李泊巖，高 喬，姜志強

（大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧省北方魚類應(yīng)用生物學(xué)與增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧 大連 116023)

俄羅斯鱘（Acipenser gueldenstaedtii）又稱俄國鱘，屬硬骨魚綱鱘形目鱘科鱘屬。其食用價值高，可食部分占總體重60%左右，魚肉和魚子醬制品暢銷；干制鰾可用來生產(chǎn)強力膠，精巢可治療燒傷。俄羅斯鱘體重增長快、環(huán)境適應(yīng)性強，已成為我國當(dāng)前鱘類養(yǎng)殖的主要品種之一。麻醉劑的合理使用可以降低魚體在人工操作時的應(yīng)激反應(yīng)，使操作順利進行。此外，在水體中添加適量的麻醉劑能減弱運輸過程中魚體的新陳代謝速度，降低活魚運輸過程中魚體興奮并減少魚體游動時造成的體表損傷，提高運輸存活率。

丁香油應(yīng)用于魚類的常用麻醉劑主要有效成分為丁香酚，學(xué)名：2-甲氧-4-烯丙基苯油，屬植物香料。丁香酚及其衍生物能夠快速地從血液和組織中排出，不會誘發(fā)機體產(chǎn)生突變物質(zhì)。研究表明，丁香酚有抑制真菌、抗氧化和抗腫瘤的作用，醫(yī)學(xué)上已將其作為牙科鎮(zhèn)痛劑被廣泛應(yīng)用。很多國家已將丁香油作為合法的水產(chǎn)動物麻醉劑，魚類麻醉常采取藥液浸泡的方式進行。在親魚采卵和活魚運輸中，國內(nèi)學(xué)者對丁香酚麻醉暗紋東方魨幼魚、斑點叉尾鮰、大瀧六線幼魚、鯔魚、刀鱭幼魚、大西洋鮭、美洲鰣幼魚等已開展了大量研究。

作為魚體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，血液是由血漿和血細(xì)胞組成的流體組織，具有運輸、防御和免疫、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和參與體液調(diào)節(jié)等多種功能。血液生化指標(biāo)能反映出魚類的生理狀態(tài)并評價其健康狀況，麻醉藥物進入魚體后主要通過肝臟代謝，而魚體內(nèi)代謝產(chǎn)物的排泄主要通過腎臟完成，因此麻醉過程會對魚體的肝腎功能造成影響。本研究通過對丁香油麻醉俄羅斯鱘過程中和麻醉復(fù)蘇后相關(guān)血液生化指標(biāo)的測定，分析其變化過程，綜合評估丁香油對俄羅斯鱘的應(yīng)激反應(yīng)及對肝腎等器官功能的影響，為生產(chǎn)應(yīng)用提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

俄羅斯鱘幼魚：購自遼寧省大連市某養(yǎng)殖場。

試驗器材：溶菌酶檢測試劑盒，由南京建成生物科技公司生產(chǎn)；48 L水槽、1 mL無菌注射器、冰盤、分析天平、冷凍離心機、2 mL離心管、各規(guī)格微量移液槍、0.5 cm及1 cm比色皿和722分光光度計等。

1.2 試驗設(shè)計

試驗設(shè)3組處理。（1）空白對照組：水中檢測無麻醉劑；（2）A組：低濃度丁香油組，丁香油溶液濃度為80 mg·L-1；（3）B組：高濃度丁香油組，丁香油溶液濃度為120 mg·L-1。每組各10尾，體長（26.83±5.42）cm，體重（70.91±8.93）g。

1.3 試驗方法

1.3.1 丁香油溶液的配制 稱取25 g丁香油在燒杯中用無水乙醇定容至250 mL，配制成0.1 g·mL-1的丁香油麻醉劑母液，配置足量的母液在4 ℃冰箱內(nèi)保存以備多次使用。試驗前用移液管準(zhǔn)確移取一定量的母液配成所需濃度的丁香油溶液，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝蠓胖?0 min左右。

1.3.2 麻醉處理 選擇健康無病、符合試驗規(guī)格的俄羅斯鱘幼魚30尾，于150 L水槽中暫養(yǎng)，試驗用水為經(jīng)24 h以上曝氣的自來水，水溫13 ℃，pH值7.6～7.8，D0＞8 mg·L-1，正常攝食后試驗前停食1 d。將隨機選取的30尾試驗魚分別放入不同丁香油濃度的3組40 L塑料箱中，每組放入試驗魚10尾，試驗前采血檢測空白組俄羅斯鱘幼魚。待A組和B組魚體對外部刺激失去反應(yīng)能力、鰓蓋張合微弱且沉底不動后即深度麻醉，開始計時，10 min后每組隨機取5尾魚進行采血即麻醉中血液樣本，另將各組尚未采血的5尾魚分別放入清水中復(fù)蘇，24 h后采血即為麻醉后血液樣本。

1.3.3 血液采集 將試驗魚撈出，用無菌紗布裹住頭部，采用1 mL注射器從尾部靜脈采血，轉(zhuǎn)移至2 mL離心管，室溫靜置10 min， 12 000 r·min-1離心5 min，取上層澄清液，分裝成3份樣品，-20 ℃溫度條件下保存，待測。

1.3.4 血液及血清生化指標(biāo)測定 血清提取后置于-20 ℃冰箱內(nèi)，次日送至大連市體檢中心檢測血清生化指標(biāo)。測定的指標(biāo)包括血糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST）、總蛋白（TP）、堿性磷酸酶(AKP)、總膽紅素（T-BIL）、尿素氮（BUN）、溶菌酶（LZM）。其中，由于俄羅斯鱘血清顯色，血清溶菌酶（LZM）活性的測定采用自身對照法，即在一定濃度的混濁菌懸液中，溶菌酶水解細(xì)菌細(xì)胞壁中的黏多肽，液體透光度逐漸增強，由此根據(jù)濁度變化推測溶菌酶含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS statistics 19.0處理，在單因素方差分析（One-way ANOVA）的基礎(chǔ)上采用Duncan多重比較進行方差分析，數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD，n=5）。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香油麻醉前后俄羅斯鱘幼魚的血液生化指標(biāo)（表1）

2.2 丁香油對俄羅斯鱘血糖（GLU）含量的影響

圖1所示，A和B組樣品中的GLU均高于對照組。A組麻醉中和麻醉后高于對照組血糖含量，差異顯著，且麻醉后略高于麻醉中；B組麻醉中血糖含量稍高于對照組，差異不顯著，B組麻醉后樣品血糖含量高于麻醉中和對照組，差異顯著。泌，魚鰓上皮滲透性的增加調(diào)節(jié)尿量的增減。而A組麻醉中血清BUN含量的增加可能是由于在該丁香油濃度下，麻醉初期魚體因亢奮應(yīng)激排尿量增加，而深麻后這些代謝產(chǎn)物又因進入麻醉狀態(tài)，不能有效排泄出體外而導(dǎo)致尿素氮含量增加。其余試驗組中BUN含量均顯著低于對照組。說明在丁香油作用下鰓運動的頻率降低，鰓與外界水的交換減少，導(dǎo)致缺氧引起血液酸化。復(fù)蘇24 h后，血清尿素氮含量仍低于對照組，說明此濃度的麻醉藥對魚的腎功能仍有一定的影響。

表1 丁香油麻醉前后俄羅斯鱘幼魚的血清生化指標(biāo)

3.2 試驗表明，丁香油麻醉中和麻醉后均高于對照組血清中的GLU含量，說明丁香油影響了魚體的正常糖代謝。丁香油低濃度組血糖含量顯著高于對照組，而丁香油高濃度組與對照組差異不顯著?？赡茉谶@種濃度下，麻醉劑對魚的刺激性更強，應(yīng)激反應(yīng)使魚消耗大量能量來維持特定水平的血糖。麻醉后高濃度組魚的GlU水平顯著高于對照組，說明麻醉在血清中的富集對魚肝功能的糖原轉(zhuǎn)化有一定影響。試驗表明，丁香油麻醉中組對TC影響不顯著；麻醉后血清中TC含量顯著高于麻醉中和對照組。丁香油麻醉中血清TG含量均低于對照組，差異不顯著；A組麻醉后血清中TG含量能回到正常水平。

肝功能代謝的強弱可以反應(yīng)血清中總蛋白（TP）的含量高低。測定結(jié)果顯示，丁香油組麻醉中和麻醉后TP含量顯著高于對照組。測定顯示A組和B組血清的T-BIL含量與對照組差異不顯著，麻醉中的總膽紅素略高于對照組，說明丁香油可能會加快細(xì)胞衰老。上述血液生化指標(biāo)的變化表明在丁香油麻醉過程中肝功能受到一定影響。

3.3 魚體血清中的AST和ALT主要存在于細(xì)胞中且活性很低，在一些組織疾病中，細(xì)胞通透性增加導(dǎo)致ALT和AST釋放到血液中，血清中ALT和AST活力升高。試驗顯示，血清中ALT含量在丁香油麻醉中與對照組差異不顯著，但麻醉后顯著高于對照組，而AST含量丁香油低濃度組與對照組差異不顯著，高濃度組與對照組差異顯著。丁香油麻醉低濃度組對魚體血清AKP無顯著影響，而對高濃度組影響顯著，復(fù)蘇24 h后AKP水平仍顯著低于對照組，該濃度麻醉劑對魚體影響顯著。丁香油A組麻醉俄羅斯鱘幼魚時，麻醉中血清LZM活性高于對照組，麻醉后回歸正常水平。而B組麻醉俄羅斯鱘幼魚時，麻醉中血清LZM活性低于對照組，差異不顯著。

3.4 低濃度的丁香油麻醉對俄羅斯鱘幼魚的免疫力具有一定的刺激作用，而高濃度的丁香油引起的毒性可能超過俄羅斯鱘幼魚的生理調(diào)節(jié)范圍，導(dǎo)致免疫水平低于對照組，損害魚類的免疫力。因此，實際應(yīng)用中，應(yīng)選擇一定劑量的丁香油濃度，以達到俄羅斯鱘幼魚刺激效應(yīng)的高峰，提高免疫力。