陳方 張惠 劉培勇 黃永勇

摘 要：本文建立了一種快速測(cè)定的方法。通過(guò)對(duì)樣品前處理方法進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，并考察不同溶劑的提取效果。結(jié)果表明，醬油中3種對(duì)羥基苯甲酸酯的回收率為80.0%～98.7%，方法的平行性結(jié)果相對(duì)偏差小于10%，方法檢出限低于0.001 g·kg-1，將該快速方法運(yùn)用到實(shí)際醬油樣品的檢測(cè)工作中去，其測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，是檢測(cè)醬油中對(duì)羥基苯甲酸酯類的一種有效方法。

關(guān)鍵詞：對(duì)羥基苯甲酸酯;醬油;方法

Abstract：A rapid determination method was established in this paper. The sample preparation method was optimized and improved， and the extraction effects of different solvents were investigated. The results show that this method is used to test the soy sauce in three p-hydroxy benzoic acid ester， its recovery rate can reach 80. 0%～98.7%; Methods of parallelism results relative deviation is less than 10%， method detection limit is lower than 0.001 g·kg-1; The rapid method is applied to actual soy sauce sample testing work， the determination results are accurate and reliable， it is the detection of p-hydroxy benzoic acid esters in soy sauce， a kind of effective method.

Key words：P-hydroxy benzoic acid ester; Soy sauce;Methods

中圖分類號(hào)：TS264.2

對(duì)羥基苯甲酸酯類是一種防腐劑，常見(jiàn)的有對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯3種。對(duì)羥基苯甲酸酯類與目前常用的化學(xué)防腐劑相比，具有用量少、成本低、安全性好、抑菌范圍廣、在較寬的pH值（4～8）內(nèi)有效等優(yōu)點(diǎn)，還可與多種酯混合、與相應(yīng)對(duì)羥基苯甲酸酯類鈉鹽復(fù)配，不僅可以提高溶解度，還具有較好的防腐能力[1-5]。目前，我國(guó)食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014中[6]規(guī)定醬油中對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯及其鈉鹽（以對(duì)羥基苯甲酸計(jì)）≤0.25 g·kg-1。國(guó)內(nèi)對(duì)羥基苯甲酸酯類的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法有氣相色譜法、液相色譜法、液相串聯(lián)質(zhì)譜法。

GB 5009.31-2016國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法是氣相色譜法，其方法前處理復(fù)雜，醬油樣品基質(zhì)干擾大，因此建立一種快速、準(zhǔn)確的氣質(zhì)法對(duì)食品安全來(lái)說(shuō)具有重要的意義。本文采用氣質(zhì)法測(cè)定醬油中3種對(duì)羥基苯甲酸酯類的含量，優(yōu)化了醬油樣品前處理和分離條件，考察了不同溶劑的提取效率，提高了檢測(cè)方法的靈敏度。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料。市售醬油;氯化鈉、鹽酸，為分析純;石油醚、乙酸乙酯、乙腈、甲醇，為優(yōu)級(jí)純;C18粉;PAS粉;中性氧化鋁粉;GBC粉;實(shí)驗(yàn)用水為超純水;對(duì)羥基苯甲酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)羥基苯甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)羥基苯甲酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99.0%。儀器。島津GCMS-QP2010s氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;DB-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm0.25 μm）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

（1）儲(chǔ)備液配制。分別準(zhǔn)確稱取適量的各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙酸乙酯配制成質(zhì)量濃度為10 mg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

（2）工作液配制。準(zhǔn)確移取一定體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)儀器響應(yīng)用乙酸乙酯稀釋成系列質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

稱取3.0 g（精確至0.01 g）樣品于50 mL離心管中，加3.0 mL水，用鹽酸-水溶液（1+1）調(diào)pH約為3.0，渦旋混合1 min，加入2 g氯化鈉和10 mL乙酸乙酯渦旋提取1 min，超聲提取10 min，4 000 r·min-1離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，再加10 mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次，離心后，將上清液轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中，定容至刻度。定容后的溶液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水后，取5 mL加150 mg C18粉和7.5 mg GBC凈化，過(guò)0.2 μm的有機(jī)濾膜后上機(jī)測(cè)定。

1.2.3 色譜條件

（1）氣相條件。進(jìn)樣口溫度250 ℃;柱溫150 ℃;保持3 min后以5 ℃·min-1升溫至190 ℃，保持2 min，再以15 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持5 min，外標(biāo)法定量。

（2）質(zhì)譜條件。質(zhì)譜接口溫度250 ℃;離子源：EI源，離子源溫度200 ℃，采用選擇離子監(jiān)測(cè)SIM方式，監(jiān)測(cè)離子m/z 65，93，121，138，152，166。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的選擇

本實(shí)驗(yàn)選擇石英毛細(xì)管柱DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）作為分析色譜柱，其分離效果見(jiàn)圖1。

2.2 提取溶劑優(yōu)化

由圖2知，分別選擇石油醚、乙腈、甲醇、乙酸乙酯作為提取溶劑，提取回收率表明石油醚回收率較低，乙腈、甲醇、乙酸乙酯對(duì)3種對(duì)羥基苯甲酸酯的提取效果差異不大，但在前處理過(guò)程中甲醇不易與水分層，而乙腈毒性較大，綜合考慮最終選擇乙酸乙酯作提取溶劑較為理想。

圖2 4種不同溶劑提取對(duì)羥基苯甲酸酯的回收率圖

2.3 樣品凈化改進(jìn)

用乙酸乙酯提取醬油中的對(duì)羥基苯甲酸酯類時(shí)，色素、脂類物質(zhì)干擾較大，因此取部分提取液用C18粉、PAS粉、中性氧化鋁粉、GBC粉分散固相萃取凈化，PAS粉、中性氧化鋁粉對(duì)目標(biāo)物有較大的吸附作用，加標(biāo)回收率較低，結(jié)果表明取5 mL提取液加150 mg C18粉和7.5 mg GBC凈化效果最好，加標(biāo)回收率較高，效果比較圖見(jiàn)圖3，圖中上面圖譜為未凈化處理、下面圖譜為凈化處理的色譜圖，

2.4 方法驗(yàn)證

2.4.1 線性范圍、檢測(cè)限和定量限

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別吸取濃度為10.19、10.64、10.09 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)中間液10、20、40 μ L和100 μ L用乙酸乙酯定容至1 mL，則混合標(biāo)準(zhǔn)工作液各物質(zhì)濃度依次為對(duì)羥基苯甲酸甲酯0.101 9、0.203 8、0.407 6 μg·mL-1和1.019 0 μg·mL-1;對(duì)羥基苯甲酸乙酯0.106 4、0.212 8、0.425 6 μg·mL-1和1.064 μg·mL-1;對(duì)羥基苯甲酸丙酯0.100 9、0.201 8、0.403 6 μg·mL-1和1.009 0 μg·mL-1。濃度在0.1～1.0 μg·mL-1內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)均>0.999。

（2）檢測(cè)限。根據(jù)儀器響應(yīng)，配制3倍信噪音比相當(dāng)?shù)妮^低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為檢測(cè)限濃度，按稱樣量3.0 g，定容體積25.0 mL計(jì)算，本次試驗(yàn)對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯的檢測(cè)限分別為0.480、0.425、0.425 mg·kg-1。該檢測(cè)限優(yōu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB 5009.31-2016的檢測(cè)限0.6 mg·kg-1。儀器對(duì)較低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)色譜圖見(jiàn)圖4。

2.4.2 準(zhǔn)確度和精密度

以陰性樣品中水平加標(biāo)回收平行測(cè)定來(lái)考察精密度，以低、中、高3個(gè)水平加標(biāo)回收率來(lái)考察準(zhǔn)確度，其加標(biāo)回收率在80.0%～98.7%，平行實(shí)驗(yàn)的相對(duì)偏差小于10%，其數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

2.4.3 實(shí)際樣品分析

對(duì)市售一品鮮、海天、加加和金冠園4個(gè)品牌的醬油進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出3種對(duì)羥基苯甲酸酯類物質(zhì)。

3 結(jié)論

本文建立了一種對(duì)醬油中3種對(duì)羥基苯甲酸酯檢測(cè)的方法，檢測(cè)效率高，成本低。通過(guò)方法學(xué)考察，加標(biāo)回收率達(dá)到80.0%～98.7%，平行實(shí)驗(yàn)的相對(duì)偏差均小于10%，檢測(cè)限優(yōu)于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法GB 5009.31-2016的檢測(cè)限0.6 mg·kg-1。該方法檢測(cè)醬油樣品準(zhǔn)確高效，為監(jiān)管提供了一種有效的技術(shù)支撐，具有較高的現(xiàn)實(shí)意義。

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