郭志有

摘? 要：本試驗主要探討在無抗日糧基礎(chǔ)上，添加外源性菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞生產(chǎn)性能、屠宰性能、消化性能的影響。試驗選用800只817小型肉雞，隨機(jī)分為4個處理，分別作為對照組、空白組、菌酶復(fù)合物組和復(fù)合植物精油組。試驗結(jié)果：無抗日糧中817小型肉雞生產(chǎn)性能、消化性能下降，在無抗日糧中添加菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油能夠減少肉雞死亡，降低料肉比，對817小型肉雞屠宰性能無顯著影響（P>0.05），且能夠降低817小型肉雞血清中的總膽固醇和低密度脂蛋白，但是并未達(dá)到顯著水平（P>0.05）;菌酶復(fù)合物處理能夠顯著增加817小型肉雞腸道內(nèi)的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性（P<0.05），顯著增加腸道內(nèi)有益菌數(shù)量（P<0.05）;復(fù)合植物精油處理對817小型肉雞腸道消化酶活性和有益菌數(shù)量有積極性作用，但效果不顯著（P>0.05）。結(jié)果表明，外源性菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油的添加能夠提高817小型肉雞的生產(chǎn)性能，提高腸道消化酶活性及改善腸道內(nèi)環(huán)境，是在減抗替抗產(chǎn)品中較理想的選擇。

關(guān)鍵詞：無抗日糧;817小型肉雞;菌酶復(fù)合物;復(fù)合植物精油

隨著人們對食品安全認(rèn)識的提高以及抗生素在使用過程中出現(xiàn)的藥物殘留與細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)等負(fù)面因素，國家在嚴(yán)格控制動物生產(chǎn)中抗生素的種類與用量[1]。2020年7月1日我國已禁止向飼料中添加促生長類藥物飼料添加劑。當(dāng)前探索毒副作用小的抗生素替代物來減少抗生素的使用，甚至在養(yǎng)殖過程中做到無抗生素使用已經(jīng)成為動物營養(yǎng)的熱點(diǎn)，尤其是在肉雞養(yǎng)殖領(lǐng)域。

菌酶復(fù)合物中有益菌能夠在腸道內(nèi)定殖并完成增殖，從而影響腸道內(nèi)環(huán)境，而其中的各種復(fù)合酶能夠在不同的腸道進(jìn)行釋放，作用于其他消化底物，提供動物對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)消化率[2]。丁酸作為一種短鏈脂肪酸，能夠降低消化道pH值，增加腸道內(nèi)蛋白酶活性，增加動物對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)利用率[3]。植物精油是從植物中提取的天然、揮發(fā)性和芳香性化合物的混合物，具有調(diào)節(jié)腸道菌群、提高動物免疫力和生產(chǎn)性能的作用[4]。

本試驗為研究菌酶復(fù)合物與復(fù)合植物精油在817小型肉雞生產(chǎn)中的使用效果，通過測定肉雞生長性能、腸道酶活性、腸道菌群等相關(guān)指標(biāo)，探討在玉米-豆粕型817小型肉雞無抗生素日糧基礎(chǔ)上添加抗生素替代品的應(yīng)用效果，為在動物生產(chǎn)中替抗與減抗提供科學(xué)理論依據(jù)與技術(shù)支持。

1? 材料與方法

1.1? 試驗材料與動物分組

1.1.1? 試驗材料? 抗生素選用亞甲基水楊酸桿菌肽：有效含量15%，添加量為每噸飼料添加200 g，購自成都思來生物科技有限公司。

菌酶復(fù)合物由青島根源生物科技有限公司提供，主要為丁酸梭菌（2.3×107 CFU/g）、乳酸桿菌（1.9×107 CFU/g）、雙歧桿菌（3.0×107 CFU/g）、枯草芽孢桿菌（1.6×108 CFU/g）、木聚糖酶（20000 U/g）、β-葡聚糖酶（15000 U/g）、β-甘露聚糖酶（4000 U/g）、纖維素酶（500 U/g）、果膠酶（2000 U/g）、蛋白酶（8000 U/g）和淀粉酶（3000 U/g），菌酶復(fù)合物在飼料中的添加量為250 mg/kg。

復(fù)合植物精油由丁酸鈉（由杭州康德權(quán)飼料有限公司提供）與百里香酚（含量4.0%）、香芹酚（含量8.0%）、肉桂醛（含量4.0%）、丁香酚（含量2.0%）混合組成，復(fù)合植物精油在飼料中的添加量為250 mg/kg。

1.1.2? 試驗動物分組? 試驗選用800只817小型肉雞，所用雛雞為同一孵化場同一批次雞苗，雞舍內(nèi)通風(fēng)、光照、溫度等管理程序一致。4個處理組，每個處理組200只817小型肉雞。其中第1組作為對照組，飼喂含有亞甲基水楊酸桿菌肽的肉雞飼料;第2組作為空白對照組，飼喂不含有任何藥物的肉雞飼料;第3組作為試驗組Ⅰ組，飼喂只添加菌酶復(fù)合物的肉雞飼料，劑量為250 mg/kg;第4組作為試驗組Ⅱ組，飼喂只添加復(fù)合植物精油的肉雞飼料，劑量為250 mg/kg。

1.2? 試驗日糧? 817小型肉雞日糧組成為玉米-豆粕型日糧，配方組成及營養(yǎng)水平見表1所示。

1.3? 飼養(yǎng)管理? 進(jìn)雛雞前，對雞舍內(nèi)的墻壁、地面以及飲食器具進(jìn)行清洗消毒，然后對雞舍和所有器具進(jìn)行熏蒸消毒。試驗雞采用籠養(yǎng)，自由采食，采用暖風(fēng)爐供暖。1～5 d房間溫度控制在30～33 ℃，之后舍內(nèi)溫度每天以0.5 ℃逐漸下調(diào)，直到最終溫度為21～23 ℃左右。飼養(yǎng)初期采用24 h光照，自第6天起，隨著飼養(yǎng)日齡增加，每日減少光照時間0.5 h，到每日光照時間22 h后維持恒定，直至出雞。每天對雞舍進(jìn)行清掃，定期清洗飲水管道，并及時通風(fēng)換氣，保證雞舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生良好。

1.4? 測定指標(biāo)和方法

1.4.1? 生產(chǎn)性能與經(jīng)濟(jì)效益指標(biāo)? 記錄整個試驗過程中每組雞的總飼料消耗量，同時記錄每天雞的死亡數(shù)量。42 d雞只出欄時，記錄出欄雞的數(shù)量與重量，計算試驗過程中料肉比及養(yǎng)殖期間死淘率。

料肉比（F/G）=平均日采食量/平均日增重×100%

死淘率=1-出欄雞數(shù)/進(jìn)雞總數(shù)×100%

1.4.2? 屠宰性能指標(biāo)? 第42天從各處理組中選取30只試驗雞先稱重，隨后進(jìn)行胴體性狀評定，方法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T823-2004進(jìn)行[3]，主要測定指標(biāo)有屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率。

1.4.3? 血清指標(biāo)? 第42天，試驗雞屠宰過程中，收集血液10 mL，然后靜置，待血液凝固之后用離心機(jī)離心10 min，分離血清，分裝于1.0 mL離心管，使用生化分析儀分析血清中的葡萄糖、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總蛋白和白蛋白。

1.4.4? 消化道淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性? 在屠宰試驗進(jìn)行的同時，分別從腺胃、肌胃、十二指腸、空腸中分離相關(guān)食糜裝入離心管中，冰箱冷凍，用于測定消化道酶活性。

消化酶樣本前處理：冰凍的腺胃、肌胃、十二指腸和空腸的食糜，在室溫下自然解凍，取少量食糜，加入雙蒸水，按食糜質(zhì)量（g）：水體積（mL）=1∶5，搖勻后置于4 ℃離心機(jī)3000 r/min離心5 min，取上清液測定蛋白酶活性。同時測定回腸內(nèi)食糜的脂肪酶和蛋白酶活性，使用BCA方法測定上清液蛋白含量。

采用試劑盒測定酶活，試劑盒購自南京建成生物有限公司（具體步驟參考南京建成蛋白酶試劑盒說明書）。

1.4.5? 腸道菌群變化? 在屠宰試驗進(jìn)行的同時，分別從空腸和盲腸中分離相關(guān)食糜，冰箱冷凍，用于測定腸道菌群。

腸道菌群樣品前處理：取出保存于-80 ℃冰箱的空腸和盲腸食糜樣品，在無菌工作臺上貼近腸壁取空腸、盲腸內(nèi)容物0.5 g，加入滅菌生理鹽水4.5 mL稀釋成為10-1懸濁液，漩渦震蕩3min，離心5 min，吸取0.5 mL上清液加入盛有4.5 mL滅菌生理鹽水試管中稀釋至10-2懸濁液，按照此方法再依次將空腸和盲腸內(nèi)容物稀釋至10-3、10-4、10-5、10-6、10-7用于涂板培養(yǎng)。

大腸桿菌計數(shù)：采用麥康凱培養(yǎng)基（MacConkey瓊脂）采用37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后通過平板計數(shù)法，菌落計數(shù)用lg（cfu/g）食糜表示。

乳酸桿菌計數(shù)：采用Rogasa瓊脂培養(yǎng)基37 ℃恒溫培養(yǎng)箱沖氮?dú)膺M(jìn)行厭氧培養(yǎng)24 h后通過平板計數(shù)法，菌落計數(shù)用lg（cfu/g）食糜表示。

1.5? 數(shù)據(jù)分析? 試驗數(shù)據(jù)先用Microsoft Excel作初步處理，然后用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行差異顯著性檢驗，以P<0.05表示差異達(dá)到顯著水平。

2? 試驗結(jié)果

2.1? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞生產(chǎn)性能的影響? 結(jié)果見表2所示。

表2結(jié)果顯示，使用菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油能夠減少817小型肉雞養(yǎng)殖飼養(yǎng)過程中的死亡數(shù)，增加了肉雞成活率，但效果要低于亞甲基水楊酸桿菌肽組;相比于空白組，使用菌酶復(fù)合物（試驗Ⅰ組）和復(fù)合植物精油（試驗Ⅱ組）均提高817小型肉雞的生產(chǎn)性能，增加雞只體重采食量，降低817小型肉雞的料肉比，兩個試驗組相比較，復(fù)合植物精油組添加效果要略微好于菌酶復(fù)合物組，但兩者之間差異不大（P>0.05）。

2.2? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞屠宰性能的影響? 結(jié)果見表3所示。

表3結(jié)果顯示：相比于對照組，空白處理組并未顯著影響817小型肉雞的屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和肌胃重（P>0.05）。相比于對照組與空白組，使用菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油的試驗組并未顯著影響817小型肉雞的屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和肌胃重（P>0.05）。試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組之間對817小型肉雞的屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、胸肌率、腿肌率和肌胃重?zé)o顯著影響（P>0.05）。表3還顯示，使用菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油的試驗組有降低817小型肉雞腹脂率的作用，但是兩者之間差異不顯著（P>0.05）。

2.3? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞血清指標(biāo)的影響? 結(jié)果見表4所示。

表4結(jié)果顯示：與對照組相比，空白處理組對817小型肉雞血清中的葡萄糖、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總蛋白和白蛋白無顯著影響（P>0.05）;使用菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油的試驗組對817小型肉雞血清中的葡萄糖、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總蛋白和白蛋白無顯著影響（P>0.05）;試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組兩者對817小型肉雞血清指標(biāo)無顯著影響（P>0.05）。相比于對照組和空白組，使用復(fù)合植物精油的試驗Ⅱ組表現(xiàn)出降低血清中的總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的能力，但是試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組兩者之間差異并不顯著（P>0.05）。

2.4? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞消化道酶活性的影響? 結(jié)果見表5所示。

表5結(jié)果顯示，空白組817小型肉雞不同腸道的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指腸蛋白酶活和空腸蛋白酶活比對照組低，回腸脂肪酶和回腸淀粉酶活性略高于對照組，但兩者之間差異不顯著（P>0.05）。菌酶復(fù)合物試驗組能顯著增加817小型肉雞的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指腸蛋白酶活、空腸蛋白酶活、回腸脂肪酶酶活和回腸淀粉酶酶活（P<0.05），復(fù)合植物精油雖能增加817小型肉雞的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指腸蛋白酶活、空腸蛋白酶活、回腸脂肪酶酶活和回腸淀粉酶酶活，但并未達(dá)到顯著水平（P>0.05）。

2.5? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞腸道菌群的影響? 結(jié)果見表6所示。

由表6可以看出，與對照組相比，空白組817小型肉雞空腸、盲腸和直腸大腸桿菌含量增加，但是兩者之間差異不顯著（P>0.05）;使用菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油的試驗組均能降低817小型肉雞空腸、盲腸和直腸內(nèi)大腸桿菌含量，但差異不顯著（P>0.05）;而試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組相比，在空腸、盲腸和直腸內(nèi)大腸桿菌含量方面差異不顯著（P>0.05）。與對照組相比，空白組817小型肉雞空腸、盲腸和直腸內(nèi)乳酸桿菌含量增加，但是兩者之間差異不顯著（P>0.05）;相比于空白組，菌酶復(fù)合物試驗組能夠顯著增加817小型肉雞空腸盲腸和直腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量（P<0.05）;復(fù)合植物精油雖能夠增加817小型肉雞空腸盲腸和直腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量，但差異并不顯著（P>0.05）;菌酶復(fù)合物處理組和復(fù)合植物精油處理組空腸、盲腸和直腸乳酸桿菌含量差異不顯著（P>0.05）。

3? 討論

3.1? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞生產(chǎn)性能和屠宰性能的影響? 付水光的研究[5]表明，復(fù)合酶制劑能夠增加肉雞的生長性能，表現(xiàn)為單日增重比對照組高4 g。李響研究[6]發(fā)現(xiàn)：益生菌（主要成分為枯草芽孢桿菌，有效含量為2.0×109 CFU/g）能夠提高肉雞的生長性能，酶制劑（主要成分是木聚糖酶和β-葡聚糖酶）能夠提高肉雞的生長性能。張杏莉的研究[7]結(jié)果表明，使用精油（1.7%的百里香酚與1.0%的香芹酚）能夠提高肉雞的生長性能與屠宰性能。張文靜研究[8]指出，百里香酚、丁香酚、香芹酚、檸檬烯、檸檬醛、肉桂醛形成的復(fù)合植物精油能夠增加肉雞的生產(chǎn)性能。以上研究結(jié)論與本文的研究結(jié)果相一致，但是本文的結(jié)果顯示，菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對于817小型肉雞生長并未完全達(dá)到抗生素的作用效果。在屠宰性能方面，孫錫風(fēng)等研究[9]結(jié)果表明，復(fù)合益生菌（主要成分為枯草芽孢桿菌和乳酸菌）對改善胸肌率和腿肌率有積極作用，這與本研究結(jié)果相一致，同時益生菌能夠顯著降低腹脂率，造成這種現(xiàn)象的原因可能與試驗動物差異性或兩種試驗飼料中粗脂肪的含量存在差異有關(guān)。

3.2? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞血清指標(biāo)的影響? 在817小型肉雞血清指標(biāo)方面，許運(yùn)岑的研究[10]表明，益生菌（主要成分是枯草芽孢桿菌）能夠降低血清中的總膽固醇，而本研究結(jié)果表明益生菌降低血清的總膽固醇，但是沒有達(dá)到顯著水平，分析原因可能與益生菌的菌株差異與使用劑量差異有關(guān)。復(fù)合菌酶與復(fù)合植物精油降低血清中的總膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，可能與復(fù)合菌酶與復(fù)合植物精油提高817小型肉雞整體健康情況有關(guān)，具體降低的機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

3.3? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞消化道酶活性的影響? 肉雞對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化是借助于腸道內(nèi)的消化酶完成的，因此外源性復(fù)合酶（淀粉酶、脂肪酶與蛋白酶）的添加能夠增加腸道內(nèi)淀粉酶、脂肪酶與蛋白酶的含量，從而增加消化性能[5，6]，這也與之前的研究結(jié)果相一致。而復(fù)合植物精油增加消化道內(nèi)酶的活性，可能與腸道內(nèi)環(huán)境的改善有關(guān)，因為丁酸鈉具有改善腸道微生物組成、緩解炎癥、提高免疫力以及促進(jìn)腸道屏障功能[6]，植物精油具有增強(qiáng)抗菌免疫作用、維持腸道完整性、改善抗氧化性能的作用[4]，腸道功能的改善會增加消化酶的生成量，進(jìn)而會增加消化道酶活，這與本文的研究結(jié)果相一致。另賈鳳等的研究[3]亦表明，薄膜丁酸鈉能夠增加肉鴨消化道內(nèi)消化酶活性。

3.4? 菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油對817小型肉雞消化道菌群的影響? 有研究指出外源性菌酶復(fù)合物的添加能夠減少肉雞腸道內(nèi)有害微生物如大腸桿菌的數(shù)量，增加肉雞腸道內(nèi)有益微生物（如乳酸桿菌、雙歧桿菌）[5]的數(shù)量，這與本文的研究結(jié)果相一致。丁酸鈉的添加可以提高腸道健康，進(jìn)而輔助提高817小型肉雞腸道中有益菌的數(shù)量[3，6];復(fù)合植物精油增加817小型肉雞腸道消化道菌群中有益菌的數(shù)量，可能與植物精油的緩解炎癥和機(jī)體提高免疫力有關(guān)[4，7]，另外也可能與復(fù)合植物精油改善肉雞腸道上皮屏障功能有關(guān)[11]，這些結(jié)論也與本文的研究結(jié)果相一致。具體微生物數(shù)量的變化還需要從微生物對腸道內(nèi)環(huán)境變化的適應(yīng)性以及微生物定殖等方面展開詳細(xì)研究。

4? 結(jié)論

外源性菌酶復(fù)合物和復(fù)合植物精油的添加能夠提高817小型肉雞的生產(chǎn)性能，提高腸道消化酶活性及改善腸道內(nèi)環(huán)境，是在減抗替抗產(chǎn)品中較理想的選擇。

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