焦?jié)櫨?/p>

摘要? ? 為了評(píng)估和監(jiān)管青海省油菜轉(zhuǎn)基因情況，2016年對(duì)省內(nèi)互助、門源、樂都等11個(gè)市縣的42批樣品進(jìn)行了檢測(cè)。通過定性PCR，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CruA內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因、CaMV 35S啟動(dòng)子、FMV 35S啟動(dòng)子、NOS終止子、HPT基因、NPT II基因、Bar基因和PAT基因均為陰性，未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因油菜籽。鑒于轉(zhuǎn)基因作物違法濫重的問題嚴(yán)重性，對(duì)青海省轉(zhuǎn)基因作物監(jiān)管工作提出了相應(yīng)建議。

關(guān)鍵詞? ? 油菜籽;轉(zhuǎn)基因;青海省;2016年

中圖分類號(hào)? ? S565.4? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? ? A

文章編號(hào)? ?1007-5739（2020）02-0011-02? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

油菜屬于十字花科蕓薹屬，是重要的油料作物和優(yōu)質(zhì)的蛋白飼料作物，也是轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用較多的農(nóng)作物[1]。從1996—2015年的20年間，全球轉(zhuǎn)基因作物累計(jì)種植面積達(dá)20億hm2，其中轉(zhuǎn)基因油菜累計(jì)種植面積達(dá)到1億hm2，僅次于大豆、玉米和棉花[2]。青海省地處青藏高原高海拔地區(qū)，太陽輻射強(qiáng)、氣候冷涼、日照時(shí)間長、空氣濕度小、晝夜溫差大，適宜喜溫涼作物油菜的生長。近年來，隨著全省農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整，隨著優(yōu)質(zhì)油菜的推廣，油菜種植面積有了較快的增長，常年種植面積20萬hm2，總產(chǎn)達(dá)28.2萬t[3]。

截至2017年3月，全球商業(yè)化的轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化事件有24個(gè)[4-6]，中國尚未批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因油菜的商業(yè)化種植。為了加強(qiáng)青海省農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管，防止農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因作物的非法擴(kuò)散，青海省農(nóng)牧廳于2016年4—10月對(duì)全省油菜籽進(jìn)行轉(zhuǎn)基因抽樣調(diào)查。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 供試材料

來自青海省11個(gè)市縣的42份油菜籽樣品，涉及12個(gè)品種（表1）。

1.2? ? 試驗(yàn)方法

所有樣品由農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因植物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（武漢）進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目如下。①蕓薹素（CruA）內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因。內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因（endogenous reference gene）是指具有植物物種專一性且拷貝數(shù)恒定、不顯示等位基因變化的保守 DNA序列，目前開發(fā)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因主要用于轉(zhuǎn)基因作物的定性和定量檢測(cè)[7]。蕓薹素（CruA）基因是國家比較認(rèn)同的油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因之一。檢驗(yàn)靈敏度0.10%，檢測(cè)依據(jù)為農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告-9-2013。②花椰菜花葉病毒（CaMV）的35S啟動(dòng)子、玄參花葉病毒（FMV）的35S啟動(dòng)子和胭脂堿合成酶基因（NOS）的終止子。三者均為國內(nèi)外商業(yè)化轉(zhuǎn)基因作物中普遍使用的調(diào)控元件，可以作為轉(zhuǎn)基因檢驗(yàn)的依據(jù)。檢驗(yàn)靈敏度0.10%，檢測(cè)依據(jù)為農(nóng)業(yè)部1782號(hào)公告-3-2012。③潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPT）基因。HPT基因編碼潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（hygromycin B phosphotransferase，HPT），是遺傳轉(zhuǎn)化中最常用的一類選擇標(biāo)記性基因。HPT可使潮霉素B（hygromycin B）磷酸化而失活，潮霉素是一種氨基糖苷類抗生素，可破壞細(xì)胞中核糖體的功能，導(dǎo)致基因翻譯受阻細(xì)胞死亡[8]。在選擇壓力下，不含標(biāo)記基因及其產(chǎn)物的非轉(zhuǎn)化細(xì)胞和組織死亡，轉(zhuǎn)化細(xì)胞由于有抗性可繼續(xù)成活、分裂并分化成植株[9]。檢驗(yàn)靈敏度0.10%，檢測(cè)依據(jù)為農(nóng)業(yè)部1782號(hào)公告-3-2012。④新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（NPT II）基因。在植物的遺傳轉(zhuǎn)化研究中，最常用的遺傳標(biāo)記基因?yàn)镹PT II 基因，該基因編碼的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶能使植物產(chǎn)生抗卡那霉素特性，因而用卡那霉素可以對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行篩選[10-11]。對(duì)于NPT II的檢測(cè)也是油菜籽轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的常用方法。檢驗(yàn)靈敏度0.10%，檢測(cè)依據(jù)為農(nóng)業(yè)部1782號(hào)公告-3-2012。⑤除草劑抗性基因（Bar或PAT）。Bar和PAT基因都是常用的選擇標(biāo)記基因之一。將其與其他目的基因（抗蟲、抗病基因等）構(gòu)建到同一載體上，篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)，只要在選擇培養(yǎng)基中加入一定量的除草劑，就能殺死非轉(zhuǎn)化細(xì)胞，生存下來的就是含有目的基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。檢驗(yàn)靈敏度0.10%，檢測(cè)依據(jù)為SN/T 1204-2003。

定性PCR的引物及擴(kuò)增程序等反應(yīng)條件參照農(nóng)業(yè)部相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[12-14]。

2? ? 結(jié)果與分析

此次抽樣調(diào)查，經(jīng)過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)全部42個(gè)油菜籽樣品中，8個(gè)基因的檢測(cè)全部為陰性，未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因油菜籽。

3? ? 結(jié)論與討論

農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的安全監(jiān)管是保障轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)健康、有序發(fā)展的重要舉措。中國政府高度重視轉(zhuǎn)基因生物的安全監(jiān)管，于2001年頒布《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》，并于隨后發(fā)布一系列配套管理辦法，對(duì)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的研究、生產(chǎn)、加工、經(jīng)營和進(jìn)出口活動(dòng)進(jìn)行全過程的嚴(yán)格監(jiān)管[15]。由于轉(zhuǎn)基因作物通常具有抗蟲、抗病、抗寒、抗旱等優(yōu)良性狀，部分農(nóng)民在不知情的情況下可能會(huì)誤種，2015年通過省部聯(lián)動(dòng)，在新疆、甘肅、海南銷毀了逾73.33 hm2違法轉(zhuǎn)基因玉米。

青海省此次抽查未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因油菜非法種植情況，但是依然需要提高警惕，防止轉(zhuǎn)基因作物違法濫種。在青海省轉(zhuǎn)基因監(jiān)管工作中，一是要進(jìn)一步加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因監(jiān)管工作，讓投機(jī)者無機(jī)可乘;二是規(guī)范轉(zhuǎn)基因科研活動(dòng)的監(jiān)管程序，防止轉(zhuǎn)基因作物非法流出;三是加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因工作的科普宣傳，在嚴(yán)管的同時(shí)讓百姓理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，避免監(jiān)管工作被錯(cuò)誤解讀。

4? ? 參考文獻(xiàn)

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