茍小軍 劉華 姚俊麗 黃勛 孔令萬 陳黎

摘要 目的：探討刺絡(luò)聯(lián)合舒利迭吸入療法治療小兒哮喘的臨床療效，并觀察其用藥前后的代謝組學(xué)變化。方法：選取2013年10月至2015年9月上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的哮喘患兒50例作為研究對象，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對照組和觀察組，每組25例。對照組采用沙美特羅替卡松粉吸入劑治療，觀察組在對照組治療的基礎(chǔ)上針刺四縫和少商穴位以及耳尖放血，間隔1 d進(jìn)行1次，周期90 d。采集患兒用藥前0 d，用藥30 d，用藥60 d，用藥90 d的尿液，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）檢測尿液內(nèi)源性代謝物，觀察治療前后2組患兒臨床癥狀評分、免疫指標(biāo)以及代謝譜的變化情況。結(jié)果：觀察組總有效率高于對照組，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;與治療前比較，2組患兒各項中醫(yī)癥候均明顯減輕，觀察組改善程度比對照組更為顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，2組免疫學(xué)指標(biāo)與治療前比較均顯著降低（P<0.05），與對照組比較（90 d），觀察組（90 d）各指標(biāo)降低程度更為明顯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。采用有監(jiān)督的分析-OPLS分析了治療前對照組和觀察組（0 d），治療后（90 d）對照組和觀察組的尿液代謝譜，結(jié)果顯示4組代謝譜分離良好，鑒定了21個相關(guān)代謝標(biāo)志物。結(jié)論：刺絡(luò)聯(lián)合舒利迭吸入療法治療小兒哮喘的臨床效果確切，可改善患兒癥狀，降低免疫指標(biāo)，其作用機(jī)制可能與丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代謝、乙醛酸和二羧酸代謝和組氨酸代謝等代謝異常有關(guān)。

關(guān)鍵詞 刺絡(luò)療法;舒利迭吸入;兒童支氣管哮喘;哮喘控制測試量表;療效觀察;代謝組學(xué);中醫(yī)證候;作用機(jī)制

Clinical Observation on the Prevention and Treatment of Asthma in Children with Joint Therapy of Meridian-Prick and Seretide Inhalation Therapy

GOU Xiaojun，LIU Hua，YAO Junli，HUANG Xun，KONG Lingwan，CHEN Li

（Department of Pediatrics，Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese Medicine of Shanghai，Shanghai 201999，China）

Abstract Objective：To investigate the clinical efficacy of prevention and treatment of asthma in children with joint therapy of meridian-prick and seretide inhalation therapy，and to study the metabolomic changes before and after drug use. Methods：A total of 50 patients selected in Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese Medicine of Shanghai，who met the inclusion criteria were randomly divided into 2 groups according to random number table，with 25 in each group. The control group was inhaled with salmeteroploxapine powder inhaler and the observation group acupunctured four sutures and acupuncture points on Shao Shang and blood on the tip of the ears on the basis of the control group. The blood was bleeded once a day and the period was 90 d. Urine was collected from patients 0 d，30 d，60 d，90 d before medication，and for 90 days for medication. Gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） was used to detect endogenous metabolites in urine，and the clinical symptom scores，immune parameters and metabolic profiles were observed before and after treatment. Results：The total effective rate in the observation group was significantly higher than that in the control group. There was a statistically significant difference between the 2 groups （P<0.05）. The TCM symptoms in the observation group and the control group were significantly reduced compared with those before the treatment （P<0.05）. The degree of improvement was more significant than that in the control group （P<0.05）. The difference was statistically significant. Both groups had significantly lower immunological parameters compared with those before treatment （P<0.05）. Compared with the control group（90 d）. The decreased degree of the indexes in the observation group （90 d）was more obvious （P<0.05），and the difference was statistically significant（P<0.05）. Additionally，the supervised analysis-OPLS was used to analyze the urine metabolic profiles of the pre-treatment control group and the observation group （0 d），and after the treatment （90 d） in the control group and the observation group. The results showed that the 4 groups were well separated and 21 related metabolic markers were identified. Conclusion：The clinical effects of pricking collateral combined with salizidine inhalation therapy for children with asthma is definite，which can improve the symptoms of children and reduce the immune index. Its mechanism of action may be related to metabolic abnormalities such as alanine，aspartate and glutamate metabolism，glyoxylate and dicarboxylate metabolism and histidine.

Keywords Meridian-pricking therapy; Seretide inhaling; Bronchial asthma with children; Asthma Control Test Scale;Clinical Observation; Metabolomics; TCM Syndrome; Mechanism

中圖分類號：R725.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.06.010

哮喘是一種慢性氣道炎癥性疾病，以反復(fù)咳嗽、喘息、胸悶和呼吸困難為特征，它也是兒童常見的慢性疾病之一。近年來，世界各地兒童哮喘的發(fā)病率持續(xù)上升，特別是幼兒，全國兒科哮喘協(xié)作小組在全國范圍內(nèi)對兒童哮喘患病率進(jìn)行了兩次調(diào)查，表明中國哮喘患兒患病率呈現(xiàn)顯著上升趨勢，嚴(yán)重威脅兒童的健康和生命[1]。伴隨GINA全球哮喘處理和預(yù)防策略的普及，哮喘兒童得到了標(biāo)準(zhǔn)化治療，但臨床實(shí)踐表明，兒童哮喘的診斷，治療和預(yù)防仍存在許多問題[2]。兒科醫(yī)生如何選擇快速、有效、簡便、經(jīng)濟(jì)的治療方案，是兒科臨床面臨的問題。刺絡(luò)放血療法，以前被稱為“刺血療法”，也被稱為“血液療法”，“刺痛療法”等，是一種獨(dú)特的中醫(yī)針灸療法。其具有操作簡單，使用方便，無不良反應(yīng)，效果快，節(jié)省時間，成本低等特點(diǎn)，已用于上百種疾病的治療，涉及各個臨床科室，因此具有廣泛的應(yīng)用前景[3-4]。基于前期的研究結(jié)果，本研究選擇刺絡(luò)與舒利迭聯(lián)合治療兒童哮喘，對兒童哮喘的預(yù)防與控制有顯著療效，為臨床治療兒童哮喘提供一種有效、簡便，易于推廣且不良反應(yīng)小的療法。另外中醫(yī)藥對疾病診斷和治療的作用越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注[5]，但由于缺乏科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來解釋中醫(yī)藥的作用機(jī)制。代謝組學(xué)是體內(nèi)所有低分子量代謝產(chǎn)物在機(jī)體受到刺激或干擾后隨時間變化的一種整體的系統(tǒng)研究技術(shù)[6]，具有把整體、動態(tài)、綜合、分析融和一體的特點(diǎn)，與中醫(yī)學(xué)的整體觀念和辨證論治思維方式上不謀而合，揭示了致病因素和機(jī)體反應(yīng)的共同結(jié)果，為中醫(yī)學(xué)研究提供了新的思路和方法[7]，代謝組學(xué)將先進(jìn)的分析技術(shù)平臺與多元統(tǒng)計學(xué)分析相結(jié)合，分析機(jī)體整體代謝輪廓的改變情況，科學(xué)地闡釋中醫(yī)藥對疾病的治療效果及其作用機(jī)制[5]。因此本研究采用刺絡(luò)聯(lián)合吸入療法防治小兒哮喘，能較快發(fā)揮療效并可有效控制病情發(fā)展，動態(tài)收集患兒尿液，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）技術(shù)，進(jìn)行尿液的檢測，尋找患兒尿液中特異性代謝產(chǎn)物，從代謝的水平探討刺絡(luò)對兒童哮喘的干預(yù)療效及作用機(jī)制?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年10月至2015年9月間上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院兒童哮喘門診收治的哮喘患兒50例作為研究對象，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對照組和觀察組，每組25例。治療過程中脫落15例，觀察組實(shí)際有效病例19例，對照組16例。觀察組中男10例，女9例，平均年齡（6.11±1.83）歲，平均身高（116.58±3.13）cm，平均體質(zhì)量（24.0±3.13）kg，平均病程（3.8±0.92）年;對照組中男9例，女7例，平均年齡（6.31±1.89）歲，平均身高（120.88±14.94）cm，平均體質(zhì)量（25.28±3.40）kg，平均病程（4.0±1.03）年。一般資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見表1。寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核并同意本方案（倫理審批號：BS201301）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)標(biāo)準(zhǔn) 2008年中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會呼吸學(xué)組制定的兒童支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。

1.2.2 中醫(yī)標(biāo)準(zhǔn) 中華人民共和國衛(wèi)生部編著的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》中肺脾氣虛證中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 1）既符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時滿足中醫(yī)肺脾氣虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)，并未用藥物治療者;2）年齡4～12歲者;3）監(jiān)護(hù)人知情同意并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 1）其他原因?qū)е碌拇?、急性哮喘發(fā)作者;2）正在接受其他疾病治療者;3）造血系統(tǒng)疾病或有原發(fā)性免疫缺陷病者;4）心、肝、腎有嚴(yán)重疾病者;5）先天性氣道畸形和小兒肺結(jié)核者等。

1.5 脫落與剔除標(biāo)準(zhǔn) 1）自行退出者（療效太差，不良反應(yīng)等）;2）失訪者;3）研究者令其退出者（依從性差;出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥;嚴(yán)重不良事件）;4）資料記錄不全者。

1.6 治療方法 對照組吸入舒利迭（Glaxo Wellcome Production，生產(chǎn)批號：EH5R）150 μg，1吸/次，2次/d，治療90 d;觀察組針刺四縫、少商、耳尖放血，隔日1次，聯(lián)合舒利迭（藥品與對照組相同）吸入150 μg，1吸，2次/d，治療90 d。針刺四縫、少商、耳尖具體方法：乙醇（75%）穴位消毒后，用左手固定皮膚，右手取一次性24號不銹鋼1寸半針，快速針刺，直或斜刺0.1～0.3 mm，停留幾秒，出針，將針刺部位按壓使針刺部位出血3～5滴，然后用棉球擦干局部血液，避免出血。

1.7 觀察指標(biāo)

1）觀察患兒治療前后的哮喘發(fā)作次數(shù)、呼吸道感染次數(shù)、噴嚏、鼻塞、流涕、出汗、納呆、面色不華、乏力、便溏等臨床癥狀改善情況。2）抽取患兒肘靜脈血5 mL，離心，分離血清，-80 ℃冰箱保存。采用日本Sysmex全自動凝血分析儀進(jìn)行酸性粒細(xì)胞計數(shù)，按照散射比濁法，采用IEMENS西門子特定蛋白測定儀測定外周血免疫學(xué)指標(biāo)：IgG、IgA、IgM、IgE、C反應(yīng)蛋白等。3）采集尿樣，檢測代謝組指標(biāo)。

1.7.1 尿液的采集 采集患兒早晨第1次尿液的中段尿液，置10 mL離心管中密封、編號，立即于-80 ℃冰箱冷凍保存，等待檢測。用藥前0 d，用藥30 d，用藥60 d，用藥90 d的早晨為樣本收集的時間點(diǎn)。

1.7.2 試劑與儀器 1）試劑：N，O-雙三甲硅基三氟乙酰胺（BSTFA+1%TMCS，sigma公司）;鹽酸甲氧胺（methoxyamine hydrochloride，sigma公司）;分析純級別的肉豆蔻酸（sigma公司）、庚烷、吡啶、甲醇（購于上藥集團(tuán)）。2）儀器：氣相色譜儀（6890，Agilent公司）;質(zhì)譜儀（5975B Agilent公司）;冷凍離心機(jī)（Centrifuge 5415R，德國Eppendorf公司）;混勻儀（Vortex-Genie 2，美國Scientific Industries公司）;氮吹儀（SBH130D/3，英國Stuart公司）。

1.7.3 樣品前處理與檢測

1.7.3.1 尿液前處理 取1.0 mL尿液樣品離心10 min;移取200 μL上清液于離心管中，加入尿素酶，37 ℃反應(yīng)15 min;加入甲醇800 μL和肉豆蔻酸10 μL，搖勻，離心10 min，移取200 μL上清液于GC瓶中，氮?dú)獯蹈?加入甲氧胺50 μL，于30 ℃，反應(yīng)90 min;加入50 μL的BSTFA+1%TMCS，70 ℃反應(yīng)60 min，然后加入庚烷40 μL，搖勻即可。

1.7.3.2 氣相色譜/質(zhì)譜（GC/MS）分析條件 氣相色譜的設(shè)置：采用分流比為20∶1，進(jìn)樣1 μL，氦氣為載氣，1 mL/min的流速，280 ℃的進(jìn)樣口溫度，230 ℃的離子源溫度，150 ℃的接口溫度。見表2。

1.7.4 中醫(yī)證候評分 參考《中國支氣管哮喘防治指南（基層版）[10]以及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[9]有關(guān)哮喘的闡述，采用評分法對癥狀進(jìn)行打分，每個癥狀分4級（無、輕、中、重），每級分別對應(yīng)0、1、2、3分。觀察治療前后患兒的噴嚏、鼻塞、流涕、出汗、納呆、面色不華、乏力、便溏等中醫(yī)證候積分，無，計0分;輕度，計1分;中度，計2分;重度，計3分，分值越高代表病情越嚴(yán)重。

1.8 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 參照《支氣管哮喘防治指南》中有關(guān)療效標(biāo)準(zhǔn)擬定[11]。1）臨床控制：哮喘癥狀完全緩解，即使偶爾輕度發(fā)作而無藥物治療，可緩解并且夜間無癥狀。2）顯效：哮喘發(fā)作與治療前相比明顯減少，可參加日?；顒雍洼p中度體力勞動，不能參加體育鍛煉。3）好轉(zhuǎn)：哮喘癥狀減輕。4）無效：臨床癥狀無改善或惡化?？傆行?（臨床控制+顯效+好轉(zhuǎn)）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法 原始數(shù)據(jù)經(jīng)過格式轉(zhuǎn)換，應(yīng)用XCMS程序進(jìn)行峰識別、峰過濾、峰對齊，得到一個包括保留時間、質(zhì)荷比和峰強(qiáng)度構(gòu)成的矩陣表，然后對該表進(jìn)行中心化和歸一化，最終該表被導(dǎo)入SIMCA-P11.5軟件（Umetrics，Sweden）中進(jìn)行監(jiān)督和非監(jiān)督分析。采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計，計量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。計數(shù)資料用率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患兒療效比較 經(jīng)過90 d治療后，觀察組臨床控制7例，顯效6例，好轉(zhuǎn)5例，無效1例，總有效率達(dá)到了94.47%。對照組臨床控制4例，顯效6例，好轉(zhuǎn)2例，無效4例，總有效率是81.25%，觀察組總有效率顯著高于對照組，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.2 2組患兒中醫(yī)癥候積分比較 治療后，2組患兒各項中醫(yī)癥候與治療前比較均明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且觀察組改善程度比對照組更為顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

2.3 2組患兒治療前后免疫學(xué)指標(biāo)比較 治療后，2組患兒嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)、IgG、IgA、IgM、IgE、C反應(yīng)蛋白與治療前比較均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;觀察組各個指標(biāo)降低程度比對照組更為顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

2.4 2組患兒尿液代謝組學(xué)變化

2.4.1 2組患兒前后代謝組學(xué)變化比較 首先使用非監(jiān)督的主成份分析法—PCA，結(jié)果顯示2組患兒的尿液代謝譜不能明顯區(qū)分，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1。為了找到與發(fā)病相關(guān)的特征變量，采用有監(jiān)督的分析-OPLS，分析了治療前后（0 d和90 d）2組患兒的尿液代謝譜，結(jié)果顯示4組代謝譜分離趨勢良好，并且該模型解釋率和預(yù)測率均比較高（R2Y=0.65，Q2Y=0.85）。見圖2。

2.4.2 2組患兒篩選潛在的生物標(biāo)志物比較 基于OPLS模型，依據(jù)權(quán)重系數(shù)VIP>1。見圖3?；贕C/MS本身帶有的NIST代謝物庫及標(biāo)準(zhǔn)品代謝物譜庫，鑒定了21個差異代謝物，另外對代謝物單維濃度上的變化進(jìn)行了考察，這21個代謝物可作為診斷哮喘患兒的潛在生物標(biāo)志物。見表6。

2.4.3 2組患兒刺絡(luò)治療對尿液代謝譜的影響比較 圖3顯示，對照組治療前后（0 d與90 d）代謝譜能很好的區(qū)分，觀察組治療前后（0 d與90 d）代謝譜也能很好的分離;治療后2組代謝譜分離良好，而治療后對照組的代謝譜位于治療前對照組與觀察組的中間位置，且觀察組的代謝譜遠(yuǎn)離治療后對照組的代謝譜，從代謝的角度說明，觀察組在相同治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合刺絡(luò)治療對患兒的代謝譜產(chǎn)生了更大的影響，這種影響可能是刺絡(luò)治療產(chǎn)生的效果。另外觀察組治療前后（0 d與90 d）比較，15個物質(zhì)有顯著性差異，而對照組治療前后比較，6個物質(zhì)有顯著性差異。說明刺絡(luò)治療對哮喘患兒的生理及代謝狀況產(chǎn)生了更有效的干預(yù)作用。見表6。

2.4.4 2組患兒隨時間變化的代謝譜分析 取對照組0 d、30 d、60 d、90 d和觀察組0 d、30 d、60 d、90 d的樣本分別做0PLS代謝譜，發(fā)現(xiàn)對照組30 d樣本偏離0 d樣本，向右邊移動，對照組60 d樣本與對照組90 d樣本向右移動，位于第Ⅰ和第Ⅳ象限內(nèi)，但是這2個時間點(diǎn)的樣本交叉聚集，不能分離，說明對照組治療90 d對患兒的代謝譜影響較小。見圖4。觀察組30 d樣本偏離0 d樣本，向右邊移動，觀察組60 d樣本與對照組90 d樣本向右移動，位于第Ⅰ和第Ⅳ象限內(nèi)，但是這2個時間點(diǎn)的樣本只有個別樣本交叉，分離趨勢明顯，說明觀察組治療90 d對患兒的代謝譜產(chǎn)生交大的影響，造成這種分離的原因很可能是刺絡(luò)治療對哮喘患兒的生理及代謝狀況產(chǎn)生了更有效的干預(yù)作用。見圖5。

2.5 代謝通路分析 為了進(jìn)一步闡明哮喘患兒的代謝分布，表3找到的21種潛在的生物標(biāo)志物被導(dǎo)入在線系統(tǒng)-MetaboAnalyst中進(jìn)行代謝通路的分析。將閾值設(shè)置為0.10[12]，原因是關(guān)鍵位置的閾值大于1，能嚴(yán)重影響事件的發(fā)生，這樣的通路認(rèn)為是潛在的代謝途徑。見圖6。

3 討論

哮喘是常見的小兒呼吸系統(tǒng)疾病，屬于氣道炎性反應(yīng)疾病，由多種細(xì)胞介導(dǎo)引起哮喘的發(fā)生，癥狀為喘息、刺激、胸悶和咳嗽等表現(xiàn)，通常發(fā)生在夜間或凌晨，可以重復(fù)發(fā)生[13]。兒童正處于成長和發(fā)展的關(guān)鍵時期，如果不及時治療支氣管哮喘，可能導(dǎo)致兒童氣道重塑，進(jìn)一步引起不同程度的可逆性氣道阻塞，表現(xiàn)出喘息、呼吸困難和咳嗽等癥狀。病情危重時出現(xiàn)皮膚黏膜發(fā)紺、意識障礙等癥狀時，可能在數(shù)天或數(shù)分鐘內(nèi)危及生命[14]。

舒利迭是一種復(fù)方制劑，其主要成分為沙美特羅與丙酸氟替卡松沙。前者是一種選擇性的長效β2腎上腺素受體激動劑，能有效解除支氣管痙攣，有利于降低氣道高反應(yīng)性;后者是一種糖皮質(zhì)激素，具有抗炎、抗過敏的功效，起到解除支氣管痙攣的作用，因此舒利迭具有良好的哮喘治療效果[15]。臨床研究表明，患者長期吸入糖皮質(zhì)激素療效較好，缺點(diǎn)是氣道炎性反應(yīng)持續(xù)存在，肥大細(xì)胞等炎性反應(yīng)細(xì)胞仍釋放白三烯等炎性反應(yīng)因子，炎性反應(yīng)因子與其受體結(jié)合，促進(jìn)支氣管平滑肌收縮，參與了哮喘反應(yīng)[16]。刺絡(luò)放血療法是一種獨(dú)特的中醫(yī)針灸療法。刺絡(luò)放血通過改變經(jīng)絡(luò)中氣血虛實(shí)狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)臟腑的氣血陰陽[17]。耳尖穴屬于經(jīng)外奇穴，《厘正按摩要術(shù)》記載，“耳皮肉屬肺”。少商穴手太陰肺經(jīng)“井穴”，針刺放血少許，可祛肺經(jīng)之邪。四縫穴主治小兒疳疾、百日咳，四縫穴與肺、脾、腎有關(guān)系密切，針刺四縫可以通暢百脈，調(diào)和臟腑。耳尖、少商及四縫穴刺絡(luò)放血療法可到達(dá)肺、脾、腎同治，治本為主、兼以攻邪治標(biāo)作用[18]。

本研究結(jié)果表明：刺絡(luò)聯(lián)合舒利迭吸入療法治療小兒哮喘的臨床效果確切。針刺四縫、少商、耳尖放血聯(lián)合吸入舒利迭，達(dá)到協(xié)同作用，使藥物效果發(fā)揮到極致，使藥物的有效作用最大化，抵制了舒利迭的不良作用。刺絡(luò)放血療法具有操作簡單，使用方便，無不良反應(yīng)，效果快，節(jié)省時間，成本低等特點(diǎn)，具有廣泛的應(yīng)用前景，值得在臨床中大力推廣。

本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）檢測了兒童哮喘患兒尿液中內(nèi)源性代謝物的變化，采用有監(jiān)督的分析-OPLS分析了治療前對照組和觀察組（0 d），治療后（90 d）對照組和觀察組的尿液代謝譜，結(jié)果顯示4組代謝譜分離良好，鑒定了21個相關(guān)特異性代謝物。這21個代謝物與乙醛酸丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、二羧酸代謝和組氨酸代謝等通路密切相關(guān)，其中涉及3種通路最重要的物質(zhì)是丙氨酸、乙酸、天冬氨酸、甘油酸、組氨酸以及烏頭酸等。

組氨酸代謝在核酸、嘌呤、嘧啶和ATP的合成等方面發(fā)揮了重要作用，其合成與腸道菌群密切相關(guān)，組氨酸由腸道菌群代謝產(chǎn)生組胺[19]。組胺是過敏性疾病和炎性反應(yīng)的主要遞質(zhì)[20]，在過敏和炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。在機(jī)體病理條件下，組胺與靶細(xì)胞上的特異性抗原和抗體結(jié)合，產(chǎn)生生物效應(yīng)，釋放大量的組胺，然后進(jìn)入血液和組織中，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生過敏。組胺具有強(qiáng)大的生物活性，能夠收縮呼吸道平滑肌，引發(fā)支氣管痙攣和哮喘的發(fā)生[21]。本研究結(jié)果顯示，組氨酸是造成觀察組治療前后代謝譜發(fā)生差異的代謝物質(zhì)之一，且治療后觀察組含量較對照組降低，說明觀察組刺絡(luò)治療產(chǎn)生了更有效的干預(yù)。

據(jù)報道[22]，與哮喘有關(guān)的代謝標(biāo)記物：丙氨酸、乙酸、蘇氨酸、腺苷、馬尿酸、琥珀酸以及反式烏頭酸等涉及到低氧反應(yīng)、氧化應(yīng)激、免疫、炎性反應(yīng)、脂質(zhì)代謝和三羧酸循環(huán)等異常代謝通路。本研究發(fā)現(xiàn)烏頭酸、丙氨酸、乙酸、天冬氨酸、甘油酸等在觀察組中有異常的變化。正常人血液中酮體含量很低，只有脂肪利用率升高，血液酮體濃度才會升高[23]。本研究結(jié)果表明，刺絡(luò)聯(lián)合舒利迭治療可能與改善肺通氣改善，耗能減少有關(guān)，通過改善肺通氣調(diào)節(jié)體內(nèi)糖代謝和脂代謝供能可能是刺絡(luò)防治哮喘的一個作用機(jī)制。

谷氨酸是興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和發(fā)育、突觸傳遞、學(xué)習(xí)和記憶等方面發(fā)揮著重要的作用。在病理條件下，過量的谷氨酸會導(dǎo)致神經(jīng)缺血和神經(jīng)退行性疾病[24]。同樣體內(nèi)含量低的谷氨酸也會引起病變，更直接地引起哮喘。谷氨酸水平減少會破壞氨代謝的平衡，造成機(jī)體免疫低下、抵抗力下降而引發(fā)哮喘。本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后較治療前，谷氨酸含量上升，且高于對照組，說明患兒經(jīng)過治療后，異常的谷氨酸回歸正常水平，而且觀察組回歸正常的趨勢更大，結(jié)果提示刺絡(luò)的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)異常的氨基酸代謝，提高機(jī)體的抗氧化能力，改善氨轉(zhuǎn)運(yùn)，調(diào)節(jié)激素水平有關(guān)。

綜上所述，刺絡(luò)放血療法是中醫(yī)防治疾病的特色療法，具有操作簡單，使用方便，無不良反應(yīng)，效果快，節(jié)省時間，成本低等特點(diǎn)，經(jīng)過長期臨床實(shí)踐證明，刺絡(luò)放血療法對肺系疾病具有良好療效。目前刺絡(luò)放血療法用于哮喘的防治，臨床療效觀察方面的報道較多，而探討其作用機(jī)制的報道相對較少。本研究探討了刺絡(luò)聯(lián)合舒利迭吸入療法治療小兒哮喘的臨床療效，研究其用藥前后的代謝組學(xué)變化。結(jié)果顯示觀察組總有效率明顯高于對照組，采用有監(jiān)督的分析-OPLS分析了治療前對照組和觀察組（0 d），治療后（90 d）對照組和觀察組的尿液代謝譜，結(jié)果顯示4組代謝譜分離良好，鑒定了21個相關(guān)代謝標(biāo)志物，刺絡(luò)療法的作用機(jī)制可能與丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代謝、乙醛酸和二羧酸代謝和組氨酸代謝等代謝異常有關(guān)。本研究為刺絡(luò)的作用機(jī)制研究提供了新的研究手段，同時為哮喘發(fā)病、診斷和預(yù)后奠定了科學(xué)依據(jù)。

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（2018-10-31收稿 責(zé)任編輯：王楊）

基金項目：上海市衛(wèi)計委中醫(yī)薄弱領(lǐng)域?qū)？平ㄔO(shè)項目（BRZK2016007）;上海市寶山區(qū)科委創(chuàng)新基金項目（12-E-20）作者簡介：茍小軍（1975.03—），男，博士，副主任藥師，研究方向：臨床藥學(xué)與體內(nèi)代謝研究，E-mail：gouxiaojun1975@163.com通信作者：陳黎（1967.06—），女，碩士，主任醫(yī)師，研究方向：兒科臨床常見疾病、多發(fā)病的診斷與治療，E-mail：Lichen123456@aliyun.com