陳德祥，李程程

（1.大方縣中醫(yī)醫(yī)院 檢驗科，貴州 畢節(jié) 551600；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 產(chǎn)前診斷中心，貴州 貴陽 550001）

0 引言

抗凝血酶III（Antithrombin III，AT III）由肝細(xì)胞分泌產(chǎn)生，是機體中主要的抗凝血因子，監(jiān)測抗凝血酶III的水平在臨床上有著極為重要的意義。根據(jù)ISO15189和美國《臨床實驗室改進修正法案》（CLIA’88）的規(guī)定，需要在使用新診斷試劑盒前對其各項性能指標(biāo)進行逐一驗證[1]。故本試驗將對Sysmex抗凝血酶III測定試劑盒在我院Sysmex CS5100的性能指標(biāo)進行驗證，以判斷是否滿足試劑說明書及相關(guān)法規(guī)的要求。

1 對象與方法

1.1 對象

根據(jù)WS/T406-2012[2]和CLSI EP文件制定性能驗證方案。試劑與儀器:Sysmex抗凝血酶III測定試劑盒、Sysmex CS5100。

1.2 方法

（1）最低檢測限測定:采用同一批號試劑，重復(fù)測定接近零濃度樣本10次，計算變異系數(shù)（CV）值，以CV不大于10%為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（2）精密度測定:參考CLSI EP5-A2文件[3]和WS/T406-2012文件要求，批內(nèi)精密度測定采用同一批產(chǎn)品，測定兩個濃度水平的血漿標(biāo)本，要求其中一個標(biāo)本檢測結(jié)果在參考值范圍，而另一個標(biāo)本檢測結(jié)果為異常值。每個標(biāo)本連續(xù)重復(fù)測定11次，計算批內(nèi)精密度CV，以正常水平不高于6%，異常水平不高于12%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)；批間精密度測定采用同一批產(chǎn)品，測定兩個濃度水平的血漿樣本，連續(xù)測定20天，每天測一次，計算批間變異系數(shù)CV，以正常水平不高于9%，異常水平不高于15%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（3）正確度相對偏差:取10份參考區(qū)間內(nèi)的標(biāo)本，每個測2次，計算20次以上檢測結(jié)果的均值，以通過ISO 15189實驗室的測定均值為標(biāo)準(zhǔn)，計算偏差，以不高于10%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（4）線性范圍:選取一份接近預(yù)期上限的高濃度血漿（H），分別按100%、80%、60%、40%、20%和10%的比例進行稀釋，每個稀釋度重復(fù)測定2次，將實測值與理論值作比較，驗證線性范圍。以試劑說明書規(guī)定的R＞0.975，a=1±0.05為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（5）參考區(qū)間:參考NCCLS C28-A2文件[4]，選擇20個能夠代表實驗室的健康總體的樣本進行測試，20個參考個體的檢測值在驗證參考區(qū)間之外的樣本應(yīng)不超過1例。

1.3 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用Microsoft 2013及SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。采用K-S正態(tài)分布檢驗來檢查數(shù)據(jù)正態(tài)性，以P＞0.05表示數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，正態(tài)分布資料以（）表示。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05表示相關(guān)具有統(tǒng)計學(xué)意義。線性回歸采用簡單線性回歸分析，P＜0.05表示回歸具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 最低檢測限測定

重復(fù)檢測接近零濃度的樣本10次，結(jié)果分別為16%、14%、14.8%、14.9%、14.1%、14.7%、14.8%、13.7%、15.6%、14.5%，CV=4.78%，CV ≤10%，符合說明書規(guī)定，驗證通過。

2.2 精密度測定

結(jié)果如表1所示，批內(nèi)精密度測定兩個濃度水平的CV分別為0.44%、0.89%，均分別小于6%和12%；批間精密度兩個濃度水平的CV分別為為4.34%、6.14%，均分別小于9%和15%。以上結(jié)果說明精密度驗證通過。

表1 精密度的測定

2.3 正確度相對偏差測定

如表2所示，以比對實驗室結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，得出的相對偏差小于規(guī)定值10%，驗證通過。

2.4 線性范圍測定

如表3所示，在7.7-96.25%區(qū)間內(nèi)，獲得線性回歸方程y=0.9585x+1.1552，相關(guān)系數(shù)r=0.9985，a=0.9585，均符合試劑說明書規(guī)定的r＞0.975，a=1±0.05。

2.5 參考區(qū)間

表2 正確度相對偏差測定

表3 線性范圍驗證

如表4所示，超出參考區(qū)間的樣本數(shù)為1例（參考范圍:75-125%），符合說明書規(guī)定，驗證通過。

表4 參考區(qū)間驗證

3 討論

檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性是對所有臨床檢驗實驗室的基本要求，也是所有臨床檢驗實驗室所必須重視的。為了獲得準(zhǔn)確和可靠的檢驗結(jié)果，檢驗科在引入新的檢測試劑時，即使試劑廠商已提供了符合國家標(biāo)準(zhǔn)的性能檢測指標(biāo)，也要在實驗室對試劑進行性能驗證[5]。

本試驗對我檢驗科新引入的Sysmex AT III進行最低檢測限、精密度、正確度、線性范圍及參考區(qū)間進行驗證，以判斷該試劑是否滿足要求。結(jié)果表明，該檢測試劑盒各項性能指標(biāo)均符合產(chǎn)品說明書和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。說明Sysmex AT III檢測試劑在Sysmex CS5100全自動凝血分析儀上表現(xiàn)出較好的性能狀態(tài)，能滿足醫(yī)院臨床需求。