胡國娟

（白銀市白銀區(qū)獸醫(yī)局，甘肅 白銀 793900）

目前，規(guī)?；庇龍鼍捎萌斯な诰姆绞竭M(jìn)行配種，更加高效、快捷。大型養(yǎng)殖場都建立了自給的公豬站，提供給繁育場用于配種。精液在采集、檢測、稀釋、分裝、保存、運(yùn)輸過程等，因為操作不合理，而降低精液品質(zhì)。因此，提高養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)鏈上各個環(huán)節(jié)顯得尤為重要。

研究發(fā)現(xiàn)，反映精液品質(zhì)的因素主要有精子活力和保存時間兩個方面，而提高精子活力和保存時間也受到了眾多因素的影響。研究人員普遍認(rèn)為公豬的遺傳因素、年齡、日糧、環(huán)境、管理及疾病等因素是影響公豬精液品質(zhì)好壞的重要因素[1]。本文通過對精液的采集、稱量、稀釋、檢測精子活力和密度以及封裝保存的方法，搜集了有關(guān)稀釋度、采精頻率、保存溫度等相關(guān)因素的數(shù)據(jù)，對比分析了大白豬精子活力和保存時間的影響，為建立最佳的精子保存方法提供參考。

1 影響精液品質(zhì)的因素

1.1 稀釋度

人工授精采取的精液不會立刻投入使用，考慮到受精概率，稀釋后的精液一方面可以防止浪費，另一方面也有助于提高母豬受孕率。不稀釋的精液，因為在精液中副性腺分泌物的濃度高，加入稀釋液后副性腺分泌物得到稀釋，因而鞏固了原生質(zhì)膜，同時稀釋液還供給精子充分的營養(yǎng)物質(zhì)，提供緩沖劑，保持精液適當(dāng)?shù)膒H值，為較長期保存和長途運(yùn)輸提供了便利[2]。

精液是通過一定量的稀釋粉與蒸餾水配比后使用，稀釋粉的品質(zhì)也會對精液產(chǎn)生影響。經(jīng)過一定比例稀釋后，可以使每次采取的精液發(fā)揮最大效用，不僅可以用于多頭母豬的配種，也可以降低種豬淘汰率。

1.2 采精頻率

小公豬訓(xùn)練成功后，每隔5 d采精一次，成年公豬每隔2 d即可采精。精子從精原干細(xì)胞到生成具有受精能力的成熟精子大約需要42 d才能完成，采精頻率過高，其品質(zhì)差、密度小、活力低；采精頻率過低，精子會在附睪內(nèi)大量積壓，使得采集的精液精子活力較差，畸形率高，同時精子產(chǎn)生的大量活性氧（ROS）與精子質(zhì)膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成精子質(zhì)膜損傷，精子活率下降，不適合配種[3]。

經(jīng)過對比研究發(fā)現(xiàn)，采精頻率在一定范圍限度內(nèi)時，對種豬的影響最小，淘汰率也最低，精液品質(zhì)也相對較好。采精次數(shù)太少，會導(dǎo)致精液在附睪中積壓過多，影響精子質(zhì)量；同時，采精次數(shù)過多不僅會影響種豬性欲，也會由于附睪產(chǎn)精子供應(yīng)不足，采集的精液大多為精清。

1.3 保存方法

截至目前，將豬精液常溫保存3d以上而保持良好受精率的稀釋液配方尚未取較好的結(jié)果[4]。研究發(fā)現(xiàn)，豬精液最適合常溫保存，在15～25℃ 的溫度下，由于微生物生長迅速而影響精液質(zhì)量，使得精液的保存時間和成活率都不高[5]。當(dāng)精子處于休眠狀態(tài)時，活力較穩(wěn)定，從而可以延長保存時間。

1.4 其他因素

本實驗全部采用3～4月份1～2歲的大白豬，因此不考慮種公豬品種以及年齡、季節(jié)的影響。不同品種的種公豬其精液密度會因其遺傳特性有所差異，而種公豬的精液密度與總產(chǎn)仔數(shù)、初生窩重、窩產(chǎn)活子數(shù)有很強(qiáng)的正相關(guān)關(guān)系[6]。對于不同使用年限的公豬，采集的精液質(zhì)量也是不同的。剛開始進(jìn)行馴化、誘情的小公豬不僅采精量少，而且精液質(zhì)量也相對較差。一般來講，投入生產(chǎn)1～2年左右的種公豬生產(chǎn)的精液品質(zhì)是最好的。達(dá)到一定年限，將會按照種公豬淘汰規(guī)則定期淘汰不能繼續(xù)生產(chǎn)的種公豬。

嚴(yán)格執(zhí)行操作流程，保持干凈無菌的環(huán)境，可以有效地避免精液污染。因此公豬站的建立也是按照SPF 標(biāo)準(zhǔn)建立的。

公豬的飼養(yǎng)環(huán)境條件要求很高，濕度不宜太大，一般控制在65%左右。公豬對于熱的應(yīng)激遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于冷應(yīng)激；溫度范圍在18～22 ℃ 可以使公豬感到舒適。公豬舍在冬天溫度應(yīng)該在15 ℃以上，夏天在30 ℃ 以內(nèi)，超過或低于相應(yīng)限度均會影響公豬的誘情，降低公豬性欲，從而影響精液質(zhì)量。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 精液的采集 試驗豬來自于白銀區(qū)武川鄉(xiāng)李家豬場1～2歲大白種公豬。一般采用徒手采精法，將經(jīng)過馴化的公豬擠出尿液后引至假母臺，通過母豬尿液或公豬精液對其誘情，引發(fā)公豬性欲，待公豬陰莖呈螺旋狀抽動，用手卡在陰莖頭部，然后用保溫杯接取精液即可。此過程必須保證采精環(huán)境和工具經(jīng)過消毒滅菌。然后將比較濃稠的部分收集保存，經(jīng)過過濾處理后保存于保溫杯中，放入實驗室進(jìn)行檢測。盡量選擇色澤光鮮，氣味正常，活力達(dá)到 80%以上的精液進(jìn)行對比研究。不同的采精技術(shù)對結(jié)果有影響，因此只選擇同一采精員采集的精液作為實驗材料。

2.1.2 儀器設(shè)備 可調(diào)精液保存箱、恒溫水浴鍋、電子顯微鏡（400倍）、37 ℃ 保溫板、精液封裝機(jī)、離心管、恒溫磁力加熱攪拌器

2.2 方法

2.2.1 不同稀釋度對精子活力和保存時間的影響 按每500 g稀釋粉與1 000 ml蒸餾水的比例配置成稀釋液，放置在攪拌器上攪拌15 min后，靜置15 min，二次攪拌15 min后再靜置15 min，然后與原精混合。

用離心管將靜置后的稀釋液與原精按1:1、1:3、1:6、1:9、1:12的比例混合，每日靜置于37℃的保溫板上分別鏡檢一次（鏡檢后存于可調(diào)精液保存箱中，每次鏡檢前均需在恒溫水浴鍋中加熱），根據(jù)鏡檢結(jié)果計算精子活力，記錄活力大小，觀察是否有死精已經(jīng)精液的粘連程度，判斷精子畸形率。

精子的活力是指原精液在37℃ 下呈直線運(yùn)動的精子占全部精子總數(shù)的百分率[7]。因此，鏡檢時需要將精液放在保溫板上，使精液溫度達(dá)到37 ℃。

2.2.2 采精頻率對精子活力的影響 白銀區(qū)武川鄉(xiāng)李家豬場存欄種豬有35頭，可以采精的種豬有19頭，在達(dá)到采精標(biāo)準(zhǔn)的種豬中隨機(jī)抽取9頭，分別觀察記錄一個月內(nèi)正常采精次數(shù)下采精量的多少，檢測精子活力大小，記錄對應(yīng)耳牌號、采精日期、采精量、活力比、密度、采精員。對采精量、活力比、密度求均值進(jìn)行對比。凡能參加人工授精采精的公豬，每3 d采精1次，完全能滿足周邊母豬配種的需要[8]。在精液需求量不是過多的情況下，采精次數(shù)應(yīng)該保持在一定限度內(nèi)。

2.2.3 不同常溫保存方法對精子活力的影響 精液保存技術(shù)通過降低或抑制精子的新陳代謝強(qiáng)度從而達(dá)到延長精子在體外存活時間的目的[9]。將配制好的同一種豬同比例精液（本實驗中用1:9）等量分成6份置于離心管中，放在 37 ℃ 保溫板上，將6份精液分次放入可調(diào)精液保存箱中儲存1 h ，溫度分別調(diào)為15 ℃、17 ℃、19 ℃、21 ℃、23 ℃、25 ℃，連續(xù)觀察5 d，記錄觀察精子活力變化。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同稀釋度與精子活力和保存時間的關(guān)系

不同比例稀釋液下精子活力變化差異顯著，也間接影響其畸形率，表1為不同稀釋度下精子活力大小，畸形變化和保存時間的關(guān)系對比。從表1可以看出在1:1、1:3、1:6條件下，第五天時精子基本失去活力。第四天時通過精子的粘連程度來看，此時精子畸形率最高，不宜使用。而在1：9和1:12條件下，精子保持較高活力狀態(tài)的保存時間可以達(dá)到第五天且畸形率低。就對比結(jié)果看，精子在1:9條件下品質(zhì)最佳。

表1 不同稀釋度與精子活力和保存時間的關(guān)系

表2 采精頻率與精子活力的關(guān)系

3.2 采精頻率與精子活力的關(guān)系

針對所選種豬，將采精量、活力比以及密度求均值后進(jìn)行比較。表2為同一品系大白豬在4月份不同采精次數(shù)采精量均值和活力比均值的對比。

從表2可以看出采精次數(shù)在5～6次的種豬采精量相對普遍較高，且活力比也較為穩(wěn)定。就對比結(jié)果來看，一頭種豬一個月內(nèi)的采精次數(shù)需在5～6次，過少或過多的采精頻率均會影響精子活力，降低精液品質(zhì)。

3.3 不同保存溫度與精子活力的關(guān)系

為制作更高品質(zhì)的精液，將溫度范圍精確到單個溫度值波動范圍內(nèi)。表3連續(xù)觀察記錄了不同溫度下精子活力大小的變化關(guān)系。

表3 不同保存溫度與精子活力的關(guān)系

從表3可以看出，精液儲存在略低的溫度下可以延長精子的存活期，而在17 ℃ 下精子活力最為穩(wěn)定，基本處于休眠狀態(tài)，在植入母豬子宮內(nèi)時由于溫差受到的應(yīng)激反應(yīng)最低。因此，可以選用17 ℃ 精液保存箱保存，以提高精液質(zhì)量。

4 總結(jié)

影響精液質(zhì)量的因素還有很多，除了上述的公豬年齡、季節(jié)、稀釋液對精液質(zhì)量的影響外，影響精液質(zhì)量的因素還有飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)水平、采精操作、保存運(yùn)輸?shù)萚10]。綜合考慮影響精液品質(zhì)的不同因素，能夠大范圍影響精液品質(zhì)的因素主要有配比稀釋液的濃度、月均每頭豬的采精頻率和保存時間及溫度的控制。

一是原精液與稀釋液的配制比例應(yīng)該控制在1:9左右，可以有效維持精子活力，降低畸形率。二是每頭可正常生產(chǎn)的大白豬每月采精頻率應(yīng)控制在5～6次，可以維持公豬良好的生產(chǎn)狀態(tài)，延長使用期限。三是精液保存溫度應(yīng)控制在17℃，盡量保證隨產(chǎn)隨用，減少儲精積壓，保證精液活力。四是建立與現(xiàn)代人工受精技術(shù)相匹配的SPF公豬站。SPF 公豬站的建立、精液采集的自動化、更加完善的精液評估、精液分裝方便安全、自動輸精和子宮深部輸精等技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用，使人工授精技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用逐步提高和完善[11]。