呂建峰，王麗華

(沈陽市肛腸醫(yī)院，1.肛門病科，2.病理科，遼寧 沈陽 110002)

大腸癌發(fā)病率位居惡性腫瘤第三位，且近年來流行病學(xué)研究顯示，大腸癌發(fā)病率呈逐漸年輕化趨勢[1]。目前大腸癌的臨床治療主要以手術(shù)治療結(jié)合放化療的綜合治療方式為主，但病人遠(yuǎn)期生存率并不高，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是治療失敗的主要原因[2]。隨著對大腸癌病因以及發(fā)病機(jī)制的不斷深入研究，人們發(fā)現(xiàn)了眾多腫瘤標(biāo)志物對大腸癌早期診斷和預(yù)后具有著重要的意義[3]。趨化因子(C-X-C 基元)配體14[chemokine (C-X-C motif) ligand 14，CXCL14]是近年來發(fā)現(xiàn)的趨化因子家族成員之一，其在乳腺癌、前列腺癌等惡性腫瘤中的表達(dá)已有研究，但研究結(jié)果目前尚未一致，而在大腸癌表達(dá)中研究較為少見[4]。而表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)在多種惡性腫瘤中，較多研究發(fā)現(xiàn)，EGFR與配體結(jié)合與腫瘤細(xì)胞的增值、浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。學(xué)者發(fā)現(xiàn)，CXCL14與EGFR之間存在一定的通路聯(lián)系，但其具體機(jī)制尚未闡明[3]。本研究探討CXCL14、EGFR在大腸癌病人血清及組織中的表達(dá)及其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

一、臨床資料

選擇2016年3月至2018年3月我院收治且術(shù)后病理確診的大腸癌病人87例，術(shù)中均保留病人腫瘤組織以及癌旁組織；并隨機(jī)抽取同期來我院健康體檢的50例健康體檢者作為對照組。大腸癌組病人中男性46例、女性41例；年齡(60.3±7.3)歲，年齡范圍為34～79歲；其中結(jié)腸癌53例，直腸癌34例；所有病人術(shù)前均未接受相關(guān)抗腫瘤治療。對照組中男性28例，女性22例；年齡(59.5±9.7)歲，年齡范圍為30～75歲。兩組受試者性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，且受試者及家屬自愿簽署知情同意書。

二、方法

1.血清學(xué)指標(biāo)檢測 抽取兩組受試者清晨空腹血(大腸癌病人為術(shù)前血液)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測兩組受試者血清CXCL14、EGFR表達(dá)情況，檢測嚴(yán)格參照試劑盒使用說明書進(jìn)行。

2.免疫組織化學(xué)檢測 CXCL14兔抗人多克隆抗體購于美國Abcam公司；EGFR鼠抗人單克隆抗體購于美國Origene公司。將組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛緩沖液固定后常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片(4 μm)，采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測組織中CXCL14、EGFR表達(dá)情況。使用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照組，以試劑盒所附帶的陽性切片作為陽性對照。CXCL14以及EGFR均為黃色顆粒狀，其中CXCL14定位于胞質(zhì)，而EGFR定位于胞膜以及胞質(zhì)。在高倍鏡(×400)下隨機(jī)抽取10個視野，按照細(xì)胞著色強(qiáng)度以及著色細(xì)胞百分比進(jìn)行計分，細(xì)胞著色強(qiáng)度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；著色細(xì)胞百分比：陽性細(xì)胞<5%為0分，陽性細(xì)胞5%～25%為1分，陽性細(xì)胞26%～50%為2分，陽性細(xì)胞>50%為3分。計算上述兩項計分，≤3分為陰性，>3分為陽性。

3.研究方法 比較大腸癌病人與對照組受試者血清CXCL14、EGFR表達(dá)情況；并分析大腸癌組織、癌旁組織中CXCL14、EGFR表達(dá)與病人病理參數(shù)之間的關(guān)系，病人臨床病理參數(shù)包括性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期等。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、兩組受試者血清CXCL14、EGFR水平比較

大腸癌組病人血清CXCL14表達(dá)水平顯著低于對照組(P<0.05)，而大腸癌組病人血清EGFR表達(dá)水平顯著高于對照組(P<0.05)，見表1。

二、大腸癌組織及癌旁組織CXCL14、EGFR表達(dá)比較

大腸癌組織中CXCL14陽性率顯著低于癌旁組織(P<0.05)，而大腸癌組織中EGFR陽性率顯著高于癌旁組織(P<0.05)，見表2。

表1 兩組受試者血清CXCL14、EGFR水平比較

表2 大腸癌組織與癌旁組織CXCL14、EGFR表達(dá)比較 [例(%)]

三、大腸癌組織CXCL14、EGFR表達(dá)與病人臨床病理相關(guān)性

大腸癌組織中CXCL14、EGFR表達(dá)在病人Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，而在病人性別、年齡、分化程度、腫瘤部位方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，見表3。

表3 大腸癌組織CXCL14、EGFR表達(dá)與病人臨床 病理相關(guān)性(例)

討 論

腫瘤微環(huán)境的研究是目前腫瘤研究領(lǐng)域的熱點之一，腫瘤微環(huán)境細(xì)胞能分泌某些趨化因子，對腫瘤血管生成、腫瘤細(xì)胞的生長、宿主特異性免疫激活等間質(zhì)細(xì)胞間以及腫瘤細(xì)胞間基本的生物學(xué)過程進(jìn)行調(diào)節(jié)[6]。

CXCL14是一種新型的趨化因子成員，研究顯示[7-8]，CXCL14除淋巴組織外，在腎、大腦、小腸以及上皮細(xì)胞等均有表達(dá)。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時，CXCL14表達(dá)往往傾向于降低。研究報道[9-10]，CXCL14具有趨化自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、未成熟樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種功能，同時可以抗血管生成。除了在免疫學(xué)方面的相關(guān)作用外，CXCL14作為一種多功能趨化因子與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[11]。多項研究顯示[12-13]，CXCL14在肺癌、宮頸癌、胃癌、乳腺癌等腫瘤組織中表達(dá)均有所缺失。本研究分析CXCL14大腸癌病人血清及大腸癌組織中的表達(dá)變化情況，研究結(jié)果顯示，大腸癌病人血清中CXCL14水平較對照組受試者出現(xiàn)顯著降低(P<0.05)，同時大腸癌組織中CXCL14表達(dá)陽性率顯著低于癌旁正常組織(P<0.05)。相關(guān)研究報道結(jié)果與本研究相似[14]，表明在大腸癌病人血清及大腸癌組織中CXCL14表達(dá)受到明顯抑制。此外，分析大腸癌組織中CXCL14表達(dá)與病人臨床病理相關(guān)性，結(jié)果顯示，隨著病人Dukes分期升高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，大腸癌組織中CXCL14表達(dá)陽性率明顯降低。提示CXCL14可作為大腸癌病人疾病進(jìn)展及治療的潛在靶點。

EGFR是一種Ⅰ型受體酪氨酸激酶，由原癌基因表達(dá)，在細(xì)胞生長、分化以及凋亡中均具有重要作用，EGFR所介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)具有多向性，在多種惡性腫瘤中呈過表達(dá)狀態(tài)[15]。近年來有學(xué)者研究顯示，經(jīng)EGFR通路下游信號分子(PI3K、MEK、ERK)的抑制劑處理各類型非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株后，癌細(xì)胞中CXCL14表達(dá)水平出現(xiàn)相應(yīng)的變化，提示EGF/EGFR信號通路下游分子可能通過自身磷酸化調(diào)節(jié)CXCL14轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[16]。在本研究中，大腸癌病人血清EGFR水平顯著高于對照組受試者(P<0.05)，且大腸癌組織中EGFR表達(dá)陽性率顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)，與相關(guān)研究結(jié)果相似[17-18]，表明EGFR在大腸癌細(xì)胞的惡性增殖過程中發(fā)揮了重要作用。此外，隨著病人Dukes分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，大腸癌組織中EGFR表達(dá)陽性率明顯升高。提示EGFR參與促進(jìn)大腸癌發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移過程。

綜上所述，大腸癌病人血清及組織中CXCL14低表達(dá)而EGFR高表達(dá)，血清CXCL14、EGFR水平檢測有助于了解疾病進(jìn)展，值得臨床進(jìn)一步關(guān)注。