趙友芳，黃國娟，陳婭芳，於 祥

(貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

香豆素是一種具有苯并α-吡喃酮的結(jié)構(gòu)，分子式為C9H6O2，分子量為146.04，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。香豆素類化合物是一類具有香豆素母核的雜環(huán)化合物，具有抗癌[1]、抗炎[2]、抗菌[3]等生物活性。此外，香豆素類化合物對乙酰膽堿酯酶也具有抑制活性，如8-羥基香豆素[4]、蛇床子素[5]等，都表現(xiàn)出一定的對乙酰膽堿酯酶的抑制活性?；酋ｋ觐惢衔镆蚝?NHN=CH-結(jié)構(gòu)，具有很強的配位能力，也具有多種生物活性[6]。

為研究新型高效的乙酰膽堿酯酶抑制劑，本論文采用亞活性結(jié)構(gòu)拼接的方法，以7-二乙氨基香豆素為母核，引入磺酰腙結(jié)構(gòu)，將兩種活性結(jié)構(gòu)連接在一起，設(shè)計合成了3個衍生物(合成路線如圖2所示)，并采用Ellman法[7]測定了目標(biāo)化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

圖1 香豆素結(jié)構(gòu)

圖2 目標(biāo)化合物的合成路線

Fig.2 The synthetic route of the target compounds

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance 600 MHz 核磁共振儀 (Bruker 公司)，TMS為內(nèi)標(biāo)；Thermo DSQ 質(zhì)譜儀(Thermo 公司)；YRT-3型熔點儀(南京旭析儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Heidolph公司)RT-6100酶標(biāo)分析儀(雷杜公司)；所有試劑與溶劑均為市場所售分析純級。

1.2 實驗部分

1.2.1 中間體2的合成 將稱取好的7-二乙氨基-4-甲基香豆素(1，1 mmol)置于50 mL 的圓底燒瓶中，加入10 mL 1,4-二氧六環(huán)，升溫至60 ℃。稱取二氧化硒(1.1mmol)加入反應(yīng)液中，然后將溫度升高到80 ℃，攪拌反應(yīng)。TLC檢測反應(yīng)進(jìn)度。反應(yīng)進(jìn)行4小時后，底物反應(yīng)完全。將反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，除去反應(yīng)液中的沉淀。沉淀用20 mL二氯甲烷洗滌。合并有機溶劑，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，薄層硅膠層析分離，得黃色固體2，產(chǎn)率為73%，熔點171～173 ℃。

1.2.2 目標(biāo)化合物的合成 稱取1 mmol 中間體2、1 mmol取代磺酰肼于50 mL圓底燒瓶中。10 mL 無水乙醇溶解。室溫攪拌反應(yīng)。TLC進(jìn)行跟蹤檢測反應(yīng)是否反應(yīng)完全。5 ～ 12h后，底物反應(yīng)完全。將反應(yīng)液冷卻至室溫直到?jīng)]有固體析出。然后抽濾，所得固體用無水乙醇重結(jié)晶得腙類衍生物3a -c。

1.2.3 活性測定 采用Ellman法[7]對AChE體外抑制活性進(jìn)行測試。將稱好的樣品加適量二甲亞砜溶解后加pH 7.4的0.1mol/L磷酸緩沖液(PBS)溶液，配制成1mmol/L的待測溶液。陽性對照采用他克林，空白對照采用磷酸緩沖液(PBS)溶液。測定時首先在96孔板上加入用待測樣品10 μL，再依次加入40 μLPB、20 μL 2.5 mmol/L 的5,5-二流雙硝基苯甲酸(DTNB)、10 μL的電鰻乙酰膽堿酯酶，振蕩混勻，37℃預(yù)孵10min，然后加入20 μL 10 mmol/L的碘化硫代乙酰膽堿，37℃反應(yīng)10min，加入30μL 1%的SDS終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀測定405nm吸收值并計算樣品對乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

2 結(jié)果與討論

目標(biāo)化合物的合成路線圖如圖2所示。本論文以1,4-二氧六環(huán)做溶劑，SeO2做氧化劑，將7-二乙氨基-4-甲基香豆素的甲基氧化成醛基，然后與取代磺酰肼反應(yīng)，生成7-二乙氨基香豆素磺酰腙類衍生物。所有目標(biāo)化合物都經(jīng)熔點、1H NMR和MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。解譜數(shù)據(jù)如下;

3a：產(chǎn)率70%，黃色固體，熔點176～178 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO ～ d6) δ：12.21(s，1H)，8.00 (d，J=9.6 Hz，1H)，7.98 (s，1H)，7.91～7.92 (m，2H)，7.69～7.71 (m，1H)，7.64 (t，J=7.2 Hz，2H)，6.69 (dd，J = 9.6，2.4 Hz，1H)，6.51 (d，J=2.4 Hz，1H)，6.15 (s，1H)，3.41 (q，J=7.2 Hz，4H)，1.11 (t，J=7.0 Hz，6H)；MS m/z：422.1 ([M+Na]+，100)。

3b：產(chǎn)率67%，黃色固體，熔點160～162 ℃；1H NMR (600 MHz，DMSO～d6) δ：12.12 (s，1H)，7.99 (d，J=9.0 Hz，1H)，7.96 (s，1H)，7.79(d，J=8.4 Hz，2H)，7.45(d，J=7.8 Hz，2H)，6.67(dd，J=9.0，2.4 Hz，1H)，6.51(d，J=2.5 Hz，1H)，6.15(s，1H)，3.41(q，J=7.2 Hz，4H)，2.37(s，3H)，1.11(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：436.0 ([M+Na]+，100)。

3c：產(chǎn)率62%，黃色固體，熔點161～163 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO～d6) δ：12.64 (s，1H)，8.53 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.40 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.35 (d，J=7.2 Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.80(d，J=9.0 Hz，1H)，7.72(t，J=8.4 Hz，1H)，7.61(t，J=8.4 Hz，1H)，7.26(d，J=7.2 Hz，1H)，6.55(dd，J=9.6，2.4 Hz，1H)，6.46(d，J=2.4 Hz，1H)，6.09(s，1H)，3.39(d，J=7.2 Hz，4H)，2.80(s，6H)，1.09(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：515.3([M+Na]+，100)。

采用改進(jìn)型的Ellman法測定了目標(biāo)化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性，活性結(jié)果如表1所示。

表1 目標(biāo)化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性(100μmol/L)

a本測試平行3次，重復(fù)2次；b陽性對照，測試濃度為1μmol/L。

如表1所示，7-二乙氨基香豆素磺酰腙類衍生物對乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性，在100μmol/L濃度下，3個目標(biāo)化合物抑制活性分別達(dá)到32.6%，29.3%和26.1%，但都弱于陽性對照他克林。

3 結(jié)論

本文采用亞活性結(jié)構(gòu)拼接的方法，以7-二乙氨基-4-甲基香豆素為原料，通過氧化、親核反應(yīng)，在香豆素母核上引入磺酰腙結(jié)構(gòu)，合成了3個7-二乙氨基-香豆素類磺酰腙類衍生物，并進(jìn)行了體外抑制乙酰膽堿酯酶活性測試。初步測試結(jié)果顯示，目標(biāo)化合物對乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性。