藍(lán)國(guó)兵，何自福，于琳，湯亞飛，李正剛，鄧銘光，佘小漫*

(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，廣東 廣州 510640； 2.廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640)

火龍果褐腐病又稱潰瘍病，是火龍果生產(chǎn)上具有毀滅性的真菌病害，病原菌為新暗色柱節(jié)孢菌(Neoscytalidiumdimidiatum)[1-2]。該病害是一種高溫高濕型病害，在廣東地區(qū)每年4—10月為害嚴(yán)重，主要為害幼嫩枝條和果實(shí)，而老熟枝條難以被侵染，輕則造成果皮“麻點(diǎn)”，降低商品價(jià)值，重則導(dǎo)致整條莖稈和果實(shí)腐爛死亡，所造成的平均產(chǎn)量損失一般在20%～30%，嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%以上，甚至毀園[3-5]。

植物病害的發(fā)生受多種因素綜合影響，如品種抗性、病原菌侵染數(shù)量及環(huán)境因素條件等，其中溫度是重要環(huán)境因素[6-8]。張榮等[4]研究表明，在高溫高濕的室內(nèi)人工接種環(huán)境下，火龍果嫩莖發(fā)病只需24 h。為進(jìn)一步明確溫度對(duì)火龍果褐腐病菌生長(zhǎng)及致病力的影響，本研究開(kāi)展不同溫度處理對(duì)病菌的菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)及致病力的研究，以期為火龍果褐腐病發(fā)生預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)及病害防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試火龍果為紅肉紅皮火龍果。

供試培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基(PDA)。去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉15 g，去離子水定容至1 L。

馬鈴薯葡萄糖液培養(yǎng)基(PDB)。去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，去離子水定容至1 L。

火龍果褐腐病菌株采自廣州市從化區(qū)(編號(hào)DF-CH8)，由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離、鑒定和保存。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同溫度處理對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的影響

將供試菌株于25 ℃ PDA平板上活化培養(yǎng)4 d，挑取直徑為0.5 cm的同一邊緣菌餅到PDA平板上，然后分別放置在0、5、10、15、20、25、30、35、40、45 ℃不同溫度處理的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h后，用“十”字交叉法分別測(cè)量菌落直徑；培養(yǎng)5 d后，用50 mL無(wú)菌水分別洗下孢子制成孢子懸浮液，采用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定產(chǎn)孢量，計(jì)算每毫升液體中所含的孢子數(shù)。每處理重復(fù)3次。比較不同溫度處理對(duì)火龍果褐腐病菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的影響。

1.2.2 不同溫度處理對(duì)孢子萌發(fā)的影響

將供試菌株培養(yǎng)至產(chǎn)孢后用PDB培養(yǎng)基洗下孢子，配置濃度1×105個(gè)孢子·mL-1的孢子懸浮液，然后吸80 μL孢子懸浮液到載玻片上，將其置于培養(yǎng)皿內(nèi)密封處理，然后放到0、5、10、15、20、25、30、35、40、45 ℃不同溫度處理的培養(yǎng)箱中，黑暗培養(yǎng)12 h后，觀察和統(tǒng)計(jì)不同溫度處理的孢子萌發(fā)率。

1.2.3 不同溫度處理對(duì)病菌致病力的影響

將供試菌株培養(yǎng)至產(chǎn)孢后用無(wú)菌水洗下孢子，制成濃度為1×106個(gè)·mL-1的孢子懸浮液，用手持噴霧器將等量的孢子懸浮液噴霧接種到幼嫩健康的火龍果莖稈(出芽30 d左右的嫩莖)上，接種后密封保濕處理，然后于15、20、25、30、35 ℃不同溫度處理的培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。以無(wú)菌水接種為空白對(duì)照，每處理3條火龍果嫩莖，重復(fù)3次。接種7 d后，觀察和記錄火龍果莖稈每個(gè)莖面的各級(jí)病莖面數(shù)。

病情調(diào)查分級(jí)方法：0級(jí)，無(wú)病斑；1級(jí)，病斑面積占整個(gè)莖面面積5%以下；3級(jí)，病斑面積占整個(gè)莖面面積6%～10%；5級(jí)，病斑面積占整個(gè)莖面面積11%～20%；7級(jí)，病斑面積占整個(gè)莖面面積21%～40%；9級(jí)，病斑面積占整個(gè)莖面面積41%以上，甚至腐爛。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度處理對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

表1顯示，PDA平板上黑暗培養(yǎng)24 h后，火龍果褐腐病菌在0 ℃和5 ℃不生長(zhǎng)；10～45 ℃病原菌均能生長(zhǎng)，產(chǎn)生菌絲。其中，30～35 ℃為菌絲生長(zhǎng)最適溫度。

表1 不同溫度處理對(duì)火龍果褐腐病菌菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢、萌發(fā)及致病力的影響

注：同列數(shù)據(jù)后無(wú)相同小寫字母表示組間差異顯著(P<0.05)。-表示無(wú)試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.2 不同溫度處理對(duì)病菌產(chǎn)孢量的影響

由表1可知，PDA平板上黑暗培養(yǎng)5 d后，火龍果褐腐病菌0和5 ℃未見(jiàn)生長(zhǎng)和產(chǎn)孢，10～45 ℃病菌均能產(chǎn)孢，25 ℃時(shí)病菌產(chǎn)孢量最大，平均產(chǎn)孢量為9.20×106個(gè)孢子·mL-1；30～45 ℃病菌產(chǎn)孢量隨溫度升高而降低，45 ℃高溫培養(yǎng)仍能產(chǎn)孢，平均產(chǎn)孢量為0.53×103個(gè)孢子·mL-1。

2.3 不同溫度處理對(duì)孢子萌發(fā)的影響

由表1可知，黑暗培養(yǎng)12 h后，0～10和45 ℃處理的病菌孢子未見(jiàn)萌發(fā)，15～20和40 ℃處理的孢子萌發(fā)率比較低，30～35 ℃溫度范圍的孢子萌發(fā)率最高。

2.4 不同溫度處理對(duì)病菌致病力的影響

由表1可知，接種處理的火龍果嫩莖于15～35 ℃黑暗培養(yǎng)7 d后調(diào)查結(jié)果顯示，15和20 ℃接種處理的火龍果嫩莖未見(jiàn)病斑，25和30 ℃接種處理的火龍果嫩莖病斑明顯，平均病情指數(shù)分別為30.86和36.63；35 ℃接種處理的火龍果嫩莖病斑較少，平均病情指數(shù)為17.70；其中30 ℃接種處理的病情指數(shù)顯著高于25和35 ℃接種處理的病情指數(shù)。

3 小結(jié)與討論

火龍果褐腐病在廣東、廣西和海南發(fā)生嚴(yán)重，溫度是影響病菌菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)、致病力的重要因素，國(guó)內(nèi)易潤(rùn)華等[3，9-10]報(bào)道了溫度對(duì)火龍果潰瘍病菌生物學(xué)特性的影響。本研究測(cè)定了不同溫度對(duì)火龍果褐腐病菌生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，火龍果褐腐病菌在0和5 ℃培養(yǎng)時(shí)不生長(zhǎng)，與易潤(rùn)華等[3]的研究結(jié)果一致，而在10～45 ℃病原菌均能生長(zhǎng)的結(jié)果則與其不一致；病菌菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度為30～35 ℃，這與戴俊等[10]研究結(jié)果一致；在10～45 ℃溫度范圍內(nèi)病菌均能產(chǎn)孢，且25 ℃時(shí)病菌產(chǎn)孢量最大，這與李敏等[9]報(bào)道的病菌菌絲在5～40 ℃下均能產(chǎn)孢，且30 ℃時(shí)產(chǎn)孢量最大的結(jié)果不一致。這些差異可能由不同地理來(lái)源的病原菌株間存在差異引起。

火龍果莖桿接種病菌后，低于20 ℃未見(jiàn)病斑，而25和30 ℃接種病斑明顯，35 ℃時(shí)病斑則較少，這與田間調(diào)查觀察到的病害發(fā)生規(guī)律基本一致(調(diào)查數(shù)據(jù)未發(fā)表)，病菌侵染火龍果的最低和最高極限溫度有待進(jìn)一步試驗(yàn)確定。