胡 毅 劉艷莉 田芊芊 石 勇 鐘 蕾 周建成

(1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省特色水產(chǎn)資源利用工程技術(shù)研究中心, 長(zhǎng)沙 410128; 2. 水產(chǎn)高效健康生產(chǎn)湖南省協(xié)同創(chuàng)新中心, 常德415000; 3. 常德大北農(nóng)飼料有限公司, 津市 415401)

青魚(yú)(Mylopharyngodon plceus)是“四大家魚(yú)”之一, 主要養(yǎng)殖區(qū)域?yàn)榻K、安徽、湖北和湖南等地,是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)。隨著水庫(kù)限養(yǎng)、禁養(yǎng)政策的推進(jìn), 以及養(yǎng)殖技術(shù)的不斷提高, 高密度集約化和工廠化養(yǎng)殖將成為養(yǎng)殖常態(tài), 如何利用有限的水體獲得最大的養(yǎng)殖效應(yīng)已成為研究焦點(diǎn)。但養(yǎng)殖密度過(guò)高會(huì)產(chǎn)生大量的脅迫因子, 如營(yíng)養(yǎng)、擁擠、環(huán)境惡化(包括氨氮、pH、亞硝酸鹽等)等, 而擁擠脅迫則是網(wǎng)箱和工廠化養(yǎng)殖過(guò)程中的關(guān)鍵脅迫因子, 過(guò)高的養(yǎng)殖密度會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)、飼料利用率、免疫力以及成活率下降[1—3]。同時(shí), 為了降低水產(chǎn)動(dòng)物飼料中魚(yú)粉用量, 降低飼料配方成本, 促使用廉價(jià)的植物蛋白源替代魚(yú)粉已成為飼料配方師和研究人員關(guān)注的重點(diǎn)[4,5], 但如果盲目地降低飼料中魚(yú)粉占比,易導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物免疫力和抗應(yīng)激下降[6—8]。目前, 對(duì)于急性脅迫[9—11]或慢性脅迫[12]所帶來(lái)的負(fù)面影響主要是通過(guò)功能性添加劑來(lái)緩解, 且慢性擁擠脅迫的相關(guān)報(bào)道集中于高密度環(huán)境對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物造成的損傷研究。關(guān)于蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)與高密度養(yǎng)殖的研究在國(guó)內(nèi)外雖有涉及, 但僅見(jiàn)蛋白質(zhì)水平和密度之間的關(guān)系,如斑點(diǎn)叉尾鮰(Ietalurus punetaus)[13]和凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)[14]等。但對(duì)飼料中魚(yú)粉含量的提高是否有緩解高密度養(yǎng)殖所帶來(lái)的生長(zhǎng)、免疫力下降等相關(guān)研究尚未報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明, 青魚(yú)幼魚(yú)(5.90±0.01) g配合飼料中魚(yú)粉含量低于20%時(shí), 其生長(zhǎng)性能就會(huì)受到抑制[15]。但在實(shí)際生產(chǎn)中, 飼料廠為了降低成本, 養(yǎng)殖戶(hù)為了追求養(yǎng)殖效益, 而盲目降低飼料魚(yú)粉水平和提高養(yǎng)殖密度, 飼料和環(huán)境的雙重脅迫易導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)免疫應(yīng)激反應(yīng)。因此, 本試驗(yàn)在已有研究基礎(chǔ)上和實(shí)際問(wèn)題出發(fā), 旨在探究魚(yú)粉水平和養(yǎng)殖密度對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、抗氧化能力、免疫及抗應(yīng)激能力等的影響, 以及高魚(yú)粉水平是否能緩解高密度養(yǎng)殖帶來(lái)的負(fù)面影響, 以期為青魚(yú)的集約化高密度養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

設(shè)置魚(yú)粉含量分別為10%和20%的實(shí)驗(yàn)飼料。在飼料制備之前, 魚(yú)粉和豆粕等飼料原料經(jīng)先粉碎,過(guò)40目篩網(wǎng), 再按配比從小到大逐級(jí)定量均勻混合;再將其進(jìn)入V型攪拌機(jī)充分混合25min。隨后將魚(yú)油與已混好的干粉充分混勻, 再加入適量的水揉勻,將其加工制成1.5 mm直徑的顆粒飼料, 晾干至飼料水分含量為10%左右, 置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆??；A(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ), %)Tab. 1 Composition of the basal diet and nutrition level (DM basic, %)

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)青魚(yú)在湖南省水產(chǎn)科學(xué)研究所國(guó)家魚(yú)類(lèi)良種場(chǎng)購(gòu)買(mǎi), 為同批次人工孵化魚(yú)苗。青魚(yú)在網(wǎng)箱(5 m×5 m×5 m)中暫養(yǎng)28d, 暫養(yǎng)期間用高魚(yú)粉組飼料日投喂3次, 正式養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)前停食24h。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在水庫(kù)網(wǎng)箱(1.5 m×1.5 m×1.5 m)中進(jìn)行, 采用雙因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的“2×3因子設(shè)計(jì)”, 以魚(yú)粉水平和養(yǎng)殖密度為影響因素。其中, 魚(yú)粉水平為20%和10%,養(yǎng)殖密度分為50、100和200尾/箱, 選取規(guī)格一致、體質(zhì)健康的青魚(yú)(2.50±0.02) g幼魚(yú)隨機(jī)分為6個(gè)組, 前期每組4個(gè)重復(fù), 一個(gè)重復(fù)用于采樣后補(bǔ)齊青魚(yú)尾數(shù), 養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)共持續(xù)16周。日投餌量為體質(zhì)量的2%—5%, 日投喂3次(8：00, 12：00和17：00)。實(shí)驗(yàn)期間的水溫為(26±4)℃。

1.3 采樣與處理

實(shí)驗(yàn)第8周及第16周結(jié)束時(shí), 禁食24h, 對(duì)各網(wǎng)箱中青魚(yú)進(jìn)行記數(shù)、稱(chēng)重, 計(jì)算生長(zhǎng)指標(biāo)。從各實(shí)驗(yàn)箱隨機(jī)取5尾青魚(yú), 用1 mL注射器尾靜脈取血, 將血液混合并置于無(wú)菌離心管中, 4℃靜置過(guò)夜, 3000 r/min離心10min, 取上層血清置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。每網(wǎng)箱隨機(jī)選取3尾青魚(yú)測(cè)量體長(zhǎng)和體重后,于冰盤(pán)迅速解剖并分離內(nèi)臟團(tuán)、肝臟和腸道, 然后稱(chēng)量肝重、內(nèi)臟重, 進(jìn)而計(jì)算形體指標(biāo); 并用冷凍的去離子水沖去剔除的腸道周?chē)竞蛢?nèi)容物后取約2 cm前腸放入1.5 mL離心管中, 編號(hào)并標(biāo)記,放入-80℃冰箱保存, 用于后續(xù)腸道消化酶活力測(cè)定。取5尾青魚(yú)置于-20℃冰箱冰凍作全魚(yú)樣品, 用于體成分的測(cè)定。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)和方法

生長(zhǎng)、形體指標(biāo)與體成分成活率(Survival,SR, %)=100%×實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)尾數(shù)/實(shí)驗(yàn)初始時(shí)魚(yú)尾數(shù);

增重率(Weight gain rate,WGR, %)=100%×[終末平均體重(g)-初始平均體重(g)]/初始平均體重(g);

肥滿(mǎn)度(Condition factor,CF, g/cm3)=終末魚(yú)體重(g)/體長(zhǎng)(cm)3;

肝體比(Hepatosomatic index,HSI, %)=100%×每尾肝臟體重(g)/每尾最終體重(g);

臟體比(Visceral index,VSI, %)=100%×每尾內(nèi)臟體重(g)/每尾終末體重(g)。

魚(yú)體常規(guī)成分測(cè)定參照文獻(xiàn)的方法(AOAC)[16]。其中水分的測(cè)定采用105℃烘箱干燥恒重法(GB/T 6435—86)測(cè)定, 粗蛋白的測(cè)定采用凱氏定氮法(GB/T 6432—94), 粗脂肪的測(cè)定采取索氏抽提法(GB/T 6433—94), 粗灰分采用550℃灼燒法(GB/T 6438—92)測(cè)定。

生理生化指標(biāo)胰島素類(lèi)生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)、生長(zhǎng)激素(GH)、皮質(zhì)醇(COR)、免疫球蛋白M(IgM)、分泌型免疫球蛋白A (S-IgA)用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行測(cè)定; 總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血糖(GLU)、溶菌酶(LSZ)等指標(biāo)采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定; 補(bǔ)體4 (C4)、免疫球蛋白M (IgM)采用浙江伊利康生物有限公司試劑盒測(cè)定, 所有指標(biāo)均用酶標(biāo)儀(Thermo-1510)進(jìn)行檢測(cè)。

腸道消化酶在測(cè)定前需將腸道樣品解凍, 淀粉酶和脂肪酶用生理鹽水進(jìn)行勻漿, 胰蛋白酶用勻漿介質(zhì)進(jìn)行勻漿, 用離心機(jī)3500 r/min, 離心10min, 取上清液保存待測(cè), 然后用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定, 儀器為分光光度計(jì)UV-5200型。

1.5 統(tǒng)計(jì)與分析

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果利用軟件SPSS19.0進(jìn)行單因素和多因素分析, 差異顯著(P＜0.05)時(shí), 則用Duncan’s法進(jìn)行多重比較, 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)”表示。

2 結(jié)果

2.1 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)生長(zhǎng)及體成分的影響

由表2可知, 實(shí)驗(yàn)中期, 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)的成活率有交互效應(yīng)(P＜0.05), 魚(yú)粉水平和養(yǎng)殖密度的同時(shí)增加使青魚(yú)的存活率有下降的趨勢(shì)(P＞0.05); 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)的增重率無(wú)交互效應(yīng), 隨密度的增加, 低魚(yú)粉和高魚(yú)粉組青魚(yú)的增重率均有先上升后下降的趨勢(shì), 但差異不顯著(P＞0.05),在同一密度水平下, 高魚(yú)粉組增重率有比低魚(yú)粉組提升高的趨勢(shì), 其中H100組增重率顯著高于L100組(P＜0.05), H200組的青魚(yú)增重率與L100組的增重率相當(dāng)(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)后期, 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)增重率有交互效應(yīng)(P＜0.05)。在不同密度下, 低魚(yú)粉飼料增重率差異不顯著, 但降低了高密度組成活率(P＞0.05), 高魚(yú)粉顯著影響了不同密度組的增重率, 隨密度的升高, 青魚(yú)的增重率呈下降趨勢(shì)(P＞0.05),H200組的增重率顯著低于L200組和H50組(P＜0.05), 且高魚(yú)粉組的存活率均低于低魚(yú)粉組(P＞0.05)。

表2 不同養(yǎng)殖密度下魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響Tab. 2 Effects of fishmeal level on growth in juvenile black carp at different stocking densities

由表3可見(jiàn), 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間, 魚(yú)粉水平和養(yǎng)殖密度對(duì)青魚(yú)形體指標(biāo)和體成分無(wú)交互效應(yīng)(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)中期, 隨密度的增加, 低魚(yú)粉組的VSI呈降低趨勢(shì); 高魚(yú)粉組青魚(yú)粗脂肪呈先上升后下降的趨勢(shì)(P＞0.05)。在同密度下, H200組的VSI、HSI、粗脂肪和粗蛋白含量均低于L200組(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)后期, 隨密度的增加, 青魚(yú)的粗脂肪和粗蛋白均呈先下降后上升的趨勢(shì)(P＞0.05)。在同密度下, H200組的CF、粗脂肪含量高于L200組,VSI和粗蛋白含量低于L200組(P＞0.05)。

2.2 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)腸道消化酶活力的影響

由表4可見(jiàn), 在實(shí)驗(yàn)中期, 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)的胰蛋白酶、淀粉酶均有交互效應(yīng)(P＜0.05); 隨密度的升高, 低魚(yú)粉組青魚(yú)的脂肪酶、胰蛋白酶和淀粉酶均呈先下降后上升的趨勢(shì)(P＞0.05); 在同一密度下, H200組的胰蛋白酶活力顯著低于L200組(P＜0.05), 而脂肪酶和淀粉酶活力高于L200組(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)后期, 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)消化酶活力無(wú)交互效應(yīng), 各組之間的消化酶活力也沒(méi)有產(chǎn)生顯著差異(P＞0.05)。

2.3 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)抗氧化及免疫應(yīng)激指標(biāo)的影響

由表5可見(jiàn), 在實(shí)驗(yàn)中期和實(shí)驗(yàn)后期, 養(yǎng)殖密度和飼料中魚(yú)粉水平不同未能引起青魚(yú)T-AOC、SOD和MDA的含量產(chǎn)生顯著性差異, 對(duì)青魚(yú)抗氧化指標(biāo)無(wú)交互效應(yīng)(P＞0.05)。

由表6可見(jiàn), 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間, 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)免疫應(yīng)激指標(biāo)無(wú)交互效應(yīng)(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)中期, 隨密度的升高, 高魚(yú)粉和低魚(yú)粉組青魚(yú)的IgM呈下降趨勢(shì), GLU呈上升的趨勢(shì)(P＞0.05); 在同密度下, H200組青魚(yú)的LSZ、C4、IgM、S-IgA和皮質(zhì)醇含量均高于L200組, GLU低于L200組(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)后期, 隨密度的增加, 高魚(yú)粉和低魚(yú)粉組青魚(yú)的IgM和COR含量均呈下降趨勢(shì)(P＞0.05)。在同密度下, H200組青魚(yú)的IgM和COR含量均高于L200組, GLU低于L200組(P＞0.05)。

表3 不同養(yǎng)殖密度下魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)形體指標(biāo)和體成分的影響Tab. 3 Effects of fishmeal level on the body composition in juvenile black carp at different stocking densities

3 討論

3.1 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)和腸道消化酶活力的影響

高密度作為慢性脅迫因子, 會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體損傷甚至死亡。有研究表明, 隨養(yǎng)殖密度升高, 尾斑石脂鯉(Brycon insignis)[17]、牙鲆(Paralichthys olivaceus)[18]和虹鱒魚(yú)(Oncorhynchus mykiss)[19]生長(zhǎng)受到抑制。其原因可能是： 其一, 過(guò)高的養(yǎng)殖密度會(huì)加劇群內(nèi)的競(jìng)爭(zhēng), 直接致使平均個(gè)體攝食量降低[20]; 其二, 密度過(guò)高會(huì)對(duì)魚(yú)類(lèi)造成一定程度的應(yīng)激效應(yīng), 機(jī)體需要消耗更多的能量來(lái)應(yīng)對(duì)脅迫, 以維持正常的代謝過(guò)程[21—23]。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 在低魚(yú)粉水平下,高密度組青魚(yú)的增重率有降低的趨勢(shì)但不顯著, 這與在軍曹魚(yú)(Rachycentron canadum)[24]和塞加內(nèi)爾鰨(Solea senegalensis)[25]的研究結(jié)果類(lèi)似, 其可能原因是魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)不僅受養(yǎng)殖密度的影響, 也與養(yǎng)殖品種、規(guī)格、飼料品質(zhì)、魚(yú)類(lèi)集群行為等因素有關(guān)。在烏鱧(Ophicephalus argus)上的研究結(jié)果就表明, 用冰鮮魚(yú)或配合飼料兩種不同的飼料投喂, 烏鱧的最適養(yǎng)殖密度是不同的[26]。在養(yǎng)殖后期, 低魚(yú)粉水平和高密度對(duì)青魚(yú)的增重率未產(chǎn)生顯著影響,但是在低魚(yú)粉情況下高密度組的存活率相對(duì)于低密度組有明顯的下降趨勢(shì), 這說(shuō)明魚(yú)粉水平較低和密度過(guò)高可能會(huì)加劇群內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)導(dǎo)致青魚(yú)存活率降低[20], 在低魚(yú)粉水平下青魚(yú)養(yǎng)殖密度少于100尾/箱為宜。同時(shí), 在本實(shí)驗(yàn)條件下, 隨飼料中魚(yú)粉水平的提高, 在前期能提高青魚(yú)幼魚(yú)增重率, 但在實(shí)驗(yàn)后期, 魚(yú)粉增加反而抑制了高密度組青魚(yú)的增重率,且高密度組和中密度組增重率低于低密度組, 結(jié)果與凡納濱對(duì)蝦上的研究結(jié)果類(lèi)似, 當(dāng)飼糧中的蛋白水平過(guò)高時(shí), 凡納濱對(duì)蝦的增重率和存活率反而降低[27]。本研究結(jié)果說(shuō)明在前期養(yǎng)殖階段提高魚(yú)粉水平能夠緩解高密度帶來(lái)的慢性脅迫, 其原因可能是養(yǎng)殖中期青魚(yú)對(duì)飼料蛋白質(zhì)品質(zhì)和魚(yú)粉水平要求高, 但隨著魚(yú)體規(guī)格的增大, 青魚(yú)對(duì)于魚(yú)粉的需求量下降, 過(guò)高的魚(yú)粉水平可能造成青魚(yú)營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩,從而導(dǎo)致青魚(yú)成活率、增重率降低, 劉昊昆[28]實(shí)驗(yàn)也證實(shí)不同生長(zhǎng)階段異育銀鯽(Carassiusauratus gibelio)對(duì)魚(yú)粉蛋白需求量不同。由此本實(shí)驗(yàn)得出在高魚(yú)粉水平下, 養(yǎng)殖密度為50尾/箱更為合適。另外, 高魚(yú)粉組的存活率與低魚(yú)粉組相比有一定程度的降低, 這可能是因?yàn)楦唪~(yú)粉水平飼料提高了魚(yú)的增重率, 由于網(wǎng)箱容量的問(wèn)題, 從而導(dǎo)致青魚(yú)成活率降低, 具體原因則需要進(jìn)一步的研究。

表4 不同養(yǎng)殖密度下魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)消化酶的影響Tab. 4 Effect of fishmeal levels on digestive enzymes in juvenile black carp at different stocking densities

表5 不同養(yǎng)殖密度下魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)抗氧化指標(biāo)的影響Tab. 5 Effects of fish meal level on anti-oxidation indexes of juvenile black carp at different stocking densities

臟體比能反應(yīng)機(jī)體的發(fā)育及健康狀態(tài), 臟體比的減少, 會(huì)使機(jī)體攝食與對(duì)飼料的利用降低[29]。在本實(shí)驗(yàn)中期, 低魚(yú)粉組青魚(yú)的臟體比隨密度的增加而下降, 可能是因?yàn)闄C(jī)體需要消耗更多的脂肪來(lái)供應(yīng)能量。而當(dāng)魚(yú)粉含量提高到20%時(shí), 密度的增加使青魚(yú)臟體比提高, 其原因是飼料中魚(yú)粉含量充足時(shí), 青魚(yú)優(yōu)先利用蛋白質(zhì), 更多的將脂肪儲(chǔ)存在體內(nèi)。當(dāng)環(huán)境較好時(shí), 蝦類(lèi)體內(nèi)也主要貯存脂類(lèi)[30]。與高魚(yú)粉組相比, 低魚(yú)粉飼料組青魚(yú)粗脂肪含量升高, 與臟體比和肝體比的變化趨勢(shì)一致, 說(shuō)明低魚(yú)粉組青魚(yú)內(nèi)臟中脂肪沉積, 但結(jié)果與建鯉(Cyprinus carpiovarJian)的研究結(jié)果不一致[31]。這可能是因?yàn)樵谝欢ǖ臄z食條件下, 青魚(yú)利用物質(zhì)的能力和順序不一致所致, 也有研究表明, 鹽度、溫度、饑餓及養(yǎng)殖密度等都會(huì)對(duì)魚(yú)體的生化組分產(chǎn)生影響[32]。

表6 不同養(yǎng)殖密度下魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)免疫應(yīng)激指標(biāo)的影響Tab. 6 Effects of fishmeal level on immunity indexes in juvenile black carp at different stocking densities

消化酶是魚(yú)類(lèi)消化過(guò)程中重要功能性物質(zhì), 對(duì)食物變化的適應(yīng)能力和對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取有顯著影響[33]。在本實(shí)驗(yàn)中期, 隨魚(yú)粉水平的升高, 青魚(yú)淀粉酶顯著提高, 與黃顙魚(yú)(Pseudobagrus fulvidraco)上的研究結(jié)果基本一致[34], 原因可能與豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子損害了腸道結(jié)構(gòu)[35], 從而抑制了淀粉酶活性有關(guān)。實(shí)驗(yàn)中期高魚(yú)粉中密度組胰蛋白酶活性顯著高于低魚(yú)粉組, 與牛蛙(Rana catesbeiana)[36]上的結(jié)果相似, 但高密度組胰蛋白酶活性反而降低, 原因可能是高密度擁擠脅迫影響青魚(yú)消化生理, 從而影響青魚(yú)腸道胰蛋白酶活性, 具體原因有待進(jìn)一步研究。在高魚(yú)粉情況下, 密度的升高使青魚(yú)的脂肪酶有上升的趨勢(shì), 原因與青魚(yú)提高脂肪的消化吸收以給機(jī)體提供更多的能量有關(guān), 這與機(jī)體的粗脂肪含量降低的結(jié)果是一致的。但在實(shí)驗(yàn)后期腸道消化酶活性并不會(huì)因?yàn)槊芏人交螋~(yú)粉水平的不同而產(chǎn)生差異, 在黃顙魚(yú)上的研究也得出魚(yú)粉水平降低不超過(guò)20%時(shí), 不會(huì)對(duì)其消化酶活力產(chǎn)生不良影響[34]。由此可見(jiàn), 腸道消化酶并不是影響高密度組青魚(yú)后期生長(zhǎng)性能下降的關(guān)鍵因素。

3.2 養(yǎng)殖密度和魚(yú)粉水平對(duì)青魚(yú)免疫、應(yīng)激的影響

免疫球蛋白M是魚(yú)類(lèi)主要的一種抗體, 能與相應(yīng)的抗原結(jié)合, 抑制細(xì)菌增殖等。在本實(shí)驗(yàn)中, 隨密度的升高, 高魚(yú)粉和低魚(yú)粉組青魚(yú)的免疫球蛋白M均呈下降趨勢(shì), 與虹鱒[37]研究結(jié)果類(lèi)似。Lin等[38]也證實(shí)養(yǎng)殖密度增加對(duì)魚(yú)類(lèi)非特異性免疫有負(fù)面影響。溶菌酶是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一, 在抵抗外來(lái)病原入侵中起重要作用[39], 而慢性脅迫會(huì)造成溶菌酶活性降低[40]。在高密度水平下, 低魚(yú)粉組的溶菌酶活性低于高魚(yú)粉組, 可能是因?yàn)槎蛊珊锌範(fàn)I養(yǎng)因子[35], 會(huì)降低魚(yú)類(lèi)溶菌酶的活性, 對(duì)青魚(yú)的免疫功能造成損傷, 這與異育銀鯽[41]的研究結(jié)果相類(lèi)似。但在實(shí)驗(yàn)后期, 密度水平與魚(yú)粉水平均未能對(duì)青魚(yú)免疫指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響,具體原因是否與青魚(yú)規(guī)格有關(guān), 有待進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)。并且血清中抗氧化指標(biāo)也能說(shuō)明機(jī)體的免疫能力。其中總抗氧化能力的變化可以反映機(jī)體內(nèi)自由基的代謝情況, 對(duì)判斷機(jī)體的健康狀況及抗氧化防御能力具有重要意義[42]。在本實(shí)驗(yàn)中, 青魚(yú)血清中抗氧化指標(biāo)并未因密度水平與飼料中魚(yú)粉水平的不同而產(chǎn)生顯著變化。

通常, 高密度應(yīng)激下魚(yú)類(lèi)血清皮質(zhì)醇水平會(huì)呈上升趨勢(shì), 而皮質(zhì)醇短期的升高能夠促進(jìn)體蛋白分解, 加速脂肪的氧化, 糖類(lèi)的合成增多, 從而促使機(jī)體獲得足夠的能量用以抵御脅迫所需。在本實(shí)驗(yàn)中養(yǎng)殖密度的升高對(duì)青魚(yú)的皮質(zhì)醇含量沒(méi)有顯著影響, 與鯽(Carassius auratus)在擁擠脅迫中血清皮質(zhì)醇的變化不一致[40]。可能是因?yàn)槠べ|(zhì)醇代謝途徑改變, 具體原因有待進(jìn)一步研究。在魚(yú)類(lèi)面對(duì)脅迫時(shí), 血液中葡萄糖的變化可以作為代謝的重要響應(yīng)指標(biāo)之一。在本實(shí)驗(yàn)中期, 高密度組青魚(yú)血糖含量高于低密度組, 與雜交鱧(Channa maculata×C.argus)研究結(jié)果一致[43]。這說(shuō)明一方面, 脅迫使機(jī)體基礎(chǔ)代謝水平升高, 需要消耗更多的糖用以供能;另一方面, 皮質(zhì)類(lèi)固醇可以提高體組織對(duì)葡萄糖的利用率, 同時(shí)促進(jìn)肝臟糖異生[44]。在實(shí)驗(yàn)后期時(shí),高密度組的青魚(yú)血糖含量低于低密度組, 可能是因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間經(jīng)受擁擠脅迫致使機(jī)體對(duì)糖的利用過(guò)度而造成血糖含量下降, 與牙鲆(Paralichthys olivaceus)的研究結(jié)果一致[18]。同時(shí), 10%魚(yú)粉水平下高密度組的血糖水平較低密度組提高10%, 而20%魚(yú)粉水平下高密度組較低密度組提高19%, 高魚(yú)粉飼料組血糖提高幅度高于低魚(yú)粉組, 由此也說(shuō)明, 高魚(yú)粉水平和高養(yǎng)殖密度可能引起青魚(yú)產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng), 從而導(dǎo)致血糖水平發(fā)生變化。

4 結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)條件下, 高密度實(shí)驗(yàn)對(duì)養(yǎng)殖中期青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能和機(jī)體免疫、抗應(yīng)激能力有負(fù)面影響, 提高飼料魚(yú)粉水平對(duì)生長(zhǎng)、免疫和抗應(yīng)激能力有一定改善作用。在實(shí)驗(yàn)后期高密度降低了低魚(yú)粉飼料組的成活率, 顯著降低了高魚(yú)粉組的增重率,將飼料中魚(yú)粉水平從10%提高至20%對(duì)高密度養(yǎng)殖下青魚(yú)生長(zhǎng)性能和免疫功能無(wú)改善作用。