周 佳，楊明慧，周啟昕，徐 巖，劉玥欣，趙昕彤，李 鑫，許佳明，黃曉巍

（長春中醫(yī)藥大學(xué)·吉林長春·130117）

中藥是我國最早發(fā)現(xiàn)的藥物，也是中醫(yī)治病的核心手段，但在實際臨床治療中，醫(yī)者雖辨證論治準確，但所用之方不能達到預(yù)期的治療效果，進而產(chǎn)生“方靈藥不靈[1]”的結(jié)果。中藥藥性，又稱偏性，是中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對藥物基本性質(zhì)和功能的高度概括[2]，不同藥物的藥效通過藥物的性能得以體現(xiàn)[3]。同一種藥材，由于生長的地域差異受到溫度、濕度、降水、風(fēng)、地形、土壤、微生物發(fā)育等因素的影響，導(dǎo)致藥物稟受地址陰陽二氣存在差異，最終也會形成中藥藥性物質(zhì)基礎(chǔ)的差異，其在藥理藥效上也有不同程度的體現(xiàn)[4]。東漢藥物專著《神農(nóng)本草經(jīng)》[5]中記載：“土地所出，真?zhèn)涡玛?，并各有法”，唐代孫思邈編著的《千金翼方》中也特別強調(diào)“用藥必依土地”，表明中藥材的產(chǎn)地、生長環(huán)境可直接影響其療效。

白屈菜最早記載于明代早期朱橚所著的 《救荒本草》[6]，是罌粟科白屈菜屬植物白屈菜（Chelidonium majus L.）的干燥全草[7]，夏、秋二季采挖，全草入藥，歸肺、胃經(jīng)[8]，為中醫(yī)臨床常用藥物[9]。研究表明，白屈菜的主要活性成分為異喹啉類生物堿，主要包含白屈菜堿、血根堿、白屈菜紅堿、黃連堿、小檗堿等[10]。目前，白屈菜在吉林省范圍內(nèi)分布較廣泛，但存在不同產(chǎn)地、采收時間上的差異，導(dǎo)致白屈菜生物堿的含量及其療效存在差異。

本文通過分析吉林省不同產(chǎn)地及采收時間白屈菜中白屈菜紅堿的含量，來探討產(chǎn)地、采收時間因素對白屈菜藥材質(zhì)量的影響，指導(dǎo)臨床合理使用白屈菜。1材料

1.1 儀器

MS205DU十萬分之一天平 （梅特勒-托利多集團）；ME204萬分之一天平 （梅特勒-托利多集團）；HH-Ⅱ恒溫水浴鍋 （上海一恒科技有限公司）；KQ3200B型超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

分析乙腈 （上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?，批?113180301）；分析甲醇（山東禹王實業(yè)有限責(zé)任公司化工分公司，批號20171121）；三乙胺（西隴科學(xué)股份有限公司，批號1803161）；磷酸（北京化工廠，批號20170906）；鹽酸（北京化工廠，批號 A0300003）；白屈菜紅堿標準品 （上海源葉生物科技有限公司，貨號B20052）。

2 藥材

自2018年5月末至2018年10月末，分別對吉林省范圍內(nèi)平原、草原、半山、山區(qū)9個地點（長春、白城、伊通、吉林、九臺、雙陽、通化、扶余、靖宇）的白屈菜進行采收，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院許佳明老師鑒定，所有樣品均為白屈菜（Chelidonium majus L.）正品，詳見表1。

表1 白屈菜樣品來源Table 1 Sources of Chelidonium majus L Samples

3 實驗方法

3.1 測定指標

依據(jù)2015版《中華人民共和國藥典》[11]，以白屈菜紅堿為有效成分含量指標。

3.2 藥材處理

將白屈菜全草樣品置于陰涼通風(fēng)處，陰干后過三號篩（355μm），混合均勻。

3.3 對照品溶液制備

精密稱定白屈菜紅堿對照品0.506mg置于10mL量瓶中，分析甲醇定容，制備濃度為0.0506mg·mL-1對照品溶液。

3.4 樣品溶液制備

準確稱量2g白屈菜粉末于在圓底燒瓶，加入比例為0.5∶100的鹽酸-甲醇混合溶液，將40mL的鹽酸-甲醇混合溶液加熱回流1.5h，冷卻后，補足重量損失。搖勻并過濾，精確測量20mL濾液，蒸發(fā)至干，加入50%甲醇至殘余物中溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，過濾，取濾液。

3.5 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 柱 （250×4.6mm，5μm），流動相：乙腈-1%三乙胺溶液 （26∶74）磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0，柱溫 30℃，流速 1 mL·min-1，檢測波長 269 nm，進樣量為10μL，根據(jù)白屈菜紅堿的峰值，理論塔板數(shù)應(yīng)不小于2000。

3.6 線性考察

取 1、2、5、8、10μL 分別在“3.3”項下制備的白屈菜紅堿對照品溶液依照“3.5”項下色譜條件進樣。

4 實驗結(jié)果

4.1 線性考察實驗結(jié)果

將白屈菜紅堿對照品溶液的進樣量繪制為橫坐標（X軸），并將峰面積繪制在縱坐標（Y軸），得到回歸方程為：Y=96478X+60920，R2=0.9992。 白屈菜紅堿在峰面積上具有良好的線性關(guān)系，范圍為1~10μL（0.596~5.960μg），結(jié)果見圖 1。

4.2 吉林省不同產(chǎn)地和采收時間白屈菜紅堿含量

將 54個批次白屈菜樣品按照“3.4”、“3.5”項下的方法進行制備和測定，得到54個批次白屈菜樣品的白屈菜紅堿含量，結(jié)果如表2所示，峰形圖見圖2。不同產(chǎn)地、采收時間白屈菜樣品之間的白屈菜紅堿含量均有差異，其中C22（靖宇市7月末）白屈菜紅堿含量最高，達到 0.333mg/g（16.65%），C37（白城 9 月末）白屈菜紅堿含量最低，達到0.050mg/g（2.5%）。在54個樣品中，其中有28個樣品的白屈菜紅堿含量小于0.2mg/g，均不符合2015年版《中華人民共和國藥典》標準，主要包括5月末、9月末、10月末采集的大多數(shù)地區(qū)白屈菜樣品及白城地區(qū)5～10月末的白屈菜樣品，剩余26個樣品的白屈菜紅堿含量都符合2015年版《中華人民共和國藥典》標準，7月份白屈菜紅堿含量普遍較高。

圖1 白屈菜紅堿對照品溶液線性關(guān)系圖Fig.1 Linear relationship of chelidoninereferencesolution

表2 吉林省不同產(chǎn)地和采收時間白屈菜紅堿含量Table 2 Content of Chelerythrine in Different Origins and Harvesting Time in Jilin Province

圖2 吉林省不同產(chǎn)地、不同采收時間白屈菜紅堿含量HPLC圖Fig.2 Content of Chelerythrine in Different Origins and Harvesting Time in Jilin Province HPLC

5 討論

2015年版《中國藥典》將白屈菜紅堿作為白屈菜藥材的質(zhì)量評價標準，故本研究選用白屈菜紅堿作為藥材質(zhì)量評價指標，以評價吉林省白屈菜藥材質(zhì)量為研究目的，從產(chǎn)地和采收時間兩個方面對白屈菜藥材的質(zhì)量進行綜合分析，結(jié)果得出：54個白屈菜樣品中，有28個樣品的白屈菜紅堿含量低于0.02%，不符合2015年版《中國藥典》標準，說明產(chǎn)地和采收時間對白屈菜的質(zhì)量有較大影響。

白屈菜多生長于陽光明媚、溫暖濕潤的地區(qū)，具有耐寒、耐熱和抗旱的特性，一般生長在濕潤地、水溝邊，松林下和住宅旁。通過本實驗結(jié)果可知：吉林省范圍內(nèi)，靖宇、扶余、通化地區(qū)的白屈菜紅堿含量較高，伊通、九臺、長春、吉林、雙陽地區(qū)的白屈菜紅堿含量較低，白城地區(qū)含量最低。這可能是由于靖宇、扶余、通化地區(qū)位于吉林省東南部，2/3以上的面積為山區(qū)，屬長白山系，中溫帶濕潤氣候區(qū)，山上土質(zhì)肥沃疏松，最宜白屈菜生長，故所產(chǎn)白屈菜中白屈菜紅堿的含量都較高。伊通、九臺、長春、吉林、雙陽地區(qū)地處吉林省中部，是東南部山區(qū)與西北部平原的過渡地帶，多為平原和丘陵，溫帶大陸性半濕潤季風(fēng)氣候區(qū)，由于東南部長白山地的阻擋和西北部西伯利亞極地大陸氣團暢通無阻，中部地區(qū)的冬季嚴寒漫長，夏季溫暖短促，導(dǎo)致溫、濕度都不如吉林省的東南部地區(qū)，故所產(chǎn)白屈菜中白屈菜紅堿的含量較低。白城地區(qū)位于吉林省西北部，地處大興安嶺山脈東麓平原區(qū)，溫帶大陸性季風(fēng)氣候區(qū)，土地的鹽堿度較高[12]，不利于白屈菜生長，故所產(chǎn)白屈菜中白屈菜紅堿的含量都較低。

選擇適當?shù)牟墒諘r間是決定藥材質(zhì)量和產(chǎn)量的重要因素之一，直接影響到中藥材的生長發(fā)育階段，進而決定有效成分的積累量。2015年版《中國藥典》中提及白屈菜的采收期為“夏秋兩季”過于寬泛，無法準確確定有效成分累積量最大的時間點。本實驗結(jié)果得出：白屈菜中白屈菜紅堿含量較高的采收時間是每年的6～8月份，其中7月含量最高，說明吉林省范圍內(nèi)的白屈菜在7月份時有效成分的累積達到高峰，此時白屈菜果實已逐漸成熟，養(yǎng)分消耗減少，次生代謝產(chǎn)物的累積增加，莖葉最為茂盛，達到生物產(chǎn)量最大值，因此7月份是最適宜的白屈菜采收時間。5月的白屈菜處于次生代謝產(chǎn)物積累初期，尚未開花結(jié)果，生物產(chǎn)量小。9、10月份天氣開始轉(zhuǎn)涼，白城、通化等地區(qū)的白屈菜開始枯萎，白屈菜藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量均有所下降。

實驗結(jié)果表明，生長地區(qū)和采收時間會影響白屈菜中白屈菜紅堿的含量變化，通過檢測白屈菜紅堿的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)靖宇地區(qū)的白屈菜采收時間在7月份，即果實逐漸成熟，莖葉最為茂盛時，其白屈菜紅堿的含量最高，為今后白屈菜藥材在臨床中的選擇應(yīng)用提供有力依據(jù)。