◆單位：1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院；2.廣東省水禽健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

1 引言

鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒（DTMUV）引起的一種以種鴨、蛋鴨、種鵝產(chǎn)蛋量大幅度下降，雛鴨則出現(xiàn)頭頸震顫、四肢麻痹等神經(jīng)方面的異常癥狀為主要特征的急性熱傳染性病毒病。肉雛鴨一旦感染鴨坦布蘇病毒則會(huì)表現(xiàn)為食欲不振、有神經(jīng)癥狀出現(xiàn)、腹瀉等癥狀，最終使其代謝和免疫功能紊亂。自然發(fā)病與試驗(yàn)感染研究結(jié)果表明，不同禽類對(duì)病毒的感染率存在一定差異，其中鴨與鵝高度易感，雞次之，而且此外不同的日齡也是影響動(dòng)物易感性的重要因素。

DTMUV 最早是在1955 年來自馬來西亞吉隆坡庫蚊樣品中被分離和發(fā)現(xiàn)，隨即便在來自馬來西亞沙撈越及泰國(guó)地區(qū)的蚊蟲樣本中檢測(cè)分離出來。2010年4 月份我國(guó)初次爆發(fā)鴨坦布蘇病毒病，幾乎中國(guó)整個(gè)東南沿海省份及北方部分地區(qū)都在僅僅幾個(gè)月內(nèi)淪陷。該疾病迅速傳播，在當(dāng)時(shí)導(dǎo)致1500 萬只肉鴨和1.2 億只蛋鴨發(fā)病的同時(shí)還為我國(guó)水禽養(yǎng)殖行業(yè)帶來了數(shù)十億元的損失。

2 病原學(xué)

DTMUV 屬于黃病毒科黃病毒屬，為單股正鏈RNA 病毒，DTMUV 基因組全長(zhǎng)約為10991 bp，病毒粒子具有囊膜結(jié)構(gòu)，囊膜內(nèi)包裹對(duì)稱的20 面體核衣殼蛋白。其基因組具有唯一一個(gè)開放閱讀框（ORF），基因組5' 端和3' 端分別有94 bp 和618 bp 的非編碼區(qū)；有I 型m7GpppNp 帽子結(jié)構(gòu)，無PolyA 尾。在絲氨酸蛋白酶和宿主信號(hào)酶的催化下，多聚蛋白前體被切割為前膜蛋白PrM、核衣殼蛋白C（Capsid,C）及囊膜蛋白E（envelope,E）三個(gè) 結(jié) 構(gòu) 蛋 白 與 NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS57個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白。DTMUV 既不耐熱，也不耐酸，將其置于水浴中56℃加熱15min 或堿性條件下（pH＞11）均可以使病毒失活。

在培養(yǎng)特性方面，DTMUV可在鴨胚、雞胚、鴨胚成纖維細(xì)胞和Vero 細(xì)胞中增殖。相對(duì)于雞胚，鴨胚更易增殖該病毒，經(jīng)尿囊腔接種鴨胚，盲傳1～2 代后，病毒可在接種后3～5 天導(dǎo)致鴨胚出現(xiàn)死亡。死亡鴨胚表現(xiàn)為胚體出血、水腫同時(shí)伴有絨毛尿囊膜增厚等癥狀。當(dāng)DTMUV在接種鴨胚成纖維細(xì)胞后出現(xiàn)細(xì)胞病變的時(shí)間為48 h，接種Vero 細(xì)胞后出現(xiàn)細(xì)胞病變的時(shí)間為50 h，利用細(xì)胞分毒時(shí)需注意，病毒需要經(jīng)過適應(yīng)才能在細(xì)胞上產(chǎn)生細(xì)胞病變。在血凝特性上，DTMUV 無法凝集雞、鴨、鵝和鴿的紅細(xì)胞。

3 流行病學(xué)

絕大部分黃病毒屬病毒都能引發(fā)人獸共患病，并且臨床癥狀也各有不同，一般以病毒性腦炎為主要癥狀，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致全身感染。而DTMUV 主要感染產(chǎn)蛋鴨，還能感染其他如雞、鵝、麻雀等禽類。

節(jié)肢動(dòng)物如伊蚊庫蚊等蚊蟲，對(duì)于DTMUV 來說既是其主要宿主又是其傳播媒介，因此導(dǎo)致DTMUV 致病性的地區(qū)性和季節(jié)性也較為顯著，其中發(fā)病率較高的季節(jié)為秋夏兩季。但在蚊蟲活動(dòng)活躍度低的冬春季節(jié)DTMUV 仍能在某些地區(qū)繼續(xù)流行，表明DTMUV 還存在其他傳播途徑。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床樣品檢測(cè)表明，DTMUV 除了通過直接接觸這一重要方式傳播之外，還能通過垂直傳播和糞便傳播。另外近期還有研究闡明健康的鴨子還能夠被DTMUV 通過病毒氣溶膠的形式感染致病，其傳播速度之快不得不引起養(yǎng)鴨產(chǎn)業(yè)相關(guān)人士對(duì)這方面防控的重視。

4 臨床癥狀及病理變化

4.1 臨床癥狀

受到DTMUV 的感染后，病鴨會(huì)出現(xiàn)精神萎靡、食欲不振、體溫升高、四肢麻痹站立不穩(wěn)、喜臥癱瘓，后期則會(huì)表現(xiàn)出歪頭腿癱、排白色或綠色稀便。病鴨中產(chǎn)蛋鴨受DTMUV 的危害最大，其感染后產(chǎn)蛋量急劇下降，嚴(yán)重情況產(chǎn)蛋率能在5-6 天內(nèi)降低20%～30%甚至絕產(chǎn)，產(chǎn)蛋伴隨有薄殼蛋、軟殼蛋和沙皮蛋等癥狀。倘若病鴨在患病過程中不進(jìn)行治療，根據(jù)鴨群的日齡和自身抵抗力等因素，病程大概持續(xù)1-2 個(gè)月，結(jié)束后大部分病鴨能恢復(fù)到原來的機(jī)體狀態(tài)，但產(chǎn)蛋量難以回到原有水平。

4.2 病理變化

DTMUV 可引發(fā)病鴨體內(nèi)多個(gè)組織器官產(chǎn)生病變，剖檢可觀察到卵巢腫大、充血出血，卵泡充血、崩解破裂、變性萎縮，卵泡膜充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，卵黃膜出血、蛋黃破裂，偶發(fā)卵黃性腹膜炎；輸卵管固有層水腫，粘性物質(zhì)滲出，種公鴨則還會(huì)表現(xiàn)出輸精管萎縮，睪丸體積縮小。病鴨心臟內(nèi)膜下出血，偶發(fā)外膜出血，心肌外觀蒼白，有出血點(diǎn)；肝臟淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增生，表面有白色點(diǎn)狀針尖狀壞死，嚴(yán)重的會(huì)有脂肪變性和明顯充血，病死鴨則肝臟腫大，多數(shù)顏色發(fā)黃；脾臟腫大或破裂，呈現(xiàn)斑駁大理石狀，淋巴細(xì)胞減少；肺臟微腫，出血并伴有炎性滲出物；腎臟輕度充血出血，腎小管上皮細(xì)胞腫脹；腦組織則伴有病毒性腦炎現(xiàn)象，呈樹枝狀出血；腸道出血并伴有潰瘍?cè)?，淋巴濾泡腫脹，腸壁則出現(xiàn)白色霉斑。

5 診斷

初步臨診診斷時(shí)可依據(jù)其病理變化流行病學(xué)等特點(diǎn)來進(jìn)行判斷，但若要進(jìn)一步確診則需要通過實(shí)驗(yàn)室診斷的各種方法檢測(cè)病原。而到目前為止實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括有病毒分離鑒定、電鏡法、分子生物學(xué)方法、免疫組化方法、血清學(xué)方法等

5.1 病毒分離鑒定

DTMUV 的分離鑒定常用方法包括鴨胚接種法、乳鼠腦內(nèi)接種法、細(xì)胞接種分離法?？稍诓▲喡雅菽ぁ⑤斅压?、肝臟、脾臟等病變組織分離后得到DTMUV。雖然此方法DTMUV 檢測(cè)過程中經(jīng)典準(zhǔn)確的方法，但操作過程繁瑣，周期也不短，操作不規(guī)范容易得到假陰性結(jié)果。

5.2 電鏡法

可通過觀察到的病毒大小和形態(tài)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)直接判斷，從樣本中觀察到直徑大小約45 nm 的含囊膜的球形粒子基本可確定為DTMUV，此方法精確而又直觀，但需要較高的儀器和操作要求，不適合用于臨床的快速檢測(cè)。

5.3 分子生物學(xué)方法

在實(shí)驗(yàn)室里DTMUV 的分子生物學(xué)檢測(cè)方法主要有常規(guī)RT-PCR、套式RT-PCR、熒光定量 RT-PCR、 多 重 RT-PCR、RT-LAMP 等， 其 中 常 規(guī)RT-PCR 較為泛用。先將準(zhǔn)備好的的病料提取RNA 并反轉(zhuǎn)錄為cDNA 后，再對(duì)照DTMUV 基因組序列中的NS5 蛋白基因或者E 蛋白基因設(shè)計(jì)合成好PCR 引物進(jìn)行特異性基因序列擴(kuò)增。依靠此方法能在DTMUV 的檢測(cè)時(shí)作出快速、敏感、準(zhǔn)確的診斷，適用于流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷，是目前主要的檢測(cè)方法。

5.4 免疫組化法

該方法依靠抗原- 抗體特異性結(jié)合原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞樣本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究，而此處則是針對(duì)DTMUV 抗原的鑒定。憑借其很強(qiáng)特異性，高敏感度和定位的準(zhǔn)確性，還能同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，這對(duì)病理學(xué)研究的深入具有重大意義。

5.5 血清學(xué)方法

在黃病毒屬方面，國(guó)際通用的檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和中和試驗(yàn)（NT），而兩者之中ELISA 法最為常用。而現(xiàn)在已有建立好可用于DTMUV臨床檢測(cè)的的間接ELASA 法，其穩(wěn)定性強(qiáng)、特異性好、敏感性高等優(yōu)越性為普通實(shí)驗(yàn)室的DTMUV 的診斷提供了更便捷的服務(wù)，疾病的監(jiān)控和診斷打下了良好的基礎(chǔ)。

6 疫苗研究進(jìn)展

6.1 滅活疫苗

滅活疫苗是最常用的預(yù)防和控制病毒的制劑，制造工藝相對(duì)其他疫苗較為簡(jiǎn)單的同時(shí)還能有效預(yù)防疫病，還具備安全效果穩(wěn)定，易貯存和運(yùn)輸?shù)膬?yōu)點(diǎn)，但需免疫次數(shù)多，用劑量大，起效慢的同時(shí)免疫效應(yīng)也并不持久。市面上已上市的有天津瑞普生產(chǎn)的滅活疫苗- 坦布舒（HB株）和北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研宄所研發(fā)的鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗（HB 株）等。

在疫苗的使用方面，李振華等研究表明鴨坦布蘇病毒病油乳劑疫苗注射劑量控制在0.2 ml～0.8 mL 可使疫苗效價(jià)達(dá)到最高水平。而李建功等對(duì)鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗的免疫效力進(jìn)行評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)表明：（1）在腿部肌肉注射測(cè)定疫苗的HI 抗體水平普遍高于頸部皮下，且抗體上升快，產(chǎn)生量大。（2）鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗（HB 株）免疫后HI 抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)率基本一致，HI 抗體效價(jià)測(cè)定可以替代免疫攻毒進(jìn)行疫苗的免疫效力評(píng)價(jià)。

6.2 弱毒疫苗

作為仍保持良好的抗原性和遺傳特性的病原微生物弱毒株制備物，弱毒疫苗不僅能在動(dòng)物體內(nèi)持續(xù)繁殖，使用劑量小，還能快速且長(zhǎng)期地產(chǎn)生免疫效應(yīng)，但穩(wěn)定性差，而且存在毒力返強(qiáng)和重組的風(fēng)險(xiǎn)等。市面上能看到商品化的弱毒疫苗有齊魯動(dòng)保生產(chǎn)的WF100 株弱毒疫苗和青島易邦生產(chǎn)的鴨坦布蘇病毒病活疫苗 - 坦易佳（FX2010-180P 株）。

6.3 卵黃抗體

自2010 年我國(guó)DTMUV 爆發(fā)至今，我們?cè)贒TMUV 對(duì)應(yīng)疫苗的研制方面已經(jīng)取得較大的進(jìn)展，目前除了市場(chǎng)上滅活疫苗和弱毒活疫苗外，卵黃抗體由于其性質(zhì)穩(wěn)定的特點(diǎn)而受到了研究者的關(guān)注，成為坦布蘇病毒病治療抗體的研究熱點(diǎn)。趙瑞宏等制備出的高效價(jià)卵黃抗體經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)其對(duì)感染了DTMUV 的雛鴨有明顯的預(yù)防和治療作用，能夠有效保護(hù)雛鴨和產(chǎn)蛋鴨。

6.4 基因工程疫苗和亞單位疫苗

基因工程疫苗一般利用基因工程技術(shù)敲除強(qiáng)毒株毒力相關(guān)基因，形成弱毒株后制備而成。兼有弱毒苗和滅活苗的特性，安全性高的同時(shí)還具有強(qiáng)免疫原性。王善輝等通過桿狀病毒表面展示技術(shù)，表達(dá)了DTMUV JSXZ 株的E 蛋白，研究結(jié)果表明通過桿狀病毒表達(dá)的重組E蛋白亞單位疫苗免疫原性優(yōu)良，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生較高水平的血清抗體，并具有較好的免疫攻毒保護(hù)效果，保護(hù)率達(dá)80%～90%。

7 綜合防控措施

7.1 免疫預(yù)防

疫苗接種是控制該病最有效措施，疫苗雖不能有效控制疾病初期對(duì)產(chǎn)蛋量下降的影響，但是免疫過的鴨群死亡率更低，且卵巢能提前恢復(fù)正常，說明疫苗在保護(hù)鴨群抵抗病毒方面有一定效果。建議使用DTMUV 弱毒疫苗（WF100 株）具有安全、免疫效果確實(shí)、免疫副反應(yīng)小、免疫次數(shù)少、可緊急免疫接種等優(yōu)點(diǎn)。

7.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

由于該病無特效藥進(jìn)行治療，所以我們應(yīng)以預(yù)防為主，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)加強(qiáng)生物安全防護(hù)的措施。因?yàn)楦腥綝TMUV 的病鴨能通過糞便傳播DTMUV，因此鴨的飼養(yǎng)環(huán)境需要得到相應(yīng)改善，并要及時(shí)清理好糞便并做好相應(yīng)清潔工作，定期消毒。目前DTMUV 主要以蟲媒傳播和接觸傳播為主，因此應(yīng)搞好鴨廠的衛(wèi)生以減少蚊蟲的滋生，并要對(duì)一切外來車輛進(jìn)行嚴(yán)格消毒管制。同時(shí)為了防止DTMUV 通過空氣傳播倒鴨群中，鴨舍需做到時(shí)常通風(fēng)換氣增加空氣流通量；加強(qiáng)鴨群監(jiān)控管理，一旦發(fā)現(xiàn)疑似病鴨要做到及時(shí)隔離，而死禽無害化處理方面也要做到位杜絕一切可能的傳染源頭。

參考文獻(xiàn)：（略）