劉曉蘭，鄧健，王雅，邵潞瀅，蔡坤，李從發(fā)，劉四新

（海南大學(xué)，海南海口570228）

椰子是熱帶和亞熱帶的特色植物，椰子產(chǎn)業(yè)在海南農(nóng)產(chǎn)品加工中占有重要地位。目前椰子食品加工業(yè)主要是以成熟椰肉為原料生產(chǎn)椰汁、椰漿、椰子油、椰蓉等，椰子水是其加工副產(chǎn)物[1]，因得不到有效利用而被丟棄，不僅浪費(fèi)資源，也對(duì)環(huán)境產(chǎn)生了污染。椰子水由93%的水和3%的糖（葡萄糖、果糖、蔗糖），維生素（維生素 C、維生素 B 族），礦物質(zhì)（鉀、鈉、鎂、鈣等）和蛋白質(zhì)等組成，還富含許多有益的生物活性化包括精氨酸，丙氨酸，賴氨酸，谷氨酸以及植物激素，生長(zhǎng)促進(jìn)因子[2-4]。之前在椰纖果的發(fā)酵生產(chǎn)中，新鮮椰子水經(jīng)過(guò)幾天的自然預(yù)發(fā)酵，其椰纖果產(chǎn)量顯著提高[5]。顯然，椰子水成分經(jīng)微生物的自然發(fā)酵后發(fā)生了很大變化，酸度顯著提高，這些變化過(guò)程為后續(xù)利用提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

長(zhǎng)期以來(lái)，隨著家禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和“減抗、無(wú)抗”的需要，一種新型的飼料——微生物發(fā)酵飼料，持續(xù)出現(xiàn)在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中并發(fā)揮重要作用，即利用微生物對(duì)農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品、輕工業(yè)廢棄物等進(jìn)行發(fā)酵利用和轉(zhuǎn)化，研發(fā)出天然的、具有抗病抗菌作用的、能改善畜禽腸道健康狀況的深加工產(chǎn)品。目前，在雞的商業(yè)養(yǎng)殖中，飼料成本占雞仔生產(chǎn)總成本的70%左右，且全球飼料價(jià)格還在持續(xù)升高，人們開(kāi)始將焦點(diǎn)轉(zhuǎn)向了飼料替代物或非常規(guī)飼料[6-7]，通過(guò)發(fā)酵或添加益生菌及其制劑的方式來(lái)提高肉雞常規(guī)飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的價(jià)值，促進(jìn)雞仔生產(chǎn)、生長(zhǎng)性能，改善胃腸道微生態(tài)，調(diào)節(jié)免疫等[8]。研究表明，發(fā)酵可以提高各種營(yíng)養(yǎng)素的消化率，例如有機(jī)物，氮，氨基酸，纖維和鈣等[9]。發(fā)酵后的產(chǎn)品其有機(jī)酸（主要是乳酸）的濃度提高，pH 值降低，這些特性使得發(fā)酵飼料特別有益于改善雞的胃腸功能和健康[10]。國(guó)內(nèi)也有學(xué)者研究枯草芽孢桿菌、市售微生態(tài)制劑、菊苣草漿等活性物質(zhì)對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和糞便氣味的影響[11-13]，通常糞便越臭，說(shuō)明仔雞健康指數(shù)越低，患病隱患越高，通過(guò)對(duì)糞便的理化測(cè)定，可從一定程度上判斷雞仔的健康狀況[14]。基于此，本文探討經(jīng)自然發(fā)酵后的椰子水作為飼料輔料、濕料拌喂文昌雞，考察對(duì)雞仔生長(zhǎng)的影響和糞便理化指標(biāo)的變化，為工業(yè)來(lái)源椰子水尋求資源利用的新途徑奠定前期基礎(chǔ)，相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 材料與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

椰子水及其發(fā)酵處理：市售成熟椰子果、原地破殼取水、過(guò)濾后裝入干凈塑料桶迅速帶回實(shí)驗(yàn)室，自然發(fā)酵3 d 后冷凍備用。

飼料：海南某飼料有限公司，在雛雞階段（1 周～3周）飼喂 301 號(hào)雛雞飼料，到中期（3 周～5 周）時(shí)，飼喂722 號(hào)中雞飼料。

試驗(yàn)用雞：選取剛出殼產(chǎn)自海南文昌的雞苗60只，公母各30 只，以養(yǎng)殖戶模式（市售雛雞干飼料每日3 次+自由飲水）喂養(yǎng)一周，剔除體弱或畸形雞只后，挑選40只（1 周齡）分公母（示以 C-和 H-）、按體重基本一致分為2 組，每組2 個(gè)平行，每個(gè)平行重復(fù)10 只。

1.2 試劑與儀器

甲醇、乙腈（色譜級(jí)）：美國(guó)Tedia 公司；亞硝基鐵氰化鈉（分析純）：上海麥克林生化科技有限公司；苯酚、NaOH、檸檬酸三鈉（分析純）：廣州化學(xué)試劑廠。

Agilent 1260 高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司；CQ-10 超聲波清洗機(jī)：廣州明珠電器有限公司；KL-UP-UV-10 純水機(jī)：臺(tái)灣艾科有限公司；Evolution300 紫外分光光度計(jì)：美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 飼喂過(guò)程及其管理

1）試驗(yàn)組：C-FCW；H-FCW，飼糧：自然發(fā)酵椰子水（fermentationcoconut water，F(xiàn)CW）1 ∶1（質(zhì)量比）拌喂，自由飲用50%自然發(fā)酵椰子水；

2）對(duì)照組：C-CK；H-CK，飼糧+自來(lái)水。

雞群采取自由采食與飲水的方式。保持雞房?jī)?nèi)通風(fēng)順暢，室溫維持在30 ℃～32 ℃，注意避光并觀察雞群夜間有無(wú)異常呼吸音，及時(shí)觀察雞群糞便是否異常，剔除病雞。飼喂采取1 d 3 次喂食的方式，分別為早上8 點(diǎn)，中午13 點(diǎn)，下午18 點(diǎn)，保證仔雞在充分飲水后，再予喂食，切勿喂食過(guò)飽導(dǎo)致雞挑食，浪費(fèi)飼料的同時(shí)，也影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 雞仔增重的測(cè)定

試驗(yàn)開(kāi)始后，每周早晨8 點(diǎn)半，以組為單位，對(duì)仔雞進(jìn)行空腹稱重（g），并記錄體重信息，用于生長(zhǎng)性能的測(cè)定。

1.4.2 糞便的采集與處理

以周作為一個(gè)試驗(yàn)周期，每個(gè)周期結(jié)束的那天早晨排便后，觀察記錄后迅速將糞便收集至無(wú)菌離心管中，-20 ℃保存待測(cè)。

1.4.3 仔雞體味及其糞便臭味

參考周佳，Nery J 等[15-16]的方法，稍作修改后對(duì)仔雞體味和糞便臭味進(jìn)行等級(jí)評(píng)價(jià)。具體評(píng)分細(xì)則如下：1 分，很輕微的體/臭味；2 分，能感覺(jué)到較輕的體/臭味；3 分，能明顯感覺(jué)到體/臭味。

1.4.4 氨態(tài)氮含量的測(cè)定

參考蒲萬(wàn)霞等[17]的方法，稍作修改后采用靛酚藍(lán)-分光光度計(jì)法測(cè)定仔雞糞便中氨態(tài)氮的含量。

1.4.5 吲哚乙酸含量的測(cè)定

參考楊航、俞曉英等[18-19]的方法，修改后采用HPLC法，測(cè)定仔雞糞便中吲哚乙酸的含量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用GraphPad Prism6.0 和DPS 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。結(jié)果中呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)均為10 只仔雞的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。

2 結(jié)果與分析

2.1 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞體重增長(zhǎng)的影響

自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞體重的影響見(jiàn)圖1。

圖1 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞體重的影響Fig.1 Effect of naturally fermented coconut water on body weight of Wenchang chicken

從圖1 可知，2 周齡之前，試驗(yàn)組與對(duì)照組的體重?zé)o顯著差異，可能是由于飼喂時(shí)間太短、對(duì)濕料拌喂需要適應(yīng)過(guò)程所致；2 周齡后，試驗(yàn)組的體重逐漸高于對(duì)照組，3 周后，試驗(yàn)組與對(duì)照組差距進(jìn)一步加大，且公母雞之間的生長(zhǎng)出現(xiàn)差異，這可能與公雞的生理機(jī)能有關(guān)；到 5 周齡時(shí)，C-CK 組、H-CK 組、C-FCW 組、H-FCW 組活體重比1 周齡時(shí)平均增長(zhǎng)了289.82、285.62、324.46、14.12 g，試驗(yàn)組的每組平均日增重比相應(yīng)對(duì)照組增加 12.58、11.21 g，差異顯著（p＜0.05）。這說(shuō)明自然發(fā)酵椰子水用于飼喂文昌雛雞可促進(jìn)仔雞胃腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和轉(zhuǎn)化，提高養(yǎng)分利用率。

2.2 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞體味及糞便臭味的影響

自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞體味的影響見(jiàn)圖2。

從圖2 可知，試驗(yàn)組公母雞的體味分別從3 周齡和2 周齡開(kāi)始逐漸降低，而對(duì)照組公雞體味在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中無(wú)顯著變化（p＞0.05），母雞體味略有減小。說(shuō)明自然發(fā)酵椰子水對(duì)仔雞體味具有改善作用。

圖2 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞體味的影響Fig.2 Effect of naturally fermented coconut water on the body odor of Wenchang chicken

自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便臭味的影響見(jiàn)圖3。

圖3 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便臭味的影響Fig.3 Effect of naturally fermented coconut water on the odor of Wenchang chicken feces

由圖3 可知，整個(gè)飼喂過(guò)程中，對(duì)照組均能感受到明顯臭味；2 周齡時(shí)，試驗(yàn)組糞便的臭味開(kāi)始降低，至5周齡時(shí)，試驗(yàn)組糞便僅嗅到輕微的臭味。從等級(jí)評(píng)分的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，自然發(fā)酵椰子水拌喂能有效降低文昌雞糞便的臭味。

2.3 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便中氨態(tài)氮含量的影響

自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便中氨態(tài)氮的影響見(jiàn)圖4。

圖4 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便中氨態(tài)氮的影響Fig.4 Effect of naturally fermented coconut water on ammonia nitrogen in Wenchang chicken feces

如圖4 所示，在整個(gè)飼喂過(guò)程中，對(duì)照組糞便中氨態(tài)氮含量均無(wú)顯著變化；2 周齡時(shí)，試驗(yàn)組糞便中氨態(tài)氮含量開(kāi)始逐漸降低，至5 周齡時(shí)，試驗(yàn)組公母雞糞便中氨態(tài)氮的含量與對(duì)照組相比分別降低了0.58、0.47 mg/g（p＜0.05）。說(shuō)明椰子水經(jīng)自然發(fā)酵后飼喂能夠降低仔雞糞便中氨態(tài)氮含量。

2.4 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便中吲哚乙酸含量的影響

吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖（high performance liquid chromatography，HPLC）見(jiàn)圖 5。

以峰面積Y 對(duì)吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度X 進(jìn)行線性回歸，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，吲哚乙酸在范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=967.86X+0.027 6，r=0.998。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出了各個(gè)處理組仔雞新鮮糞便中吲哚乙酸的含量。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖6。

自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便中吲哚乙酸的影響見(jiàn)圖7。

圖5 吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)品HPLC 圖Fig.5 HPLC diagram of indole acetic acid standard

圖6 雞仔糞便樣品HPLC 圖Fig.6 HPLC diagram of chicken stool samples

圖7 自然發(fā)酵椰子水對(duì)文昌雞糞便中吲哚乙酸的影響Fig.7 Effect of naturally fermented coconut water on the indole acetic acid in Wenchang chicken feces

由圖7 可知，對(duì)照組糞便中吲哚乙酸的含量在整個(gè)飼喂過(guò)程中均無(wú)顯著變化。2 周齡時(shí)，試驗(yàn)組糞便中吲哚乙酸含量開(kāi)始降低，至5 周齡時(shí)，試驗(yàn)組公母雞糞便中吲哚乙酸的含量與對(duì)照組相比分別降低了1.62、1.47 μg/g（p＜0.05）。這可能是因?yàn)樽匀话l(fā)酵椰子水中的某些微生物及其代謝產(chǎn)物影響了飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的代謝途徑，使得糞便中氨態(tài)氮、吲哚乙酸的含量降低。

3 討論

在商業(yè)飼料中添加自然發(fā)酵椰子水作為飼喂輔料可在一定程度上促進(jìn)文昌雞體重的增長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)一個(gè)月的飼喂，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組公母仔雞活體重分別增長(zhǎng)了12.03%、9.97%；每組平均日增重分別增長(zhǎng)了11.88%、9.90%。椰子水經(jīng)自然發(fā)酵后，其中的微生物、酸度以及香氣成分等均發(fā)生了變化，可能正是因?yàn)檫@些變化使得試驗(yàn)組飼料的口感，營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和轉(zhuǎn)化得到改善，促進(jìn)仔雞體重的增長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)糞便質(zhì)量，顏色及臭味的等級(jí)評(píng)分，可以在第一時(shí)間有效，直觀地反映雞仔的健康狀況，當(dāng)仔雞感染不同疾病時(shí)，其糞便質(zhì)量，顏色和臭味等特征均會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，根據(jù)這些特征初步判定雞仔所患疾病[20]，以便及時(shí)采取防治措施，最大限度減少經(jīng)濟(jì)損失。試驗(yàn)采用等級(jí)評(píng)分的方法對(duì)文昌雞的體味、糞便臭味進(jìn)行評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組僅能嗅到輕微的體味，說(shuō)明自然發(fā)酵椰子水可改善仔雞體味，后續(xù)可通過(guò)測(cè)試雞肉的口感進(jìn)一步驗(yàn)證；自然發(fā)酵椰子水也有效降低了仔雞糞便中氨態(tài)氮和吲哚乙酸的含量，飼喂一個(gè)月后，試驗(yàn)組氨態(tài)氮和吲哚乙酸含量分別降低了 0.58、0.47、1.62、1.47 μg/g，這可能與潛在改變了仔雞腸道內(nèi)環(huán)境有關(guān)。

本試驗(yàn)把目前海南工業(yè)椰子水資源有效利用起來(lái)，投入到家禽養(yǎng)殖業(yè)中，既有助于解決廢棄椰子水帶來(lái)的環(huán)境問(wèn)題，又能改善仔雞體重的增長(zhǎng)，減輕糞便的臭味，降低患病的風(fēng)險(xiǎn)，緩解糞便對(duì)環(huán)境造成的污染，還能提高成熟椰子的附加值，為工業(yè)來(lái)源的椰子水尋求資源利用的新途徑奠定前期基礎(chǔ)。