張 菡，劉太國，陳萬權(quán)，趙思峰，高 利*

1.石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院，新疆 石河子 832000

2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病蟲害生物學(xué)國家重點(diǎn)實驗室，北京 100193

小麥普通黑穗病(Common bunt of wheat)是一種危害性強(qiáng)的真菌病害，它在世界各地均有分布且容易流行。當(dāng)條件適宜時，該病害可以侵染70%～80%以上的麥穗，引起地塊產(chǎn)量下降50%以上，甚至絕收。小麥光腥黑粉菌(Tilletia foetidaLindr)可引起該病害[1]，被列為我國國內(nèi)限定的非檢疫性有害生物，種用小麥不得攜帶[2]。在小麥染病后期，會有穎殼外張，整個麥穗呈暗綠色，病粒外有一層灰色或者白色薄膜且內(nèi)部充滿黑粉的病癥[3]。

小麥種子帶菌是該病害發(fā)生的主要初侵染來源之一[4]。因此，種衣劑處理是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最有效、最快捷、最方便的病害防治方法。先正達(dá)公司在2016 年生產(chǎn)的新型小麥三元復(fù)配殺菌劑氟環(huán)·咯·甲苯（PD20161619），劑型為種子處理懸浮劑，農(nóng)藥名為健壯。其中有效成分含量包括氟唑環(huán)菌胺4.6%、咯菌腈2.2%、苯醚甲環(huán)唑2.2%，這種農(nóng)藥具有內(nèi)吸性及安全性高的特點(diǎn)。它的安全性不僅遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于三唑類農(nóng)藥[5]，還兼具預(yù)防和治療活性。特別是針對作為種傳及土傳病害的小麥光腥黑穗病，其農(nóng)藥中的咯菌腈成分可以保證持久防效[6]。該農(nóng)藥目前在新疆小麥生產(chǎn)區(qū)用于防治春小麥上的光腥黑穗病，且防治效果好。

國內(nèi)外對小麥光腥黑穗病的研究主要集中在病原菌檢測[7]，尚未報道過如何正確防治該病害。本試驗想通過結(jié)合目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最有效最快速的農(nóng)藥拌種方法防治該病害。檢測農(nóng)藥氟環(huán)·咯·甲苯對小麥光腥黑穗病的防治效果以及不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種對小麥種子萌發(fā)率，從而得出該農(nóng)藥最優(yōu)的使用劑量。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 供試植物 小麥光腥黑穗病易感品種“摩咯哥小麥（春）”，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所麥類真菌病害研究組所提供。

1.1.2 供試農(nóng)藥 氟環(huán)·咯·甲苯（先正達(dá)公司生產(chǎn)，農(nóng)藥名為健壯）。

1.1.3 供試真菌 小麥光腥黑粉菌（T.foetidaLindr）由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所麥類真菌病害組提供。

1.1.4 供試土樣 供試普通土壤采自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所溫室，之后進(jìn)行滅菌處理與營養(yǎng)土以2:1 的比例進(jìn)行混合后使用。

1.2 實驗方法

1.2.1 小麥種子拌種處理 取不同劑量氟環(huán)·咯·甲苯（推薦劑量的1.5%、3%、5%及1.5 倍和推薦劑量）制成種衣劑用于小麥種子表皮。（說明書上推薦劑量為100～200 mL/100 kg。）

表1 不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種小麥劑量Table 1 Different concentrations of fluoromethylbenzene used on wheat seeds

1.2.2 小麥種子的萌發(fā)率 將適量的小麥種子放入大型玻璃培養(yǎng)皿中加水浸泡5～6 h 并除去秕谷和雜質(zhì)。過濾掉水分和雜質(zhì)后用30%的次氯酸鈉溶液浸泡5 min 消毒。滅菌后的種子使用滅菌水重復(fù)沖洗以除去殘留的消毒液，之后進(jìn)行拌種處理。

小麥種子（每份200 顆）處理：將小麥種子置于放有浸潤水的兩層紗布培養(yǎng)皿中人工氣候培養(yǎng)箱（15 ℃；濕度50%）培養(yǎng)一周后統(tǒng)計其萌發(fā)率[8]。

種子萌發(fā)率=（發(fā)芽種子粒數(shù)/供試種子粒數(shù)）*100%

1.2.3 植株種植 土壤分別種下不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯處理過的小麥種子和正常種子。每盆均種小麥種子40 顆，共7 盆，全部土壤接菌。之后放入人工氣候培養(yǎng)箱（MLR-352H，USA）（15 ℃培養(yǎng)30 d；50%濕度）培養(yǎng)，待小麥抽穗期將其移動至普通溫室（23 ℃；50%濕度）進(jìn)行培養(yǎng)至成熟。

1.2.4 小麥光腥黑粉菌的培養(yǎng) 將5～6 個小麥光腥黑粉菌菌癭（視菌癭大小而定）碾碎，所得冬孢子粉收集到一個2 mL 的離心管中，加入2 mL 蒸餾水后經(jīng)紗布過濾掉雜質(zhì)，制成其冬孢子懸浮液。之后將其離心去除上清液，加入0.25%次氯酸鈉溶液消毒5 min，輕搖使其處于混勻狀態(tài)。再次離心棄上清并加入2 mL 滅菌水，重復(fù)三次獲得最終懸浮液。利用血球計數(shù)板在光學(xué)顯微鏡下測定其濃度，稀釋后保證冬孢子濃度調(diào)節(jié)至106 個/mL 備用[9]。

按1%的比例在水瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)混入青霉素-鏈霉素雙抗并倒板，每個培養(yǎng)皿上涂布200 μL 已調(diào)好濃度的冬孢子懸浮液并封口。所有平板置于15 ℃、光照1 Lx、相對濕度50%的人工培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)14 d 后開始在全自動倒置研究級熒光顯微鏡下觀察其萌發(fā)情況，隨后每隔16 h 觀察一次并記錄其菌絲的生長狀況，待菌絲生長到侵染菌絲階段時可收集所有菌絲，用于接種[9]。

1.2.5 統(tǒng)計病株并計算發(fā)病率 待小麥長至成熟期觀察其穗部發(fā)病癥狀。同時，接種后的小麥生長至孕穗期時，在小麥葉片上取樣進(jìn)行侵染檢測。植株發(fā)病率=(染病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種對小麥種子萌發(fā)率的影響

由表二得出，1.5%推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯拌種小麥、3%推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯拌種小麥和5%推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯拌種小麥的小麥種子萌發(fā)率相同且均達(dá)到100%。同時，該數(shù)據(jù)表明氟環(huán)·咯·甲苯推薦劑量拌種小麥的萌發(fā)率低于對照的萌發(fā)率為50%，而用其1.5 倍推薦劑量拌種后的小麥種子萌發(fā)率低至5%。綜上所述，過度使用該農(nóng)藥拌種將會抑制小麥種子萌發(fā)。

表2 不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種對小麥種子萌發(fā)率的影響Table 2 Effects of different concentrations of fluoromethylbenzene on the germination rate of wheat seeds

2.2 不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種對小麥光腥黑穗病的防治效果的影響

由表三可知，五種不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種小麥的發(fā)病率均低于對照組發(fā)病率，其中最低發(fā)病率為15%，分別是5%推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯、推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯和1.5 倍推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯拌種的小麥。同時，結(jié)合萌發(fā)率數(shù)據(jù)，選定5%推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯為最佳該農(nóng)藥拌種劑量。

表3 不同濃度氟環(huán)·咯·甲苯拌種對小麥光腥黑穗病發(fā)病率的影響Table 3 Effects of different concentrations of fluoromethylbenzene on the incidence of wheat common bunt

3 討論

科學(xué)合理的施藥技術(shù)不僅是發(fā)揮藥劑最大效用的基礎(chǔ)，也是影響防治效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[10]。小麥光腥黑穗病是一種很難防治的小麥病害，其前期不易觀察到危害癥狀，后期出現(xiàn)癥狀后防治困難或無法防治[11]。目前選育抗病品種是防治小麥光腥黑穗病的主要手段，然而隨著小麥光腥黑粉菌的生理小種不斷增加，其抗病品種會喪失其抗性，這時化學(xué)農(nóng)藥會對其病害防治起到應(yīng)急作用[13]。但由于隨著化學(xué)農(nóng)藥的使用劑量和施藥次數(shù)的增加，會使農(nóng)藥對該病害的防效下降，另外化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境污染重，殘留量高。因此，探索如何有效地使用種衣劑拌種對防治該病害有重要的意義。

4 結(jié)論

本試驗在室內(nèi)盆栽條件下設(shè)置了農(nóng)藥氟環(huán)·咯·甲苯拌種的五種不同濃度，確定了氟環(huán)·咯·甲苯拌種小麥防治小麥的最優(yōu)使用劑量為5%推薦劑量氟環(huán)·咯·甲苯。由于此試驗在室內(nèi)進(jìn)行條件穩(wěn)定小麥健康狀態(tài)良好，防治效果還有提升空間。由此可見，氟環(huán)·咯·甲苯對小麥光腥黑穗病有很好的保護(hù)作用和治療作用，且不影響小麥的長勢。

此試驗還表明高濃度的氟環(huán)·咯·甲苯拌種不僅不會保護(hù)小麥種子正常生長，還會抑制其生長。因此要適量使用該農(nóng)藥拌種以確保小麥種子正常健康的生長。該試驗在室內(nèi)試驗，各種條件相對穩(wěn)定，而田間生產(chǎn)的不可控變量居多，農(nóng)藥防治需要結(jié)合田間的實際情況選擇正確的施藥方法[12]。本試驗數(shù)據(jù)僅為田間小麥光腥黑穗病的防治提供參考。