮、磷添加的交互作用對(duì)硝態(tài)氮和有效磷含量有顯著(P=0.021，P=0.040)影響 (表1)。其中，N2處理銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量高于N0和N1處理；P3處理全磷和有效磷量高于其余施磷處理，P2處理有效磷含量高于P0處理(表2)。氮、磷添加及其交互作用未對(duì)土壤有機(jī)碳、全氮和pH產(chǎn)生顯著影響(表1)。

表1 不同施肥處理土壤化學(xué)成分含量差異顯著性分析Table 1 Significance analyzes of soil chemical component content differences in different fertilization treatments

表2 不同施肥處理試驗(yàn)樣地的土壤化學(xué)成分含量1)Table 2 Soil chemical component contents of the experiment field in different fertilization treatments

2.2 叢枝菌根真菌侵染率

如圖1所示，根系樣品AMF侵染率平均值為73.1%。方差分析結(jié)果表明，氮、磷的施加及其交互作用對(duì) AMF 侵染率無(wú)顯著 (P= 0.350，P= 0.119，P=0.562)影響。

2.3 測(cè)序總體結(jié)果

測(cè)序數(shù)據(jù)除雜后，剩余43個(gè)樣品，共獲得234 041條AMF序列。每個(gè)樣品序列數(shù)從297至15 397不等。將所有樣品重新抽樣至樣本量為297后，獲得36個(gè)OTU，每個(gè)樣品的OTU數(shù)量從1至12個(gè)不等，平均值為5.6個(gè)。根據(jù)稀釋曲線(圖2)可以看出，重新抽樣后 N0P2、N1P0、N1P3、N2P2和N2P1對(duì)應(yīng)的曲線末端趨于平滑，說(shuō)明測(cè)序深度較為飽和。經(jīng)比對(duì)，所有AMF的OTU分屬7個(gè)科，其中球囊霉科有27個(gè)OTU，10 285條序列，占總序列的80.5%；多孢囊霉科Diversisporaceae有3個(gè)OTU，666條序列，占總序列的5.2%；碎球囊霉科Claroideoglomeraceae有2個(gè)OTU，146條序列，占總序列的1.1%；無(wú)梗囊霉科Acaulosporaceae、原囊霉科Archaeosporaceae、巨孢囊霉科Gigasporaceae和和平囊霉科Pacisporaceae各有1個(gè)OTU，序列數(shù)分別為441、532、351和350條，共占總序列的13.1%(圖3)。根據(jù)OTU代表序列和參考序列構(gòu)建的鄰接樹(shù)如圖4所示。

圖1 不同施肥處理下叢枝菌根真菌侵染率Fig. 1 Arbuscular mycorrhizal fungal colonization rates in different fertilization treatments

圖2 不同施肥處理下分子測(cè)序的稀釋曲線Fig. 2 Rarefaction curve of sequencing samples in different fertilization treatments

圖3 不同施肥處理下叢枝菌根真菌各科的相對(duì)豐度Fig. 3 Relative abundance of different arbuscular mycorrhizal fungal families in different fertilization treatments

圖4 36個(gè)叢枝菌根真菌OTU代表序列及其參考序列構(gòu)建的鄰接樹(shù)Fig. 4 Neighbor-joining tree constructed based on representative sequences of 36 arbuscular mycorrhizal fungal OTUs and their reference sequences

2.4 氮、磷添加對(duì)叢枝菌根真菌群落的影響

方差分析結(jié)果顯示，氮、磷添加及其交互作用對(duì)OTU豐度和Shannon多樣性指數(shù)無(wú)顯著影響(圖5A、5B)。但施氮對(duì)球囊霉科的相對(duì)豐度有顯著影響(P＜0.001)，N2處理球囊霉科的相對(duì)豐度顯著低于N1(圖5C)。

PerMANOVA結(jié)果表明氮、磷添加處理及其交互作用對(duì)AMF群落組成無(wú)顯著影響(P = 0.680，P=0.473，P= 0.589)。Mantel分析結(jié)果顯示 AMF 群落組成與有機(jī)碳含量和硝態(tài)氮含量有顯著正相關(guān)(r=0.176,P=0.110；r=0.142,P=0.041)關(guān)系。此外，Monte Carlo結(jié)果表明有機(jī)碳、硝態(tài)氮、全磷和有效磷含量均對(duì)AMF群落結(jié)構(gòu)有顯著影響(r=0.04,P=0.001；r=0.327,P=0.013；r=0.185,P=0.025；r=0.188,P=0.020)。這4個(gè)環(huán)境因子在典范對(duì)應(yīng)分析中對(duì)排序結(jié)果的解釋量為11.70%，第1軸和第2軸的解釋量分別為6.13%和2.61%。(圖6)。

圖5 不同施肥處理叢枝菌根真菌OTU豐度、Shannon多樣性指數(shù)及球囊霉科相對(duì)豐度Fig. 5 OTU richness, Shannon diversity index of arbuscular mycorrhizal fungi and relative abundance of Glomeraceae in different fertilization treatments

圖6 不同施肥處理叢枝菌根真菌群落以及顯著環(huán)境變量的典范對(duì)應(yīng)分析圖Fig. 6 Canonical correspondence analysis plot of arbuscular mycorrhizal fungal community distribution and significant environmental variables among different fertilization treatments

3 討論與結(jié)論

在農(nóng)田和天然草地生態(tài)系統(tǒng)中，施加氮和磷會(huì)降低AMF侵染率、OTU豐度和多樣性，改變根系和根際土壤中AMF的群落結(jié)構(gòu)[28-29]。研究認(rèn)為出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是土壤養(yǎng)分的增加使植物更多依靠自身根系去吸收營(yíng)養(yǎng)，降低對(duì)幫助其吸收養(yǎng)分的微生物的依賴[30]。本研究發(fā)現(xiàn)，施氮顯著提高了土壤中銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的含量，施磷顯著增加了土壤中全磷和有效磷的含量，但氮、磷的施加對(duì)AMF侵染率、OTU豐度、多樣性以及群落組成均無(wú)顯著影響。因此，本研究的結(jié)果與此前在其他生態(tài)系統(tǒng)下的研究結(jié)果存在差異[28-29]，該差異可能是由以下原因造成的。

首先，差異可能是海拔不同造成的。目前相關(guān)研究[12-14]的海拔不超過(guò)3 500 m，低于本試驗(yàn)樣地的海拔4 480 m。海拔會(huì)顯著影響AMF的群落和功能，Gai等[15]和Shi等[31]通過(guò)形態(tài)學(xué)方法發(fā)現(xiàn)不同海拔條件下AMF侵染率、孢子密度以及菌絲密度都會(huì)有顯著變化；Liu等[16]和Li等[32]通過(guò)分子測(cè)序手段發(fā)現(xiàn)不同海拔條件下AMF群落組成有顯著差異。本研究與此前研究的海拔不同，氣候、植被及土壤條件都會(huì)有不同，進(jìn)而導(dǎo)致AMF對(duì)氮、磷添加的差異性響應(yīng)。

第二，在高寒地區(qū)AMF不僅能幫助植物進(jìn)行養(yǎng)分吸收，同時(shí)也可幫助植物應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫。因此即使在施肥條件下植物不需要AMF來(lái)幫助其獲取養(yǎng)分，還是要與AMF保持共生關(guān)系應(yīng)對(duì)脅迫。Xiang等[13]在海拔3 220 m的青藏高原高寒草地施肥3年，發(fā)現(xiàn)同時(shí)添加氮和磷時(shí)AMF的OTU豐度和多樣性均顯著高于對(duì)照，也高于氮、磷單獨(dú)添加時(shí)的水平。Chen等[33]研究認(rèn)為，雖然在養(yǎng)分充足的條件下，植物在營(yíng)養(yǎng)吸收上降低了對(duì)AMF的依賴，然而，植物依然需要AMF來(lái)幫助其對(duì)抗環(huán)境脅迫，尤其是球囊霉科可以提高宿主抗寒性。在本研究的高寒草甸生態(tài)系統(tǒng)中，一方面氮、磷的添加使得植物群落降低了對(duì)AMF吸收養(yǎng)分的依賴，另一方面植物群落卻增加了依靠AMF來(lái)對(duì)抗脅迫的需要。因此，2個(gè)效應(yīng)綜合使得在氮、磷添加的情況下AMF的OTU豐度、多樣性和群落組成未受顯著影響。

另一個(gè)可能引起差異的原因是樣品內(nèi)及樣品間的差異較大，影響了氮、磷添加的效應(yīng)。從稀釋曲線可以看出，個(gè)別樣品的曲線在終點(diǎn)處仍在上升，說(shuō)明其測(cè)序深度未達(dá)到飽和，此時(shí)增加取樣量可能會(huì)有更多的OTU出現(xiàn)。同時(shí)，通過(guò)典范對(duì)應(yīng)分析圖可以直觀地發(fā)現(xiàn)，N2P3處理3次重復(fù)的AMF群落分布距離較大，該處理3次重復(fù)的AMF群落的差異是所有處理的重復(fù)間差異最大的。基于樣本內(nèi)的誤差，本試驗(yàn)結(jié)果存在一定限制性。

本研究中，PerMANOVA分析發(fā)現(xiàn)，施加氮、磷不影響AMF群落組成，但通過(guò)Mantel分析發(fā)現(xiàn)AMF群落的組成與有機(jī)碳和硝態(tài)氮含量有顯著的正相關(guān)關(guān)系。典范對(duì)應(yīng)分析的結(jié)果表明有機(jī)碳、硝態(tài)氮、全磷和有效磷含量與AMF群落的分布有顯著的正相關(guān)關(guān)系，其中有機(jī)碳與AMF群落分布的相關(guān)性最大。有機(jī)碳主要對(duì)低磷條件(P0和P1處理)AMF群落有影響，硝態(tài)氮、全磷和有機(jī)碳主要對(duì)高磷條件(P3處理)AMF群落有影響。相關(guān)研究也表明，土壤有機(jī)質(zhì)、硝態(tài)氮和有效磷均是對(duì)高寒草甸AMF群落有顯著影響的土壤成分[34-35]。

Zheng等[34]發(fā)現(xiàn)施氮能改變AMF群落，但不是通過(guò)直接作用，而是間接地通過(guò)改變土壤其他成分(如有機(jī)碳)和植物群落來(lái)影響AMF群落。土壤成分也可以直接或間接地影響微生物群落[36-37]。因此可以解釋本研究中施肥未對(duì)AMF群落產(chǎn)生影響，但特定的土壤因子與AMF群落分布有顯著相關(guān)性。

綜上所述，基于青藏高原4 500 m海拔高寒草甸的研究發(fā)現(xiàn)，氮、磷添加對(duì)AMF的侵染率、OTU豐度和多樣性無(wú)顯著影響。該發(fā)現(xiàn)回答了本研究要明確的第1個(gè)核心科學(xué)問(wèn)題，即青藏高原高寒嵩草草甸根系中的AMF群落不受氮、磷添加的影響，與海拔較低的AMF群落對(duì)氮、磷的響應(yīng)不同；對(duì)第2個(gè)核心科學(xué)問(wèn)題，影響青藏高原高寒嵩草草甸根系A(chǔ)MF群落的因子主要是有機(jī)碳和硝態(tài)氮含量，全磷和有效磷含量是次要因子。未來(lái)研究還需要系統(tǒng)選取不同海拔的樣地，以獲取青藏高原不同海拔高寒草甸AMF群落對(duì)施肥的響應(yīng)。另外，在全面剖析AMF群落變化規(guī)律及驅(qū)動(dòng)機(jī)制的基礎(chǔ)上，亟需研究AMF群落變化如何反饋影響地上植被的個(gè)體生長(zhǎng)與群落動(dòng)態(tài)，探索高寒草地退化及恢復(fù)演替中的地下生態(tài)過(guò)程及機(jī)理。