趙挺祺，李時榮，王靜媛，韓希然，胡飄飄，烏云嘎，徐曉艷

近年肺癌侵襲、轉移、生長及預后的相關基因成為研究熱點，LASS2/TMSG1基因是新發(fā)現(xiàn)的抑制腫瘤生長、侵襲的指標。馬春樹等[1]從前列腺癌細胞中分離出TMSG1基因；上海復旦大學遺傳學研究所克隆出LASS2與TMSG1高度同源[2]，因此稱該基因為LASS2/TMSG1基因。目前發(fā)現(xiàn)LASS2/TMSG1過表達可促進多種腫瘤細胞的凋亡并抑制其侵襲，如前列腺癌、結直腸癌、乳腺癌等[3-8]；但在肺癌中關于LASS2/TMSG1的報道較少。因此，本實驗采用免疫組化SP法檢測LASS2/TMSG1在非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表達，分析LASS2/TMSG1的表達與肺癌臨床病理特征及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料收集2014年1月1日～2016年12月31日內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院行手術切除經病理診斷為NSCLC標本87例，其中男性55例，女性32例，平均年齡(58.32±4.58)歲；同時收集癌旁正常組織25例，其中男性15例，女性10例，平均年齡(58.69±6.41)歲。患者均有完整的臨床資料，術前均未接受放、化療。組織學分級：鱗癌43例、腺癌27例、其他類型癌17例。無淋巴結轉移37例，有淋巴結轉移50例(送檢淋巴結證實至少1枚淋巴結有轉移)。對所有病例進行電話隨訪，截止日期為2018年11月，其中25例失訪。

1.2 方法標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，行常規(guī)HE染色。采用免疫組化SP法染色，實驗操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行，以PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照。兔抗人Anti-LASS2多克隆抗體購自Abcam公司，SP超敏試劑盒(鼠/兔)、DAB顯色試劑盒，均購自北京博奧森公司。

1.3 結果判定LASS2/TMSG1以細胞膜和細胞質顯示棕色顆粒作為蛋白陽性。進行半定量積分判斷：按陽性細胞著色強度計分：黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按陽性細胞百分數(shù)計分：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將兩項得分結果相乘：0～4分為陰性(-)，5～12分為陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計學分析應用SPSS 22.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。各組率的比較應用χ2檢驗。相關分析采用Spearman等級相關分析。采用Log-rank法進行生存曲線的比較；預后影響因素采用Cox回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 LASS2/TMSG1在NSCLC組織和癌旁正常組織中的表達NSCLC組織和癌旁正常組織中LASS2/TMSG1定位于細胞膜和細胞質(圖1)。LASS2/TMSG1在NSCLC組織和癌旁正常組織中的陽性率分別為24.13%(21/87)和60.00%(15/25)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，表1)。

表1 NSCLC和癌旁正常組織中LASS2/TMSG1的表達

2.2 LASS2/TMSG1表達與NSCLC臨床病理特征的關系Spearman相關分析顯示，NSCLC中LASS2/TMSG1蛋白表達與分化程度、淋巴結轉移呈負相關(P<0.05)，與患者年齡、性別、腫瘤大小、是否吸煙、民族無相關性(P>0.05)。LASS2/TMSG1表達與組織學類型相關，LASS2/TMSG1蛋白在腺癌中的表達高于鱗癌(表2)。

圖1 LASS2/TMSG1在NSCLC組織及癌旁正常組織中的表達：A.鱗癌及癌旁正常組織中LASS2/TMSG1的表達，SP法；B.腺癌及癌旁正常組織中LASS2/TMSG1的表達，SP法；C.鱗癌(癌團)及癌旁正常組織(正常支氣管組織)；D.腺癌(細胞復層有異型)及癌旁正常組織(可見纖毛)

2.3 LASS2/TMSG1蛋白表達與NSCLC患者預后的關系

2.3.1總生存期 本組87例患者中52例獲得隨訪資料，生存時間3～36個月，平均生存時間21.25個月。

2.3.2LASS2/TMSG1表達與NSCLC患者生存率的關系 LASS2/TMSG1陽性組和陰性組平均生存時間分別為27.52、20.26個月，中位生存時間為30.00和18.00個月。Log-rank法比較兩組生存率差異有顯著性(χ2=6.237，P=0.013)，LASS2/TMSG1陽性組的生存率明顯高于陰性組(圖2)。

圖2 LASS2/TMSG1表達與NSCLC患者預后的關系

表2 LASS2/TMSG1蛋白表達與NSCLC臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3.3Cox多因素回歸分析 本組對NSCLC患者性別、年齡、民族、是否吸煙、腫瘤大小、組織學類型、病理分級、是否有淋巴結轉移、LASS2/TMSG1的表達，經Cox比例風險模型進行多因素分析，結果顯示：患者性別、年齡、民族、是否吸煙、腫瘤大小、組織學分型均與NSCLC的預后無關(P>0.05)；與淋巴結轉移、LASS2/TMSG1陽性與NSCLC的預后有關(HR=1.621，P=0.01；HR=0.598，P=0.002)，且有淋巴結轉移、LASS2/TMSG1陰性的NSCLC患者預后較差。

3 討論

肺癌是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，NSCLC占肺癌患者總數(shù)的85%，并且其發(fā)病率和病死率逐年上升[9-10]。肺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉移是一個涉及多因素、多步驟和多基因參與的復雜過程。在此期間，癌癥相關基因的激活、失活和分子突變等分子病理變化導致一系列信號轉導異常，貫穿整個肺癌病變的過程。

最新發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉移抑制基因LASS2/TMSG1，對腫瘤的侵襲、轉移、增殖及凋亡等過程有一定的調控作用。Xu等[11]利用脂質體轉染法沉默PC-3M-2B4(低轉移潛能)細胞中的LASS2/TMSG1基因，結果顯示LASS2/TMSG1基因的沉默對PC-3M-2B4細胞的惡性進程起促進作用。徐曉艷等[12]利用脂質體轉染法過表達95D細胞中的LASS2/TMSG1基因，發(fā)現(xiàn)過表達LASS2/TMSG1基因抑制肺癌細胞95D的侵襲及轉移能力。左華楚等[13]在肺癌細胞系95C細胞中通過質粒轉染沉默LASS2/TMSG1基因，發(fā)現(xiàn)其能夠明顯增強肺細胞腫瘤的浸潤與轉移。上述報道提示LASS2/TMSG1基因屬于腫瘤轉移抑制基因。

本實驗主要采用免疫組化SP法檢測NSCLC中LASS2/TMSG1蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)LASS2/TMSG1在NSCLC組織的陽性率低于癌旁正常組織，說明在NSCLC的發(fā)生過程中LASS2/TMSG1可能起抑癌作用。進一步分析LASS2/TMSG1蛋白表達與NSCLC臨床病理特征的關系，發(fā)現(xiàn)LASS2/TMSG1蛋白陽性率與分化程度、組織學分型、淋巴結轉移有關，與患者年齡、性別、腫瘤大小、是否吸煙、民族無關。劉博等[14]發(fā)現(xiàn)在腫瘤分化程度低、TNM分期高、伴有淋巴結轉移的患者TMSG1的表達低。譚真等[15]發(fā)現(xiàn)LASS2/TMSG1蛋白表達與肺腺癌患者年齡、性別、腫瘤大小無關；與浸潤性腺癌亞型關系密切；淋巴結無轉移組與有轉移組相比，LASS2/TMSG1表達明顯增強。上述結果與本實驗結果一致，提示LASS2/TMSG1與肺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉移等呈顯著的負相關。

本組隨訪病例中LASS2/TMSG1陰性組患者的生存率均明顯低于陽性組。此外，本組經Cox多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)患者性別、年齡、民族、是否吸煙、腫瘤大小、組織學分類均與NSCLC的預后無關；與淋巴結轉移、LASS2/TMSG1的表達有關。有淋巴結轉移者死亡風險與無淋巴結轉移者相比，增加1.578倍；LASS2/TMSG1陰性者的死亡風險是陽性者的0.625倍。由此可見，LASS2/TMSG1陽性率越低，NSCLC患者預后越差。進一步證明，LASS2/TMSG1的表達可作為肺癌預后的可靠標志物，與文獻報道一致[14-15]，尤其在腫瘤的早期階段是一個非常重要的預后參考指標。

綜上所述，本實驗結果顯示LASS2/TMSG1在NSCLC中的陽性率低于癌旁正常組織，LASS2/TMSG1蛋白表達與分化程度、組織學分型、淋巴結轉移及患者預后密切相關，進一步證實LASS2/TMSG1表達與NSCLC的發(fā)生、進展、浸潤轉移及預后密切相關，為肺癌的臨床預防、治療提供依據(jù)。由于本實驗樣本量較少，尚需積累大樣本前瞻性的實驗進一步證實，LASS2/TMSG1有望成為治療肺癌浸潤、轉移的新靶點。