王家培， 余四九， 王家鵬， 余秀偉， 潘 武

(1. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅 蘭州 730070； 2. 貴州省黔東南苗族侗族自治州雷山縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 雷山 557100))

雷山縣養(yǎng)羊歷史悠久，目前主要飼養(yǎng)有黔東南小香羊、貴州黑山羊、貴州白山羊、黔北麻羊。據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，2018年全縣存欄羊3.8萬只，其中黔東南小香羊3.1萬只(占81.58%)，分布幾乎覆蓋全縣。飼養(yǎng)方式主要以放養(yǎng)為主，多數(shù)養(yǎng)羊戶對(duì)羊病尤其是絳蟲病、肺絲蟲病、肝片吸蟲病、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病等寄生蟲病的預(yù)防意識(shí)較淡薄。寄生蟲病通常癥狀表現(xiàn)不明顯，為慢性消耗性疾病，常導(dǎo)致產(chǎn)肉量不高，養(yǎng)羊經(jīng)濟(jì)效益低。為了解雷山縣飼養(yǎng)羊群的寄生蟲感染情況，2019年對(duì)雷山縣羊絳蟲(Moniezia)、肺絲蟲(D.filaria)、肝片吸蟲(Fasciola.hepatica)、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchuscontortus)4種主要蠕蟲開展調(diào)查，為防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受檢羊選擇雷山縣萬城食品有限公司屠宰場(chǎng)中來自雷山縣境內(nèi)的羊286只作為調(diào)查對(duì)象。

1.1.2 主要試劑羊肺絲蟲酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)試劑盒、羊肝片吸蟲酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)試劑盒，南京森貝伽生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 寄生蟲的調(diào)查和記錄方法先調(diào)查待宰羊的來源，做好來自的鄉(xiāng)鎮(zhèn)和飼養(yǎng)模式(常年存欄數(shù)≥50只為規(guī)模場(chǎng)，常年存欄數(shù)<50只為散養(yǎng)戶)等記錄。被選為調(diào)查對(duì)象的羊先用無抗凝劑真空采血管頸靜脈采血5 mL，填寫相應(yīng)標(biāo)簽后保存，然后屠宰取出內(nèi)臟，分離各器官，按照先解剖時(shí)糞便觀察和檢測(cè)，然后糞便恒溫培養(yǎng)檢測(cè)和血清檢測(cè)的順序進(jìn)行調(diào)查，做好相應(yīng)記錄。

1.2.2 絳蟲檢查及判斷

1.2.2.1 檢查方法和順序(1)剖開胃和腸，肉眼觀察內(nèi)容物中是否有成蟲或幼蟲。(2)從胃的5個(gè)不同部位、小腸的3個(gè)不同段位和大腸的3個(gè)不同段位分別取出份量相當(dāng)?shù)募S便共100 g，混合后置于適量清水中，用玻璃棒將糞便攪拌均勻，靜置沉淀10～20 min，棄去上清液，再于沉淀物中重新加入清水，重復(fù)5次，最后取部分沉淀物于黑色背景，肉眼或用放大鏡進(jìn)行觀察。(3)將沉淀物在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察鑒定。(4)按第2步取樣法取糞便100 g，加上余下的所有沉淀物，加入適量水拌勻，放于培養(yǎng)皿中置37 ℃ 恒溫箱中培養(yǎng)14 d后，再對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行觀察和檢測(cè)[1，2]。上述4步觀察和檢測(cè)順序中，只要其中1個(gè)步驟檢查到絳蟲或蟲卵，即視為該羊感染絳蟲；檢測(cè)不到的視為該羊無絳蟲感染。

1.2.2.2 成蟲或幼蟲的判斷羊的絳蟲主要是莫尼茨絳蟲，其頭節(jié)呈扁圓形，在蟲體最前端有4個(gè)吸盤，頭節(jié)后面的頸節(jié)部分不分節(jié)，再向后是由頸節(jié)生長出來的未成熟體節(jié)(可以看出一節(jié)一節(jié)的體節(jié))，再往后就是成熟體節(jié)(形狀近乎正方形)，蟲體最后為含卵體節(jié)(長方形，內(nèi)部充滿蟲卵)，全身呈乳白色或淺黃色，蟲體長1～6 m，寬16 mm[1，3]。有的蟲體靜置3～10 min后可觀察到輕微蠕動(dòng)。

1.2.2.3 蟲卵的判斷在高倍顯微鏡下，絳蟲卵一般呈無色或灰色的近圓形或三角形，直徑50～60 μm。蟲卵中央有一梨形體狀的六鉤蚴，內(nèi)外胚膜分開，中間含有或多或少的液體，并有顆粒狀內(nèi)含物[4，5]。

1.2.3 肺絲蟲檢查及判斷

1.2.3.1 檢查方法和順序用剪刀沿著喉部往肺部的氣管和支氣管切開，感染肺絲蟲的氣管和支氣管內(nèi)充有黃白色或紅色黏液，其中含有很多伸直或呈團(tuán)的蟲體。如果解剖法沒有檢查到，再進(jìn)行羊肺絲蟲ELISA檢測(cè)。

1.2.3.2 成蟲或幼蟲的判斷蟲體呈中間大、兩端逐漸變小的棒狀體，顔色多為乳白色，黑色腸管穿行于體內(nèi)；口囊小而淺；雄蟲長30～80 mm，交合傘末端分開，1對(duì)交合刺粗短；雌蟲長50～112 mm，陰門位于蟲體中部；幼蟲的前端有紐扣狀結(jié)節(jié)[1，4，6]。

1.2.3.3 蟲卵的判斷蟲卵為橢圓形，大小為(40～60)μm×(20～25)μm，有的內(nèi)含幼蟲[3，5]。

1.2.3.4 羊肺絲蟲ELISA判斷如果肉眼和鏡檢都觀察不到蟲體，再對(duì)所采樣的血液進(jìn)行羊肺絲蟲ELIAS 檢測(cè)，檢測(cè)呈陽性的判斷為感染肺絲蟲，呈陰性的判斷為無肺絲蟲感染。

1.2.4 羊肝片吸蟲檢查及判斷

1.2.4.1 檢查方法和順序用剪刀沿著膽管切開，感染肝片吸蟲病可觀察到淺黃色的唾液樣物及棕紅色的新鮮活蟲體。

1.2.4.2 成蟲或幼蟲的判斷蟲體為紅色，呈扁平葉狀，長20～35 mm，寬5～13 mm，其前端呈圓錐狀突起，頭錐基部變寬，形成肩部，肩部以后逐漸變窄。顯微鏡下可觀察到體表生有許多小刺，前端有口吸盤，肩部水平線中部有腹吸盤；雌雄同體，2個(gè)分支狀的睪丸前后排列于蟲體的中后部，1個(gè)鹿角狀分支的卵巢位于腹吸盤后方右側(cè)，在卵模與腹吸盤之間為盤曲的子宮，內(nèi)充滿黃褐色蟲卵[3，4，7]。

1.2.4.3 蟲卵的判斷蟲卵呈橢圓形，黃褐色，長120～150 μm，寬70～80 μm；前端較窄，有一不明顯的卵蓋，后端較鈍；在較薄而透明的卵內(nèi)，充滿卵黃細(xì)胞和1個(gè)胚細(xì)胞[3～5]。

1.2.4.4 羊肝片吸蟲ELISA判斷如果肉眼和鏡檢都觀察不到蟲體，再對(duì)所采樣的血液進(jìn)行羊肝片吸蟲ELISA檢測(cè)，檢測(cè)呈陽性的判斷為感染肝片蟲，呈陰性的判斷為無肝片吸蟲感染。

1.2.5 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲檢查及判斷

1.2.5.1 解剖檢查感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病羊的內(nèi)臟顯著蒼白；胸、腹腔及心包積水；大網(wǎng)膜和腸系膜膠樣浸潤；肝臟呈淺灰色，質(zhì)脆易爛；切開羊第四胃可觀察到胃內(nèi)容物呈淺紅色，含有大量蟲體，胃黏膜水腫，有蟲體引起的傷痕和淺潰瘍；雄蟲長10～20 mm，為淺紅色；雌蟲長18～30 mm，可見紅色的消化道和白色的生殖器相扭纏，形成紅白相間的外觀，陰門位于蟲體后半部，有一拇指狀陰門蓋；蟲卵呈卵圓形，淡黃色，長75～95 μm，寬40～50 μm[1，3，5，6，8]。

1.2.5.2 糞便培養(yǎng)檢查如果上述檢查觀察不到蟲體，則從第四胃的5個(gè)不同部位分別取出份量相當(dāng)?shù)募S便，混合置于適量清水中，用玻璃棒將糞便攪拌均勻，靜置沉淀10～20 min，棄去上清液，再于沉淀物中重新加入清水，重復(fù)5次，最后取沉渣進(jìn)行肉眼觀察或鏡檢。如果仍觀察不到，再將余下的沉渣和從第四胃的5個(gè)不同部位分別取份量相當(dāng)?shù)募S便，混合后放于培養(yǎng)皿中，置于37 ℃ 60%～70%濕度的恒溫箱中培養(yǎng)7 d后，對(duì)培養(yǎng)糞便進(jìn)行肉眼觀察和鏡檢[1，2]。以上檢測(cè)觀察到蟲體或蟲卵者則視為該羊感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲，檢測(cè)不到則視為該羊未感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲。

1.2.6 診斷和統(tǒng)計(jì)本次調(diào)查采用質(zhì)量性狀記錄法進(jìn)行定性記錄，即無論采用哪種方法，只要觀察或檢測(cè)到有1個(gè)以上的寄生蟲或蟲卵以及ELISA方法檢測(cè)呈陽性者，則診斷為感染了相應(yīng)的寄生蟲；如果都觀察或檢測(cè)不到者，則診斷為未感染相應(yīng)的寄生蟲；同時(shí)呈混合感染者也分別記錄。所記錄的數(shù)據(jù)采用質(zhì)量性狀計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，換算為感染率(%)，然后進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 季節(jié)性感染情況由表1可見：絳蟲每月均檢查到；肺絲蟲除7月份外，其他11個(gè)月檢查到；肝片吸蟲除1、7、9月份外，其他9個(gè)月檢查到；捻轉(zhuǎn)血矛線蟲除1、2、7、11、12月份外，其他7個(gè)月檢測(cè)到。從總體上看，4種寄生蟲在雷山縣羊群中均有感染。

表1 2019年各月4種寄生蟲感染情況

2.2 不同蟲體及不同養(yǎng)殖模式感染情況由表2可見：在調(diào)查的286只羊中，絳蟲感染率最高(45.11%)，其次為肺絲蟲(31.47%)、肝片吸蟲(27.27%)，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率最低(18.18%)。絳蟲與肺絲蟲、肝片吸蟲、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲比較差異極顯著(P<0.01)。肺絲蟲與肝片吸蟲、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲比較差異不顯著(P>0.05)。肝片吸蟲與捻轉(zhuǎn)血矛線蟲比較差異極顯著(P<0.01)。散養(yǎng)戶與規(guī)模場(chǎng)比較，4種寄生蟲感染率均較高，其中：絳蟲、肺絲蟲病、肝片吸蟲差異極顯著(P<0.01)，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲差異顯著(P<0.05)。

表2 4種寄生蟲感染率統(tǒng)計(jì)

2.3 混合感染情況由表3可見：規(guī)模場(chǎng)中混合感染略高于單一感染，差異不顯著(P>0.05)。散養(yǎng)戶中混合感染明顯高于單一感染，差異極顯著(P<0.01)。 規(guī)模場(chǎng)的單一感染率極顯著高于散養(yǎng)戶(P<0.01)， 混合感染率差異不顯著(P>0.05)。

表3 4種寄生蟲混合感染統(tǒng)計(jì)

2.4 區(qū)域性感染情況由表4可見：4種寄生蟲在8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)都有感染?？傮w上鄉(xiāng)鎮(zhèn)內(nèi)不同種寄生蟲的感染率差異不顯著(P>0.05)。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)間同種寄生蟲的感染率差異不顯著(P>0.05)。

表4 4種寄生蟲的區(qū)域性分布

3 結(jié)論

本次調(diào)查結(jié)果顯示：絳蟲、肺絲蟲、肝片吸蟲、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲在雷山縣養(yǎng)殖羊群中感染率均較高，其中散養(yǎng)戶的感染率顯著高于規(guī)模場(chǎng)；4種寄生蟲呈混合感染的現(xiàn)象比較普遍。

4 討論

4.1絳蟲、肺絲蟲、肝片吸蟲、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對(duì)羊群危害極大，被稱為羊的4大寄生蠕蟲[1]。從調(diào)查結(jié)果分析，這4種寄生蟲在雷山縣養(yǎng)殖羊群中均有感染，原因主要是全縣境內(nèi)總體上屬于中亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候，年均氣溫17～20 ℃，最高氣溫35.6 ℃，最低氣溫-8.9 ℃。近5年來全縣無霜期270～351 d(2019年僅14 d有霜期)，年平均相對(duì)濕度80%，冬暖夏涼，且全縣8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的氣候差異不大，都適宜這4種寄生蟲生存，全年均可感染羊，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)間的感染率差異不顯著。

4.2雷山縣目前養(yǎng)羊模式均為放牧，病羊和健康羊直接和間接接觸機(jī)會(huì)較大，寄生蟲的感染概率也較大，同時(shí)也給羊群寄生蟲混合感染提供了便利，往往是有1只羊感染寄生蟲后，同群羊或鄰近的羊群就會(huì)感染。

4.3從調(diào)查結(jié)果看，散養(yǎng)戶寄生蟲感染率明顯高于規(guī)模場(chǎng)，說明規(guī)模場(chǎng)做了一些預(yù)防工作，但效果不好，而散養(yǎng)戶基本沒有進(jìn)行寄生蟲病的預(yù)防工作，因此規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶對(duì)羊寄生蟲病的綜合防治意識(shí)還有待提高。