陳美安，姜建萍，馬雯芳

(廣西中醫(yī)藥大學 藥學院，廣西 南寧 530001)

滇桂艾納香為菊科艾納香屬植物滇桂艾納香Blumeariparia(Bl.) DC.的干燥全草，又名白花九里明、管芽、假東風草，主要產(chǎn)于我國云南東南部和廣西西南部，在印度、緬甸、泰國、馬來西亞、中南半島、菲律賓、印度尼西亞、巴布亞新幾內(nèi)亞和所羅門群島也有分布。壯醫(yī)認為其味微苦淡、性微溫，具有活血調(diào)經(jīng)、祛風除濕、止血、利水等作用，用于經(jīng)期提前、產(chǎn)后流血不止、產(chǎn)后浮腫、不孕癥、陰瘡、風濕骨痛等征[1-3]。目前，國內(nèi)外對滇桂艾納香化學成分及藥理作用的研究報道較少?，F(xiàn)代藥理研究表明滇桂艾納香具有止血、縮宮、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、保護胃黏膜及抗菌等多種藥理作用[4]，從該藥材中分離得到的化學成分包括苷類、糖類、黃酮類、酚酸類、香豆素、甾體類和揮發(fā)油等，其中主要以黃酮類、酚酸類及揮發(fā)性成分為主[5-14]。滇桂艾納香作為廣西民間常用壯藥，其中藥復方制劑在臨床上主要作為婦科藥被廣泛使用，如婦血康顆粒、滇桂艾納香膠囊和伊血安顆粒等，常用于治療產(chǎn)后出血、瘀血阻滯所致的月經(jīng)量多、經(jīng)期延長等婦科癥，且均具有較好的治療效果。另外，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[15-16]，滇桂艾納香藥材具有止血及縮宮活性，并通過活性篩選明確了其乙酸乙酯提取物是止血、縮宮活性的主要有效部位，但有效成分及作用機制尚不明確，而且很多具有生物活性的成分尚未被挖掘出來。

為了進一步研究滇桂艾納香生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采用反復硅膠色譜法和重結(jié)晶法對滇桂艾納香乙酸乙酯部位進行化學成分研究，分離得到11個化合物，通過理化方法和波譜數(shù)據(jù)對化合物的結(jié)構(gòu)進行鑒定，分別為：木栓酮(1)、木栓醇(2)、β-谷甾醇(3)、5-羥基-7,3′,4′-三甲氧基黃酮(4)、山奈酚(5)、木犀草素(6)、鄰苯二甲酸二丁酯(7)、原兒茶醛(8)、原兒茶酸(9)、咖啡酸(10)、水楊酸(11)。其中，化合物1、2、4、7首次從該植物中分離得到，為擴大及充分開發(fā)利用其藥用資源提供了實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥物與試劑

新鮮滇桂艾納香藥材采自廣西百色，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學藥用植物教研室朱意麟實驗師鑒定為菊科艾納香屬植物滇桂艾納香Blumeariparia(Bl.) DC.的干燥全草，除雜，陰干，粉碎成粗粉，備用。

柱層析用硅膠(75～150 μm、48～75 μm，青島海洋化工廠)；薄層層析用硅膠G(青島海洋化工廠)；除體積分數(shù)95%食用級酒精和純水外，其余試劑均為分析純，均購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 主要儀器

雙聚焦磁質(zhì)譜儀(ZAB-HS，英國VG公司)；Bruker Dre-500 MHz，Bruker AV-400 MHz核磁共振儀(瑞士Bruker)；YRT-3型熔點儀(天津大學精密儀器廠)；AJ150電子分析天平(瑞士梅特勒)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科技公貿(mào)有限公司)；優(yōu)普純水儀(四川優(yōu)普超純科技有限公司)。

2 提取與分離

取滇桂艾納香干燥藥材粗粉8.9 kg，用適量體積分數(shù)70%乙醇浸泡3 d后，以10倍量體積分數(shù)70%乙醇滲漉提取，收集滲濾液，減壓回收溶劑，得乙醇總提取物1 173.9 g。將乙醇總提取物溶解，分散于硅膠中，依次用石油醚(60～90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇回流提取，回收溶劑，分別得石油醚浸膏(18.62 g)、氯仿浸膏(23.94 g)、乙酸乙酯浸膏(22.34 g)和正丁醇浸膏(154.92 g)。

取乙酸乙酯浸膏20.56 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇(100∶0 → 100∶1 → 80∶1 → 40∶1 → 25∶1 → 20∶1 → 15∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 2∶1 → 1∶1 → 0∶100，體積比，全文同)梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并相似的組分，得8個組分Fr.1～Fr.8。Fr.1經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0 → 0∶100)梯度洗脫，得4個組分Fr.1-1～Fr.1-4；Fr.1-1經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯(5∶1 → 1∶10)梯度洗脫，得化合物7(20.2 mg)；Fr.1-3經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯(50∶1 → 1∶1)梯度洗脫，石油醚-乙酸乙酯(2∶1)重結(jié)晶得化合物1(13.5 mg)，氯仿-丙酮(1∶1)重結(jié)晶得化合物2(17.1 mg)；Fr.1-4經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮(50∶1 → 1∶2)梯度洗脫，丙酮重結(jié)晶得化合物3(9.6 mg)。Fr.3經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮(80∶1 → 0∶100)梯度洗脫，丙酮重結(jié)晶得化合物4(7.0 mg)。Fr.5經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(10∶1 → 1∶10)梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶得化合物5(11.5 mg)。Fr.6經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(100∶0 → 0∶100)和丙酮-甲醇(50∶1 → 0∶100)梯度洗脫，得3個組分Fr.6-1～Fr.6-3；Fr.6-1經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(30∶1 → 1∶50)梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶得化合物6(18.7 mg)；Fr.6-2經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(20∶1 → 1∶20)梯度洗脫，氯仿-甲醇(1∶1)重結(jié)晶得化合物8(9.5 mg)；Fr.6-3經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-甲醇(10∶0 → 1∶10)梯度洗脫，丙酮重結(jié)晶得化合物9(7.4 mg)，乙酸乙酯重結(jié)晶得化合物10(18.1 mg)，丙酮-水(1∶3)重結(jié)晶得化合物11(8.2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶(乙酸乙酯)，m.p. 260～262 ℃。EI-MS(m/z)：426 [M]+，分子式C30H50O。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 1.18(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-30), 1.01(3H, s, H-29), 1.00(3H, s, H-27), 0.95(3H, s, H-26), 0.88(3H, s, H-25), 0.87(3H, s, H-23), 0.72(3H, s, H-24)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 22.3(C-1), 41.5(C-2), 213.3(C-3), 58.2(C-4), 42.1(C-5), 41.2(C-6), 18.2(C-7), 53.0(C-8), 37.4(C-9), 59.4(C-10), 35.3(C-11), 30.5(C-12), 39.6(C-13), 38.2(C-14), 32.3(C-15), 35.9(C-16), 30.0(C-17), 42.7(C-18), 35.6(C-19), 28.1(C-20), 32.7(C-21), 39.2(C-22), 6.8(C-23), 14.6(C-24), 17.9(C-25), 20.2(C-26), 18.6(C-27), 32.1(C-28), 35.0(C-29), 31.7(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17-18]報道基本一致，故鑒定化合物1為木栓酮。

化合物2：白色鱗片狀結(jié)晶(乙酸乙酯)，m.p. 285～287 ℃。EI-MS(m/z)：428[M]+，分子式C30H52O。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 3.67(1H, s, H-3), 1.17(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-27), 1.00(3H, s, H-29), 0.95(3H, s, H-30), 0.94(3H, s, H-24), 0.90(3H, s, H-23), 0.86(3H, s, H-25)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 15.7(C-1), 35.9 (C-2), 72.5(C-3), 49.0(C-4), 39.5(C-5), 41.6(C-6), 17.4(C-7), 53.0(C-8), 37.0(C-9), 61.2(C-10), 35.2(C-11), 30.5(C-12), 37.7(C-13), 38.2(C-14), 32.0(C-15), 35.4(C-16), 29.9(C-17), 42.7(C-18), 35.4(C-19), 28.0(C-20), 32.6(C-21), 39.1(C-22), 11.4(C-23), 16.2(C-24), 18.1(C-25), 18.5(C-26), 20.0(C-27), 32.0(C-28), 31.6(C-29), 34.9(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道基本一致，故鑒定化合物2為木栓醇。

化合物3：無色針狀結(jié)晶(氯仿)，m.p. 137～139 ℃。Liebermann-Burchard呈陽性，氯仿-濃硫酸反應(yīng)呈陽性，α-萘酚-濃硫酸反應(yīng)呈陰性，推測為甾醇類化合物，與β-谷甾醇對照品共薄層色譜，在3種不同的展開溶劑系統(tǒng)中，兩者Rf值及顯色行為一致，與對照品混合后熔點不下降，并與文獻[19]報道一致，故鑒定化合物3為β-谷甾醇。

化合物4：黃色粉末狀結(jié)晶(氯仿)，m.p. 189～191 ℃。EI-MS(m/z)：328 [M]+，分子式C18H16O6。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 12.79(1H, s, 5-OH), 7.52(1H, dd,J=8.2, 2.0 Hz, H-6′), 7.34(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.98(1H, d,J=8.2 Hz, H-5′), 6.60(1H, s, H-3), 6.48(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.37(1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 3.99(3H, s, 7-OCH3), 3.96(3H, s, 4′-OCH3), 3.90(3H, s, 3′-OCH3)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3): 165.8(C-2), 104.8(C-3), 182.7(C-4), 162.2(C-5), 98.3(C-6), 164.2(C-7), 93.0(C-8), 157.8(C-9), 105.7(C-10) ,124.0(C-1′) ,109.2(C-2′) ,152.6(C-3′), 149.5(C-4′), 111.5(C-5′), 120.3(C-6′), 56.2(7-OCH3), 56.5(4′-OCH3), 56.6(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]報道基本一致，故鑒定化合物4為5-羥基-7, 3′, 4′-三甲氧基黃酮。

化合物5：黃色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 275～276 ℃。EI-MS(m/z)：286 [M]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.46(1H, s, 5-OH), 10.86(1H, s, 7-OH), 10.15(1H, s, 4′-OH), 9.41(1H, s, 3-OH), 8.01(2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.90(2H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.43(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.17(1H, d,J=2.0 Hz, H-6)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 148.0(C-2), 137.1(C-3), 177.3(C-4), 162.5(C-5), 99.2(C-6), 165.5(C-7), 94.4(C-8), 158.2(C-9), 104.5(C-10), 123.7(C-1′), 130.6(C-2′, 6′ ), 116.3(C-3′, 5′), 160.5(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[21]報道基本一致，故鑒定化合物5為山奈酚。

化合物6：黃色粉末狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 328～330 ℃。EI-MS(m/z)：286 [M]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.98(1H, s, 5-OH), 10.83(1H, s, 7-OH), 9.93(1H, s, 4′-OH), 9.43(1H, s, 3′-OH), 7.43(1H, d,J=8.1 Hz, H-6′), 7.40(1H, brs, H-2′), 6.89(1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.68(1H, s, H-3), 6.44(1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 6.19(1H, d,J=2.1 Hz, H-6)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)： 163.9(C-2), 102.9(C-3), 181.7(C-4), 161.5(C-5), 98.8(C-6), 164.2(C-7), 93.9(C-8), 157.3(C-9), 103.7(C-10), 121.5(C-1′), 113.3(C-2′), 145.7(C-3′), 149.7(C-4′), 116.0(C-5′), 119.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[22]報道基本一致，故鑒定化合物6為木犀草素。

化合物7：淡黃色油狀物(氯仿)。EI-MS(m/z)：278[M]+，分子式C16H22O4。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)：7.71(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-3, 6), 7.53(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-4, 5), 4.30(4H, t,J=6.4 Hz, H-8, 8′), 1.72(4H, m, H-9, 9′), 1.46(4H, m, H-10, 10′), 0.96(6H, t,J=7.2 Hz, H-11, 11′)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3): 131.0(C-1, 2), 128.8(C-3, 6), 132.2(C-4, 5), 167.7(C-7′, 7″), 65.6(C-8′, 8″), 30.6(C-9′, 9″), 19.1(C-10′, 10″), 13.7(C-5′, 5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻[23]報道基本一致，故鑒定化合物7為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物8：無色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 151～152 ℃。EI-MS(m/z)：138[M]+，分子式C7H6O3。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 10.13(1H, s, 7-CHO), 9.70(1H, brs, 3-OH), 9.57(1H, brs, 4-OH), 7.27(1H, dd,J= 8.0, 1.6 Hz, H-6), 7.23(1H, d,J=1.6 Hz, H-2), 6.91(1H, d,J= 8.0 Hz, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 128.8(C-1), 114.3(C-2), 146.0(C-3), 152.3(C-4), 115.5(C-5), 124.5(C-6), 191.0(—CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻[24]報道基本一致，故鑒定化合物8為原兒茶醛。

化合物9：無色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 199～200 ℃。EI-MS(m/z)：154[M]+，分子式C7H6O4。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.35(1H, s, 7-COOH), 9.70(1H, s, 3-OH), 9.32(1H, s, 4-OH), 7.34(1H, d,J= 1.9 Hz, H-2), 7.30(1H, dd,J=8.2, 1.9 Hz, H-6), 6.80(1H, d,J= 8.2 Hz, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 121.8 (C-1), 116.6(C-2), 145.0(C-3), 150.1(C-4), 115.2(C-5), 122.0(C-6), 167.4(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻[25]報道基本一致，故鑒定化合物9為原兒茶酸。

化合物10：黃色粉末狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 208～210 ℃。EI-MS(m/z)：180[M]+，分子式C9H8O4。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.09(1H, s, 8-COOH), 9.39(1H, s, 4-OH), 9.19(1H, s, 3-OH), 7.40(1H, d,J=16.2 Hz, H-7), 7.01(1H, brs, H-2), 6.96(1H, d,J=7.8 Hz, H-6), 6.75(1H, d,J=7.8 Hz, H-5), 6.16(1H, d,J=16.2 Hz, H-8)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)：128.0(C-1), 115.0(C-2), 146.7(C-3), 149.2(C-4), 116.7(C-5), 122.0(C-6), 146.1(C-7), 116.4(C-8), 171.8(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻[26]報道基本一致，故鑒定化合物10為咖啡酸。

化合物11：無色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 158～160 ℃。EI-MS(m/z)：138[M]+，分子式C7H6O3。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 13.78(1H, s, 6-COOH), 11.42(1H, s, 2-OH), 7.80(1H, dd,J=1.6, 7.8 Hz, H-6), 7.52(1H, m, H-4), 6.97(1H, d,J= 7.5 Hz, H-3), 6.90(1H, m, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 113.9(C-1), 163.2(C-2), 118.1(C-3), 136.6(C-4), 120.0(C-5), 131.5(C-6), 173.5(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻[27]報道基本一致，故鑒定化合物11為水楊酸。

4 結(jié)果與討論

本研究對滇桂艾納香乙酸乙酯部位進行了化學成分分離純化，鑒定了11個化合物，分別為：木栓酮(1)、木栓醇(2)、β-谷甾醇(3)、5-羥基-7,3′,4′-三甲氧基黃酮(4)、山奈酚(5)、木犀草素(6)、鄰苯二甲酸二丁酯(7)、原兒茶醛(8)、原兒茶酸(9)、咖啡酸(10)、水楊酸(11)。其中，化合物1、2、4、7首次從該植物中分離得到。

滇桂艾納香具有較好的止血、活血化瘀及縮宮活性。據(jù)文獻報道[28-30]滇桂艾納香藥材可顯著縮短小鼠凝血時間、出血時間和血漿復鈣時間，可增強子宮收縮，促進子宮內(nèi)膜螺旋動脈閉合，且可促進子宮內(nèi)膜修復，調(diào)節(jié)子宮局部活性物質(zhì)。其中，從滇桂艾納香藥材中分離得到的原兒茶酸可縮短凝血時間，并能增強子宮收縮頻率，其作用與劑量成正相關(guān)；咖啡酸也具有縮短凝血時間及出血時間的作用，能明顯增強子宮收縮。另外，原兒茶醛、原兒茶酸、咖啡酸、水楊酸等是許多傳統(tǒng)中藥及其復方制劑的有效成分，具有止血或活血或雙向平衡調(diào)節(jié)作用[31-32]。因此，可以推斷這些化合物可能是滇桂艾納香藥材止血、活血作用的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一，而原兒茶醛、原兒茶酸和咖啡酸等酚酸類成分一直被作為該藥材及其中藥復方的藥效指標成分進行質(zhì)量標準研究[33-36]。但是，分離出來的有些化合物是否具有該藥材作為婦科常用藥的相關(guān)活性以及如何發(fā)揮這些作用的機制，這是下一步要開展的工作，是研究的重點。當然，這些化合物大多都具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等活性，而且滇桂艾納香在某些藥理活性方面也顯示出較大的藥用潛力，其作用相關(guān)性亦需進一步探究。

本研究結(jié)果分離得到的化合物較少，未發(fā)現(xiàn)新化合物或新活性成分，但也在一定程度上豐富了滇桂艾納香的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對今后滇桂艾納香的合理開發(fā)與利用具有重要的指導意義。在后期工作中，將根據(jù)這些化合物的結(jié)構(gòu)特點進行相關(guān)藥理活性篩選及作用機制研究，力爭從該植物中發(fā)現(xiàn)更多具有藥效的化合物，以期闡明其作用與滇桂艾納香傳統(tǒng)功效的相關(guān)性。